ИЗУЧЕНИЕ ДЕЙСТВИЯ ПАЙЛЕР-СВЕТА НА ЗАЩИТНЫЕ СИЛЫ ОРГАНИЗМА ПРИ ЛЕТАЛЬНОЙ ВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
Введение
Использована модель лабораторных животных (белые мыши) с применением cмepтельной дозы вируса гриппа AP/R/8/3 (H1N1) и последующего их лечения ПАЙЛЕР-светом.
Установлено, что лечение поляризованным, полихроматическим, некогерентным светом (ПАЙЛЕР-светом) животных зараженных летальной дозой вируса гриппа задерживало активность размножения вируса и животные не погибали, а оставались живы и на 15-й день после заражения. Инфекционная и гемагглютинирующая активность определялась в незначительных количествах, т.е. под действием ПАЙЛЕР-света вирус гриппа А не погибал, а тормозилось его размножение. За этот период происходило восстановление ингибиторной (защитной) активности и животные выживали.
Организм человека и животных зависит от различных жизненных источников энергии: света, воздуха, воды, продуктов питания и положительных электромагнитных волн поступающих из окружающей среды. Недостаточное поступление в организм жизненно важных источников энергии ведет к снижению защитных сил организма результатом которого являются различные заболевания. Наиболее распространенным и контагиозным заболеваниям является грипп. В настоящее время, несмотря на широкие научные программы по гриппу, принятых во многих странах мира, успехи в лечении гриппа довольно ограничены. Арсенал средств специфической терапии гриппа ограничен ремантадином и его аналогами. В настоящем сообщении формируется новый подход к лечению гриппа, который обосновывается на экспериментальных данных в опытах на животных.
Целью данных исследований являлось изучение эффективности действия поляризованного, полихроматического света на защитные силы организма белых мышей, предварительно зараженных cмepтельной дозой вируса гриппа.
Материалы и методы
В работу взято 330 шт. белых мышей, линии "Balba" весом 13-14 гр., 160 шт куриных эмбрионов /10-11 суточных/, вирус гриппа AP/R/8/34 /H1N1/ полученный из музея вирусных штаммов НИИ вирусологии им. Д.И.Ивановского АМН России. Вирус гриппа адаптированный к белым мышам и прошедший 4 пассажа его инфекционный титр составлял 10-1 LD50/0.1 мл. В работе использовали три дозы вируса : цельный вирус гриппа и его разведения 10-1 и 10-2 . Доза 10-1 LD50/0.1 мл была cмepтельной для белых мышей (когда погибают 100 % животных). Доза 10-2 LD50/0.1 мл - терапевтической (когда погибают 50 % животных). Прибор "Биоптрон" фирмы "Цептер Интеранациональ Украина", обладающий поляризованным, некогерентным, полихроматическим светом с длинной волны 400-2000 нм, с ежеминутной энергией света 2.4 Дж/см.
Животные были разбиты на семь групп по 10 штук в каждой. Первая, вторая, третья, четвертая, пятая и седьмая группы контрольные : первая и седьмая группы - контрольные для действия вируса гриппа А; третья группа - контрольная для действия поляризованного, некогерентного света лампы "Биоптрон"; четвертая группа - контрольная для действия физиологического раствора, используемого для разведения вируса гриппа; пятая группа - для контроля состояния здоровья животных взятых для исследований. Первая и вторая группы заражены cмepтельной дозой вируса гриппа /1LD50/0.1 мл/ Вторая группа, после заражения получила одиннадцать сеансов ПАЙЛЕР - света (поляризованный, некогерентный, полихроматический свет). Шестая группа животных, перед заражением, получила восемнадцать сеансов светооблучения, после чего была заражена вирусом гриппа в дозе 0.5LD50/0.1 мл (терапевтическая доза - когда погибает 50 % животных). После заражения эта группа животных прошла курс светолечения (восемнадцать сеансов на мышь).
Заражение животных проводилось интраназально под легким эфирным наркозом. Светооблучение проводилось со стороны спины сразу после заражения и через шесть часов после заражения в первые сутки. В дальнейшем облучение проводилось по два раза сутки на протяжении 8 суток, по 6 минут на сеанс.
На пятнадцатые сутки после заражения все животные которые остались живы были вскрыты под глубоким эфирным наркозом. У них забраны легкие и кровь. У погибших животных забраны только легкие. Легкие трижды отмыты в 0.01 М фосфатном буфере, разрезаны ножницами, растерты со стеклом в фарфоровой ступке и обработаны ультразвуком при 18 Гц по 75 секунд на приборе Soniprep 150 MSE. Вся работа проводилась на холоду. Гомогенат легких растворен в 0.01 М фосфатном буфере с рН 7.5 1:1 /1 легкое на 1 мл. В дальнейшем гомогенат центрифугировали при 7.000 об/мин 15 минут. Супернатант легких и сыворотку белых мышей использовали для определения протеазной и ингибирующей активности вируса, гемагглютинина вируса гриппа, белка и инфекционной активности вируса.
Инфекционный титр вируса гриппа в легких и в сыворотке крови инфицированных мышей определяли путем заражения 10-11 дневных куриных эмбрионов и выражали в ЭИД50/0.2 мл (эмбриональная инфекционная доза при которой 50% куриных эмбрионов погибают при введении вируса гриппа).
Для данной работы использовали 160 штук куриных эмбрионов (10-11 суточных), легкие и сыворотку крови инфицированных белых мышей ,/40 штук/ и вирус гриппа AP/R/834 / H1N1/.
Инфицированные легкие и сыворотки крови были объединены в пулы по группам животных и по суткам заражения. Для определения инфекционного титра вируса гриппа брали легкие погибших белых мышей первой группы на 4. 5 и 6 сутки после заражения. У второй группы животных брали легкие на 5. 6, 7 и 14 сутки после заражения; кровь только у животных на 14 сутки после заражения. В шестой и седьмой группах использовали легкие и кровь белых мышей оставшихся живыми на 15 сутки после заражения. Из каждого пула легких или сыворотки крови начиная с 10-1 до 10-8 на каждое разведение использовали по два куриных эмбриона. В стерильных условиях, в аллантоисную полость куриных эмбрионов вводили изучаемый материал в объеме 0.2 мл. Отверстие в куриных эмбрионах запечатывали парафином и ставили в термостат при температуре +37С на 48 часов для инкубации вируса. Через 48 часов эмбрионы переносили в холодильник при температуре +4С на 487 часов для охлаждения. При этом кровеносные сосуды сужаются и мы получаем чистую, свободную от крови, аллантоисную жидкость , в которой определяем гемагглютинирующую активность для выяснения инфекционного титра. Реакцию гемагглютинации ставили по общепринятой методике с 1% куриными эритроцитами /1/. Протеазную активность определяли по гидролизу протамина методом К.М.Веремеенко /2/ в модификации С.В.Вовчука /3/.Определение ингибиторов протеаз в гомогенатах легких и сыворотке крови и аллантоисной жидкости проводили казеиновым методом предложенным А.П.Левицким /4/. Реакцию гемагглютинации проводили по общепринятой методике с 1% раствором куриных эритроцитов. Определение белка проводили по методу W.Lowry /5/.
Результаты исследований и их обсуждение
Как показали исследования 100% гибель животных первой группы, предварительно зараженных cмepтельной дозой вируса гриппа А /H1N1/, наступала на шестые сутки. Во второй группе, которая проходила курс светолечения после предварительного заражения cмepтельной дозой вируса гриппа, погибло 80% животных. Cмepтность приостановилась на седьмые сутки после заражения.
В третьей группе, которая была контролем для поляризованного некогерентного света лампы "Биоптрон" все животные остались живы после получения 18 сеансов света.
Животные четвертой и пятой групп оставались живы на весь период исследований (15 суток).
В седьмой группе - контрольной для терапевтической дозы, вируса гриппа, 50% животных погибли на седьмые сутки после заражения.
В шестой группе - получившей терапевтическую дозу вируса гриппа и 18 сеансов поляризованного полихроматического света после заражения, 20% животных погибло через 48 часов после заражения. 80% животных выжили и остались живы на 15 сутки после заражения.
Таким образом, 20% животных зараженных cмepтельной дозой вируса гриппа и прошедшие курс светолечения, оставались живы тогда как контрольные животные не проходившие курс лечения погибали на 6 сутки после заражения. 80% животных, предварительно зараженных терапевтической дозой вируса гриппа и прошедшие курс светолечения оставались живы.
На 15 сутки после заражения, под глубоким наркозом животных вскрыли и взяли легкие и кровь для изучения изменений в органах под действием вируса и поляризованного, некогерентного полихроматического света. У погибших мышей забраны легкие.
При определении общего белка в легких животных первой группы отмечалось повышение его на четвертые сутки по сравнению с контрольной пятой группой. На седьмые сутки количество белка резко падало и животные погибали. Во второй группе начиная с шестых суток после заражения, происходило постепенное уменьшение белка. У животных оставшихся в живых количество белка на 14 сутки после заражения как в легких так и в сыворотке крови, восстанавливалось до нормы. В 3,4 и 5 группах количество белка как в легких так и в сыворотке крови мало чем отличалось от контрольной пятой группы. В седьмой группе количество белка в легких увеличено, в то время как в сыворотке крови отмечалось незначительное падение белка.
Таким образом, под действием cмepтельной дозы вируса - гриппа (1LD50/0.1 мл) в организме белых мышей изначально происходит повышение белка, а к гибели животных общий белок снижался. Под действием терапевтической дозы вируса гриппа /0,5 LD50/0.1 мл/ количество белка в легких увеличивалось в два раза на 15 сутки после заражения, а в сыворотке крови - не значительно падало.
Протеазная активность в первой и второй группах повышалась на пятые сутки после заражения. В дальнейшем она падала. В третьей группе отмечается падение протезной активности только в сыворотке крови.
В четвертой группе падение протеазной активности отмечалось как в легких ,а и в сыворотке крови полность отсутствовала. В шестой группе отмечался подъем протеазы в легких, а в сыворотке крови - падение. В седьмой группе, на 14 сутки после заражения терапевтической дозой, отклонений в протеазной активности не наблюдалось.
Таким образом, под действием вируса гриппа, физиологического раствора и поляризованного некогерентного света происходит падение протеазной активности.
У здоровых животных ингибиторная активность в легких составляла 1.16 мг/мл, в сыворотке крови -168.7 мг/мл. В первой группе повышение ингибиторной активности отмечено через 5 суток после заражения. Во второй группе значительно повышалась ингибиторная активность в легких белых мышей на 6 сутки после заражения. У выживших мышей на 14 сутки после заражения в крови отмечался резкий подъем ингибиторной активности до 120,95 мг/мл.
В третьей группе под действием поляризованного некогерентного света происходило полное подавление ингибиторной активности в легких и на 50% в сыворотке крови /80,123 мг/мл/. В четвертой группе под действием физиологического раствора наблюдалось повышение ингибиторной активности в легких до 11 мг/мл. В седьмой группе, контрольной для действия терапевтической дозы вируса гриппа в легких животных на 14 сутки после заражения повышенное количество ингибиторной активности в легких (11,7мг/мл) и крайне низкое в крови (2,167 мг/мл). В шестой группе прошедшей курс светолечения, у выживших мышей в легких не наблюдалась, ингибиторная активность, в то же время в сыворотке крови определяется подъем ингибиторной активности до 130,970 мг/мл.
Таким образом, у животных получивших курс светолечения и выживших после cмepтельной и терапевтической доз вируса гриппа в сыворотке крови отмечался подъем ингибиторной активности не зависимо от дозы заражения.
Как показали наши исследования, гемагглютинирующая активность в легких белых мышей первой группы, предварительно зараженных летальной дозой вируса гриппа AP/R/8/34, резко поднималась и ко вторым суткам достигала максимального увеличения (1:512). В дальнейшем гемагглютинирующая активность медленно понижалась и к шестым суткам, когда погибали все животные, составляла 1:20. Инфекционный титр вируса гриппа зараженных легких ко вторым суткам достигал максимальной величины (10-6). В последующие сроки титр медленно понижался. Когда происходила 100% гибель мышей на шестые сутки инфекционный титр составлял 10-2 . С пятых суток после заражения инфекционный титр вируса гриппа был выше титра гемагглютинина.
Таким образом, при заражении белых мышей летальной дозой вируса гриппа AP/R/8/34, происходило быстрое накопление инфекционной и гемагглютинирующей активности, которое приводило к стопроцентной гибели животных на шестые сутки после заражения.
Гемагглютинирующая (1:256) и инфекционная активность (10-5) максимального количества достигала к третьим суткам после заражения. На пятые сутки после заражения, когда начинали гибнуть животные гемагглютинирующая и инфекционная активность оставались на том же уровне /1:20/, что и в первой группе. На седьмые сутки гемагглютинирующая и инфекционная активность не определялись.
Таким образом, светолечение поляризованным, полихроматическим светом, животных предварительно зараженных cмepтельной дозой вируса гриппа А, задерживало размножение вируса гриппа на сутки. Инфекционная и гемагглютинирующая активность была ниже по сравнению с контрольной (1) группой. 20% животных оставались живы и на 14 сутки после заражения, в то время как в контрольной группе 100% гибель животных происходила на шестые сутки после заражения.
В контрольной группе (б) 50% гибель животных наступала на шестые стуки. На 14 сутки после заражения оставались живы 50% животных, у которых инфекционный титр вируса в легких был 10-3 и в сыворотке крови был 10-4. Гемагглютинирующая активность в легких была в титре 1:40 а в сыворотке крови была в титре 1:80.
В седьмой группе белых мышей, которые прошли курс светотерапии предварительно зараженных терапевтической дозой вируса гриппа, 80% животных оставались, живы и на 15 сутки после заражения. В легких и в сыворотке крови леченных животных отмечалась как инфекционная, так и гемагглютинирующая активность в незначительных количествах (10-1, ГА 1:2), особенно в сыворотке крови (10-2 , ГА 1:4).
Таким образом при заражении белых мышей, терапевтической /сублетальной/ дозой вируса гриппа А и прошедших курс светотерапии поляризованным, полихромным лучом 80% животных оставались живыми.
ВЫВОДЫ
- Под действием cмepтельной дозы вируса гриппа А происходило быстрое накопление инфекционной и гемагглютинирующей активности, которое приводило к 100% гибели животных на шестые сутки после заражения.
- Подавление протеазной и ингибиторной активности происходило в период максимального накопления инфекионной и гемагглютинирующей активности.
- В группах животных прошедших курс светотерапии /18 сеансов/ поляризованным, полихроматическим, некогерентным светом, предварительно зараженных cмepтельной дозой вируса гриппа, 20% животных выживали и оставались живы на 15 сутки после заражения. Под действием терапевтической (сублетальной) дозы - 80% выживали и оставались живы на весь период исследований.
- У животных контрольных групп, вирус гриппа А и поляризованный, полихроматический, некогерентный свет подавлял как протеазную так и ингибиторную активность.
- У животных прошедших курс светолечения на 15 сутки после заражения наблюдался подъем ингибиторной активности не зависимо от дозы заражения.
- Светолечение поляризованным, полихроматическим, некогерентным светом животных зараженных летальной дозой вируса гриппа задерживало активность размножение вируса. Инфекционная и гемагглютинирующая активность определялась в незначительных количествах т.е. под действием ПАЙЛЕР -света вирус гриппа А не погибал, а тормозилось его размножение. За этот период происходило восстановление ингибиторной /защитной/ активности и животные выживали.
- В легких белых мышей, зараженных cмepтельной дозой вируса гриппа происходило повышение общего белка в начале развития инфекции, а к гибели животных количество белка резко снижалось. В тоже время под действием сублетальной дозы изменений белка не наблюдалось.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ:
- М.К.Топчий, Н.П.Корнюшенко. 1967 г. //Руководство к пpaктическим занятием по вирусологии, гл-ва Серологические методы исследований. Издательство Киевского университета, стр. 129-137.
- К.Н.Веремеенко. 1980 // Кн. Ферменты в отоларингологии под редакцией К.Н.Веремеенко. Киев, стр. 147-149
- С.В.Вовчук. 1979 // Сб. Биохимические методы исследования селекционного материала. Выпуск XI, Одесса, стр.59-67
- А.П.Левицкий 1974 // Пищеварительные ферменты слюнных желез. Автореферат диссертации доктора медицинских наук. Одесса.
- W.Lowry, Baker F. 1951 // Protein measurement with the Folin reagent./ J.Biol. Chem. 193 v.265-275.
Представлено описание клинического наблюдения больного 68 лет, с первично-множественным paком кожи, у которого диагностировано 288 опухолевых очагов, 67 из которых пролечено различними методами, такими как кототкодистанционная рентгенотерапия, хирургическое иссечение, криодеструкция. ...
18 04 2024 16:33:19
Статья в формате PDF 319 KB...
17 04 2024 6:21:42
Статья в формате PDF 601 KB...
16 04 2024 5:19:53
Тюменский регион является одним из лидеров по уровню экономического развития. Устойчивое развитие его обеспечит сбалансированное решение социально-экономических задач, проблем сохранения окружающей среды в целях удовлетворения потребностей нынешнего и будущего поколений. Реализация перехода на путь стабильного развития потребует в дальнейшем формирования новой стратегии, которая оказалась бы экологически и экономически сбалансированной. ...
15 04 2024 9:29:52
Статья в формате PDF 255 KB...
14 04 2024 23:17:18
Статья в формате PDF 119 KB...
13 04 2024 21:33:33
Статья в формате PDF 307 KB...
12 04 2024 14:58:36
Статья в формате PDF 125 KB...
10 04 2024 13:47:38
Статья в формате PDF 121 KB...
09 04 2024 11:19:25
Статья в формате PDF 269 KB...
08 04 2024 16:43:55
В работе приводятся сведения относительно возможности применения тестовых заданий и биологических задач для исследования личностных особенностей учащихся и выявления одаренных детей. Показано, что использование этого подхода может способствовать повышению эффективности выявления школьников с повышенным уровнем интеллекта. ...
07 04 2024 18:36:52
Статья в формате PDF 114 KB...
06 04 2024 0:51:41
04 04 2024 17:35:34
Статья в формате PDF 110 KB...
02 04 2024 9:12:56
Статья в формате PDF 114 KB...
01 04 2024 18:39:58
Статья в формате PDF 250 KB...
31 03 2024 19:49:37
Статья в формате PDF 119 KB...
29 03 2024 23:44:19
Статья в формате PDF 105 KB...
28 03 2024 5:55:11
Статья в формате PDF 118 KB...
27 03 2024 18:51:59
Статья в формате PDF 127 KB...
26 03 2024 22:29:34
Статья в формате PDF 138 KB...
24 03 2024 11:23:28
23 03 2024 22:15:11
Статья в формате PDF 139 KB...
22 03 2024 18:36:25
Статья в формате PDF 121 KB...
21 03 2024 14:23:55
Статья в формате PDF 345 KB...
20 03 2024 20:28:56
Статья в формате PDF 321 KB...
19 03 2024 6:58:47
Статья в формате PDF 112 KB...
18 03 2024 23:29:18
Изложенные в статье результаты свидетельствуют о тождестве динамики формирования алкогольной зависимости у неэпилептической линии крыс (Вистар) и крыс с абсансной эпилепсией (WAG/Rij). ...
17 03 2024 11:29:10
Статья в формате PDF 254 KB...
16 03 2024 6:13:56
Статья в формате PDF 121 KB...
14 03 2024 15:52:32
Статья в формате PDF 110 KB...
13 03 2024 15:42:53
12 03 2024 0:12:23
Изучены ценопопуляции Pulsatilla multifida на территории Юго-Западной и Западной Якутии. Рассмотрено влияние антропогенного фактора на их состояние ...
11 03 2024 5:11:53
Статья в формате PDF 183 KB...
10 03 2024 7:35:32
Еще:
Поддержать себя -1 :: Поддержать себя -2 :: Поддержать себя -3 :: Поддержать себя -4 :: Поддержать себя -5 :: Поддержать себя -6 :: Поддержать себя -7 :: Поддержать себя -8 :: Поддержать себя -9 :: Поддержать себя -10 :: Поддержать себя -11 :: Поддержать себя -12 :: Поддержать себя -13 :: Поддержать себя -14 :: Поддержать себя -15 :: Поддержать себя -16 :: Поддержать себя -17 :: Поддержать себя -18 :: Поддержать себя -19 :: Поддержать себя -20 :: Поддержать себя -21 :: Поддержать себя -22 :: Поддержать себя -23 :: Поддержать себя -24 :: Поддержать себя -25 :: Поддержать себя -26 :: Поддержать себя -27 :: Поддержать себя -28 :: Поддержать себя -29 :: Поддержать себя -30 :: Поддержать себя -31 :: Поддержать себя -32 :: Поддержать себя -33 :: Поддержать себя -34 :: Поддержать себя -35 :: Поддержать себя -36 :: Поддержать себя -37 :: Поддержать себя -38 ::