ДИНАМИКА СОДЕРЖАНИЯ БЕЛКОВ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ СЕГОЛЕТОК КАРПА ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ВОЗДЕЙСТВИИ ТЯЖЕЛЫХ МЕТАЛЛОВ > Полезные советы
Тысяча полезных мелочей    

ДИНАМИКА СОДЕРЖАНИЯ БЕЛКОВ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ СЕГОЛЕТОК КАРПА ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ВОЗДЕЙСТВИИ ТЯЖЕЛЫХ МЕТАЛЛОВ

ДИНАМИКА СОДЕРЖАНИЯ БЕЛКОВ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ СЕГОЛЕТОК КАРПА ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ВОЗДЕЙСТВИИ ТЯЖЕЛЫХ МЕТАЛЛОВ

Мурадова Г.Р. Paбаданова А.И. Изучено влияние солей кадмия, свинца и марганца на содержание белков в сыворотке крови сеголеток карпа. Показаны разнонаправленные изменения белкового состава сыворотки крови рыб при воздействии солей тяжелых металлов, о чем можно судить на основании изменения А/G индекса. При хроническом действии ионов кадмия отмечено значительное преобладание суммарного содержания альбуминов над глобулинами на протяжении всего эксперимента, пребывание рыб в среде с ионами свинца сопровождалось более значительным ростом содержания глобулинов, тогда как при действии ионов марганца не выявлен однонаправленный хаpaктер изменения соотношения альбуминов и глобулинов. Статья в формате PDF 342 KB За последние годы вследствие антропогенной нагрузки уровень концентрации токсических веществ в природе постоянно повышается.

Из широкого спектра загрязнителей особую опасность для гидробионтов представляют тяжелые металлы [1, 2]. Важную роль в метаболизме, росте и развитии, а также адаптации гидробионтов к различным видам токсической нагрузки играют белки [3, 7].

Свинец и кадмий относятся к 1 классу токсичности. Из всех водных обитателей наибольшее токсическое действие кадмий и свинец оказывают на рыб [1]. К таким воздействиям относится образование комплекса «белок-металл» с накоплением металлотионеинов, нарушение процессов образования и трaнcпорта белков и другие реакции, показателями которых могут являться изменения в содержании различных белков в организме.

Однако, все еще мало сведений, касающихся влияния металлов, которые выступают в низких концентрациях как микроэлементы, а при высоких - проявляют свойства тяжелых металлов. К таким металлам относится марганец, который как микроэлемент препятствует развитию свободно - радикального окисления, обеспечивая стабильность структуры клеточных мембран, нормальное функционирование мышечной ткани, а также повышает интенсивность утилизации жиров, снижая уровень липидов в организме, необходимый для нормального роста и развития организма. При хроническом отравлении соединения марганца выступают как цитоплазматические яды, способные вызывать серьезные нарушения в нервной системе, почках и органах кровообращения [2].

Целью данной работы явилось изучение влияния хронической интоксикации водной среды ионами свинца, кадмия и марганца на белковый состав крови сеголеток карпа.

Материалы и методы исследования

Работа выполнена на базе лаборатории анатомии, физиологии, гистологии Дагестанского государственного университета. В эксперименте использованы сеголетки карпа (Cyprinus carpio L.) массой 100-150 г, выращенные в прудах Широкольского рыбоводного комбината Республики Дагестан. Рыбы отлавливались перед их переброской в пруды для зимовки и переносились в аквариумы объемом 250-300 литров с содержанием ацетата свинца 0,5 мг/дм3 (ПДК 0,1 мг/дм3), хлорида кадмия 0,25 мг/дм3 (ПДК 0,005 мг/дм3) и сульфата марганца 0,1 мг/дм3 (ПДК 0,01 мг/дм3). Контролем служили рыбы, содержавшиеся в чистой воде. В аквариумах создавались условия постоянного температурного (19-23 °С) и газового режима. Кормили рыб живым трубочником Tubifex tubifex. Изучали динамику содержания общего белка [8] и белковых фpaкций [5] в крови сеголеток карпа в разные сроки экспозиции рыб в водной среде с ионами тяжелых металлов (5, 15, 30 и 40 дни эксперимента).

Полученные результаты подвержены вариационно - статистической обработке методом малой выборки [6].

Результаты исследования и их обсуждение

Результаты исследования представлены в табл. 1-3 и на рис. 1-3.

Из полученных данных видно, что содержание белков в крови сеголеток карпа находится в зависимости от вида и времени действия токсиканта.

У контрольных рыб содержание белков в крови составляет 24,0 ± 1,30 г/л. Большая их часть (40,0 %) приходится на долю альбуминовой фpaкции. Остальные белки представлены α1 - (24,0 %), α2 - (18,0 %), β - (6,0 %) и γ - (7,0 %) глобулинами. A/G-индекс контрольных рыб равен 0,67, что свидетельствует о преобладании суммы глобулинов над альбуминами в 1,5 раза.

При действии ионов кадмия в течение 40 суток наблюдается значительное повышение содержания белков всех фpaкций, кроме β-глобулинов, уровень которых меняется незначительно на протяжении эксперимента. Так, наиболее значительное повышение содержания общего белка, альбуминов и α1-глобулинов (~ в 2,0 раза) отмечено на 15 день эксперимента. В дальнейшем происходит снижение концентрации протеинов, однако, значение их не достигает уровня контроля (за исключением содержания α1-глобулинов). Наибольшие концентрации α2- и γ-глобулинов обнаружены на 30 и 40 сутки соответственно. Изменения в соотношении белковых фpaкций сопровождаются ростом A/G - индекса, наибольшее значение которого (1,58) отмечено на 30 сутки, что свидетельствует о значительном преобладании альбуминовой фpaкции над глобулиновой на данном этапе экспозиции (табл. 1; рис. 1).

Таблица 1

Содержание общего белка и белковых фpaкций в периферической крови сеголеток карпа при хронической интоксикации ионами кадмия (М ± m, n = 10)

 Условия опыта

 

Белок и белковые
фpaкции

Контроль

5-й день

15-й день

30-й день

40-й день

Общий белок (г/л)

24,0 ± 1,30

46,0 ± 0,09**

48,0 ± 0,19**

38,0 ± 0,19**

30,0 ± 0,31**

Альбумины

г/л

9,6 ± 0,80

19,3 ± 0,20**

19,9 ± 0,18**

9,1 ± 0,12

9,0 ± 0,09

 %

40,0

42,0

41,5

24,0

30,0

Глобулины

α1-глобулины

г/л

5,8 ± 0,60

12,9 ± 0,29**

14,4 ± 0,17**

13,3 ± 0,09**

9,0 ± 0,07*

 %

24,0

28,0

30,0

35,0

30,0

α2-глобулины

г/л

4,3 ± 0,30

8,7 ± 0,13**

9,6 ± 0,17**

11,4 ± 0,09**

7,5 ± 0,16**

 %

18,0

19,0

20,0

30,0

25,0

β - глобулины

г/л

2,6 ± 0,20

2,8 ± 0,03*

2,4 ± 0,14*

3,0 ± 0,18

2,4 ± 0,03

 %

11,0

6,0

5,0

8,0

8,0

γ - глобулины

г/л

1,7 ± 0,20

2,3 ± 0,09*

1,9 ± 0,02

1,1 ± 0,02*

2,1 ± 0,09

 %

7,0

5,0

4,0

3,0

7,0

A/G

0,67 ± 0,05

0,86 ± 0,14

0,97 ± 0,04*

1,58 ± 0,02**

0,41 ± 0,02*

Здесь и далее: * - P < 0,01; ** - P < 0,001.

Очевидно, повышение содержания общего белка при воздействии ионов кадмия связано с тем, что данный токсикант, накапливаясь преимущественно в печени и почках гидробионтов [1], индуцирует синтез металлотионеинов, которые связывают ионы металла и действуют как ловушка для свободных радикалов, являясь, таким образом, естественной защитой организма.

Активация синтеза α2 - глобулинов при воздействии хлорида кадмия, вероятно, вызвана необходимостью связывания ионов кадмия, в таком виде они менее токсичны, хотя далеко не безвредны [4]. Кроме того, повышение содержания белковых фpaкций в крови сеголеток карпа может служить показателем функционального состояния печени в условиях интоксикации ионами кадмия.

Рис. 1. Динамика содержания белков и их фpaкций (в % по отношению к контролю)
в периферической крови сеголеток карпа при хроническом воздействии ионами кадмия:
1 - общий белок; 2 - альбумины; 3 - α1-; 4 - α2-; 5 - β-; 6 - γ-глобулины

При воздействии ионов свинца содержание общего белка в сыворотке крови сеголеток карпа повышается на 5 сутки на 30,4 %, снижается на 15 и 30 сутки на 14,2 и 16,3 % соответственно и стабилизируется в пределах контрольных величин к 40 дню. Уровень альбуминов ниже контроля на 15; 30 и 40 сутки на 47,9; 54,2 и 55,2 % соответственно, тогда как на 5 день их содержание повышено на 23,9 %. Относительно фpaкций глобулина можно отметить повышенное содержание всех его компонентов на протяжении всего эксперимента. При этом, максимальные значения α1 - (11,1 ± 1,50) и β - глобулинов (6,1 ± 1,20) отмечены на 5 сутки; α2-глобулинов (8,4 ± 1,50) - на 40 сутки и γ - глобулинов (4,5 ± 1,11) - на 15 день. К концу эксперимента процентное содержание α1-, α2- , β- и γ-глобулинов сохраняется на уровне выше контроля на 33,9, 65,0 и 106,0 % соответственно (табл. 2; рис. 2).

Таблица 2

Содержание общего белка и белковых фpaкций в периферической крови сеголеток карпа при хронической интоксикации ионами свинца (М ± m, n = 10)

 Условия опыта

 

Белок и белковые
фpaкции

Контроль

5-й день

15-й день

30-й день

40-й день

Общий белок (г/л)

24,0 ± 1,30

31,3 ± 1,10*

20,6 ± 1,40

20,1 ± 3,50

24,0 ± 1 = 0,17

Альбумины

г/л

9,6 ± 0,80

11,9 ± 0,38*

5,0 ± 1,20*

4,4 ± 0,90*

4,3 ± 1,50*

 %

40,0

38,5

24,0

22,0

18,0

Глобулины

α1-глобулины     

г/л

5,8 ± 0,60

11,1 ± 1,50

8,4 ± 3,50

6,3 ± 2,40

7,9 ± 1,80

 %

24,0

35,8

40,1

31,3

33,0

α2-глобулины     

г/л

4,3 ± 0,31

7,9 ± 1,10*

4,6 ± 0,79

7,1 ± 1,29*

8,4 ± 1,50*

 %

18,0

25,8

21,9

35,3

35,0

β-глобулины

г/л

2,6 ± 0,20

6,1 ± 1,20*

3,6 ± 0,89

4,0 ± 0,68

4,3 ± 1,28

 %

11,0

19,5

17,2

20,0

18,0

γ-глобулины

г/л

1,7 ± 0,22

2,3 ± 0,51

4,5 ± 1,11*

2,8 ± 0,76

3,5 ± 0,87

 %

7,0

19,2

21,4

14,0

14,4

A/G

0,67 ± 0,05

0,61 ± 0,06

0,32 ± 0,01*

0,28 ± 0,03*

0,22 ± 0,01*

 Рис. 2. Динамика содержания белков и их фpaкций (в % по отношению к контролю)
в периферический крови сеголеток карпа при хроническом воздействии ионами свинца:
1 - общий белок; 2 - альбумины; 3 - α1-; 4 - α2-; 5 - β-; 6 - γ-глобулины

Изменения в соотношении белковых фpaкций сопровождается (в отличие от интоксикации ионами кадмия) падением A/G-ин­декса, наименьшее значение которого (0,22) отмечено на 40 сутки, что свидетельствует о значительном преобладании суммарного содержания глобулинов над альбуминами.

Полученные данные об изменениях соотношения белковых фpaкций в крови сеголеток карпа при интоксикации ацетатом свинца являются показателем функционального состояния печени, где осуществляется синтез альбуминов и глобулинов. Подобного рода изменения в сыворотке крови можно рассматривать как защитную реакцию организма при воздействии ионов свинца, поскольку известно, что глобулины являются белками, участвующими в иммунных реакциях организма.

При хроническом воздействии сульфата марганца происходит снижение содержания общего белка на 5; 15 и 40 сутки на 33,8; 14,6 и 16,3 % соответственно и стабилизация в пределах нормы к 30 дню. Интоксикация ионами марганца сопровождается однотипными изменениями в сторону повышения уровня альбуминовой фpaкции на 5; 15; 30 и 40 сутки на 57,3; 72,9; 34,4 и 57,3 % соответственно по сравнению с контролем (табл. 3; рис. 3).

Таблица 3

Содержание общего белка и белковых фpaкций в периферической крови сеголеток карпа при хронической интоксикации ионами марганца (М ± m, n = 10)

 Условия опыта

Показатели

Контроль

5-й день

15-й день

30-й день

40-й день

Общий белок (г/л)

24,0 ± 1,30

15,9 ± 0,10**

20,5 ± 0,12*

25,2 ± 0,41

20,1 ± 0,12*

Альбумины

г/л

9,6 ± 0,79

15,1 ± 1,29*

16,6 ± 2,10**

12,9 ± 1,70*

15,1 ± 0,18**

 %

40,0

42,0

41,5

33,9

42,0

Глобулины

α1-глобулины

г/л

5,8 ± 0,56

10,8 ± 1,10**

11,2 ± 1,21**

12,4 ± 1,40**

8,1 ± 0,09*

 %

24,0

30,0

28,0

33,0

28,0

α2-глобулины

г/л

4,3 ± 0,29

6,4 ± 0,57**

8,4 ± 0,68**

7,6 ± 0,59**

6,4 ± 0,04*

 %

18,0

19,0

21,0

20,0

22,0

β-глобулины

г/л

2,6 ± 0,20

1,8 ± 0,30

2,4 ± 0,41

3,9 ± 0,48*

2,3 ± 0,13*

 %

11,0

5,0

6,0

10,0

8,0

γ-глобулины

г/л

1,7 ± 0,18

1,4 ± 0,10

1,2 ± 0,12*

1,1 ± 0,20*

0,9 ± 0,02*

 %

7,0

4,0

3,0

2,9

3,0

A/G

0,67 ± 0,05

0,74 ± 0,09

0,72 ± 0,10

0,32 ± 0,06*

0,84 ± 0,02

Рис. 3. Динамика содержания белков и их фpaкций (в % по отношению к контролю)
в периферической крови сеголеток карпа при хроническом воздействии ионами марганца:
1 - общий белок; 2 - альбумины; 3 - α1-; 4 - α2-; 5 - β-; 6 - γ-глобулины

Хаpaктерным для ионов марганца является значительное повышение содержание фpaкций α1 - и α2-глобулинов. Максимальные значения α1-глобулинов (12,4 ± 1,40) отмечены на 30 сутки, α2-глобулинов (8,4 ± 0,68) - на 15 день. На 5; 15 и 40 сутки воздействия ионов марганца уровень β-глобулинов снижен на 30,8; 7,7 и 10,8 % соответственно и повышен на 50,0 % на 30 сутки по сравнению с контролем. Воздействие сульфата марганца сопровождается снижением γ-глобулиновой фpaкции на протяжении всего эксперимента, особенно выраженном на 40 сутки (на 48,8 % по сравнению с контролем).

Таким образом, при марганцевой интоксикации отмечаются разнонаправленные изменения в содержании белковых фpaкций в периферической крови сеголеток карпа, что нашло отражение в изменении A/G-индекса. На 5, 15 и 40 сутки соотношение A/G возрастает, тогда как на 30 сутки в 2,0 раза ниже, по сравнению с контролем.

Механизм воздействия марганца как тяжелого металла на белковый обмен рыб можно связать с его вступлением в тесную связь со многими белками и ферментами. В растворах воздействие ионов марганца проявляется в ярко выраженном каталитическом действии, то есть способности в сотни тысяч и миллионы раз ускорять течение химических реакций. Кроме того, показано действие ионов марганца на синтез белков и нуклеиновых кислот.

Исходя из полученных данных можно заключить, что состав белков сыворотки крови сеголеток карпа подвержен изменениям, как при действии токсичных металлов, так и эссенциальных. Особенности действия тяжелых металлов проявляются в хаpaктере их влияния на соотношение альбуминов и глобулинов: при действии ионов кадмия обнаруживается четко выраженная тенденция преобладания содержания альбуминов над глобулинами на протяжении всего эксперимента, тогда как при действии ионов свинца, напротив, хаpaктер соотношения меняется в сторону преобладания доли глобулиновой фpaкции.

Таким образом, полученные данные служат важным информативным показателем оценки изменений, наблюдаемых на организменном или видовом уровнях гидробионтов и основанием для использования показателей белкового обмена рыб в качестве биотеста, экологического мониторинга и экологических экспертиз водных экосистем.

Список литературы

  1. Амосова А.А. Оценка токсического воздействия соединений кадмия на водные организмы // IX Съезд Гидробиологического общества РАН. Т.1. - Тольятти, 18-22 сентября, 2006. - С. 16.
  2. Давыдова С.Л. О токсичности ионов металлов // Химия. - 1991. - № 3. - С. 121-123.
  3. Ерохина И.А. К вопросу об изменчивости белкового состава плазмы крови морских млекопитающих // Актуальные проблемы экологической физиологии, биохимии и генетики: материалы II Междунар. научн. конф. - Саранск: Типография ООО «Мордовия-ЭКСПО». - 2009. - С. 46-49.
  4. Иванова В.П. К вопросу о механизме токсического действия кадмия на живые организмы // Актуальные проблемы экологической физиологии, биохимии и генетики животных: материалы II Междунар. научн. конф. - Саранск. - 2009. - С.58-60.
  5. Камышников В.С. Справочник по клинико-биохимическим исследованиям и лабораторной диагностике. - М.: МЕДпресс-информ, 2004. - 910 c.
  6. Лакин Г.Ф. Биметрия. - М.: Высшая школа, 1990. - 352 с.
  7. Синюк Ю.В. Обмен аминокислот и фpaкционный состав белков в организме карпа под действием ионов марганца, цинка, меди и свинца: автореф. дис. ... канд. биол. наук. - Л., 2003. - 16 с.
  8. Lowry O.R. Protein measurement with folin phenol reagent / O.R. Lowry, N.P. Rosebrouph, A.N. Farr, R.K. Randall // J. Biol. Chem. - 1951. - V. 193, №1. - P. 265-275.


МОНИТОРИНГ ПОЧВ ТЕРРИТОРИИ ИРКУТСКОЙ ОБЛАСТИ

МОНИТОРИНГ ПОЧВ ТЕРРИТОРИИ ИРКУТСКОЙ ОБЛАСТИ Статья в формате PDF 131 KB...

23 04 2024 3:23:59

ДИФРАКЦИОННО-РЕФРАКЦИОННЫЕ ИНТРАОКУЛЯРНЫЕ ЛИНЗЫ

ДИФРАКЦИОННО-РЕФРАКЦИОННЫЕ ИНТРАОКУЛЯРНЫЕ ЛИНЗЫ Статья в формате PDF 111 KB...

15 04 2024 8:45:59

АНАЛИЗ ИОННОГО СОСТАВА ВОДНОЙ ФАЗЫ В ТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ СУСПЕНЗИЯХ И ПРИРОДНЫХ ВОДАХ

АНАЛИЗ ИОННОГО СОСТАВА ВОДНОЙ ФАЗЫ В ТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ СУСПЕНЗИЯХ И ПРИРОДНЫХ ВОДАХ Исследовано формирование ионного состава водной фазы в системах «твердое — жидкое» применительно к технологическим суспензиям (пульпам) флотации, а также к природным водам (поверхностным водным объектам) при взаимодействии с силикатными Fe-содержащими минералами. Выявлены прострaнcтвенно-временные зависимости содержания распространенных ионов щелочных (Na+, K+) щелочно-земельных (Ca2+, Mg2+) и тяжелых (Feобщ, Сu2+) металлов, которые представляют ценность в моделировании и прогнозировании процессов миграции, химических превращений загрязнителей водных объектов. ...

11 04 2024 20:43:22

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ ПЕЧЕНИ КРОЛИКОВ КАЛИФОРНИЙСКОЙ ПОРОДЫ

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ ПЕЧЕНИ КРОЛИКОВ КАЛИФОРНИЙСКОЙ ПОРОДЫ В последнее время изыскиваются различные кормовые средства, витаминно-минеральные, биологические и другие препараты, которые бы оказывали благотворное влияние на организм животных. Анализ литературных источников показал, что вопросы влияния органического селена на морфофункциональное состояние организма животных (кроликов) выращиваемых в условиях интенсивных технологий полностью не выяснены, в связи с этим была поставлена цель изучить морфофункциональное состояние печени кроликов при использовании органического селена (Сел-Плекс) в составе гранулированного комбикорма в условиях Северного Зауралья. При топографическом исследовании и макроскопическом осмотре печени мы не выявили внешних различий у исследуемых групп. Изученное нами структурно-функциональное состояние печени в опытной группе кроликов, дает основание предполагать, что введение Сел-Плекс положительно влияет на морфофизиологическое состояние печени, что проявляется выраженным дольчатым строением, сохранность паренхиматозных структур печени. ...

03 04 2024 23:33:21

ИДЕЯ НООСФЕРЫ И ПРИРОДОПАРИТЕТНОЕ ПОВЕДЕНИЕ

ИДЕЯ НООСФЕРЫ И ПРИРОДОПАРИТЕТНОЕ ПОВЕДЕНИЕ Статья в формате PDF 90 KB...

30 03 2024 21:25:35

ЗОЛОТО-МЕДЬ-МОЛИБДЕН-ПОРФИРОВЫЕ РУДЫ

ЗОЛОТО-МЕДЬ-МОЛИБДЕН-ПОРФИРОВЫЕ РУДЫ Рассмотренные  в  статье  особенности  геологического  строения и металлогении Восточной Тувы, в пределах которой сосредоточены  перспективные  объекты  золото-медно-молибден-порфировой рудной  формации,  позволяют  выделить  золото-медно-молибденовую  провинцию  площадью  около 70  тыс. км2. Приведена технология  обогащения  руды,  которая  обеспечивает  высокие  показатели  извлечения  золота, серебра, меди (общее  извлечение  в  концентраты  Au – 99,2 %, Ag – 92,0 %, Cu – 80,2 %). Полученный  концентрат  хаpaктеризуется  высокими  содержаниями  меди (50 %), а также  золота  и  серебра, что  позволяет  относить концентрат  к  медным  концентратам  высшей  марки  КМО (ГОСТ 48-77-74). ...

26 03 2024 10:10:16

ГАЗИФИКАЦИЯ ОРГАНИЧЕСКИХ ТОПЛИВ И БИОМАСС

ГАЗИФИКАЦИЯ ОРГАНИЧЕСКИХ ТОПЛИВ И БИОМАСС В последние годы для сжигания как традиционных топлив, так и биомасс различного происхождения широко применяются газификационные технологии. Газификация чаще всего производится в кипящем слое при недостатке окислителя. Конструкции установок по газификации различных топлив отличаются, но не принципиально. Также близкими оказываются и параметры генераторного газа. Необходимо развитие установок и технологий по совместной переработке различных топлив. ...

24 03 2024 1:47:42

СПАМ-ФИЛЬТРЫ И БЛОКИРАТОРЫ

СПАМ-ФИЛЬТРЫ И БЛОКИРАТОРЫ Статья в формате PDF 276 KB...

20 03 2024 23:26:56

Еще:
Поддержать себя -1 :: Поддержать себя -2 :: Поддержать себя -3 :: Поддержать себя -4 :: Поддержать себя -5 :: Поддержать себя -6 :: Поддержать себя -7 :: Поддержать себя -8 :: Поддержать себя -9 :: Поддержать себя -10 :: Поддержать себя -11 :: Поддержать себя -12 :: Поддержать себя -13 :: Поддержать себя -14 :: Поддержать себя -15 :: Поддержать себя -16 :: Поддержать себя -17 :: Поддержать себя -18 :: Поддержать себя -19 :: Поддержать себя -20 :: Поддержать себя -21 :: Поддержать себя -22 :: Поддержать себя -23 :: Поддержать себя -24 :: Поддержать себя -25 :: Поддержать себя -26 :: Поддержать себя -27 :: Поддержать себя -28 :: Поддержать себя -29 :: Поддержать себя -30 :: Поддержать себя -31 :: Поддержать себя -32 :: Поддержать себя -33 :: Поддержать себя -34 :: Поддержать себя -35 :: Поддержать себя -36 :: Поддержать себя -37 :: Поддержать себя -38 ::