РЕГУЛЯЦИЯ ПРОЛИФЕРАЦИИ КЛЕТОК С ПОМОЩЬЮ ХОРИОНИЧЕСКОГО ГОНАДОТРОПИНА ЧЕЛОВЕКА
Проблема клеточной пролиферации еще далека от разрешения, хотя в последние годы появилось достаточно много работ, показывающих роль факторов роста (PDGF, EGF, FGF, TGF-бета, интерлейкины и др.), эндогенных ингибиторов клеточной пролиферации. Проблеме регуляции восстановительных процессов посвящена монография Л.К. Романовой (1984), в которой основное внимание уделено регуляции процессов пролиферации клеток. Предполагается наличие специфических тканевых стимуляторов и ингибиторов клеточного роста. В качестве ингибиторов митотического цикла могут быть кейлоны, выделенные из многих органов, в том числе печени, лимфоцитов, тромбоцитов, макрофагов, фибробластов и др. Тем не менее, механизмы клеточной пролиферации изучены недостаточно.
В качестве стимулятора клеточного размножения используется хорионический гонадотропин человека (ХГч), синтезируемый клетками синцитотрофобласта зародыша (Midgley A.R., Pierce G, 1962) и функционирующий на протяжении всего периода онтогенеза млекопитающих. Участок β-субъединицы гормона, так же как и сам гормон, подавляет стимулированную митогеном пролиферацию лимфоцитов человека in vitro, специфически взаимодействует с рецепторами на мембране моноцитов периферической крови человека (Валуйских А.Н., Ромашкова Ю.А., Данилкович А.В. и др., 1997) и ингибирует рост промиелоидной клеточной линии HL-60 (Валуйских А.Н., Ромашкова Ю.А., Данилкович А.В. и др., 1997). В последнее время ряд авторов, исследуя свойства ХГч, отметил его способность оказывать влияние на опухолевые клетки (Солопаева И.М., 2005, Валуйских А.Н., Ромашкова Ю.А., 2005). Есть данные о том, что ХГч способствует повышению экспрессии гена р53, c-myc и bcl-xs, активируя, таким образом, программу клеточной гибели, благодаря индукции которой тормозится канцерогенез молочных желез у крыс (Srivastava P., Russo J., Russo I.H., 1997). В связи с этим И.М. Солопаева (2007) предполагает, что гены белка р53 являются ХГч-зависимыми, и снижение в опухолях этого белка может быть связано в какой-то мере с образованием в них мутантной формы сигнального белка ХГч, ответственного за дифференцировку. Ранее И.М. Солопаевой (2000) проведены исследования по влиянию ХГч на процессы регенерации печени, показавшие высокую эффективность регенерационной терапии с помощью этого гормона. Автор делает заключение о том, что ХГч инициирует и осуществляет регуляцию процессов размножения, роста и развития клетки и процессов нормализации многих патологически измененных жизненно важных реакций организма. Эта способность гормона проявляется как в эмбриональном периоде, так и при репаративной регенерации органов у взрослых. Кроме того, автор высказывает гипотезу об «одной из возможных» причин малигнизации клеток и злокачественного роста. Предполагается, «что в истоке малигнизации клеток и формирования злокачественной опухоли может быть нарушение функции гена, ответственного за синтез ХГч, в результате которого продуцируется гормон со структурной аномалией».
Целью настоящей работы было сравнительное изучение процессов пролиферации гепатоцитов в регенерирующей печени крыс и в культуре paковых клеток Hep-2 (paк гортани) под влиянием хорионического гонадотропина человека.
Эксперименты проведены на белых беспородных крысах. Одной группе животных вводили CCl4 в течение 35 суток (20 подкожных инъекций) и вызывали хронический гепатит, другая группа была интактной. Исследовали содержание общей ДНК печени и ДНК в ядрах гепатоцитов, митотический индекс гепатоцитов (МИ). Морфометрическими методами изучали число нормальных (Кнг) одноядерных (Ког) и двуядерных (Кдг) гепатоцитов.
Клеточная культура Hep-2 была выбрана на основании того, что наличие рецепторов к ХГч на мембране этих клеток не доказано. Клетки культивировали в смеси среды Игла МЕМ и 5% эмбриональной сыворотки. Клетки засевали в концентрации 50 000 кл/флакон. Изучали влияние ХГч в концентрациях 50, 100 и 150 МЕ/мл на долю патологических митозов. Изменения оценивали по классификации Алова (1975) через 48 и 72 часа после посева. Исследовали митотический индекс и отдельно долю поликариоцитов в клеточной культуре.
Морфометрический анализ нормальной печени показал, что Кнг на тест-площади препарата в среднем равно 8,54±0,2 клетки, причем, более 82% - это одноядерные гепатоциты. Митозы гепатоцитов в нормальной печени встречаются, хотя и редко (среднесуточный МИ равен 0,04%о), максимум МИ отмечен в 8 часов (0,19 ±0,01%о), в другие часы суток митозы были единичны. Период суточных колебаний - 24 часа. Повышению МИ предшествовало увеличение в печени содержания ДНК, рассчитанное на ядро гепатоцита.
Регуляция процессов пролиферации гепатоцитов с помощью ХГч изучалась в условиях репаративной регенерации печени после воспроизведения экспериментального хронического гепатита. Животные получали гормон в дозе 150 ЕД на крысу 1 раз в день в течение 3 дней. Уже через 3 часа после введения ХГч наблюдалось уменьшение общей ДНК печени, тенденция к нарастанию ДНК ядерной суспензии гепатоцитов. Через 4 часа после введения гормона увеличился МИ гепатоцитов до 4,26±0,46‰ (у контрольных не лечёных животных - 0,6±0,15‰). Количество ДНК на ядро гепатоцита было выше, чем у крыс гепатитного контроля на этот срок.
В результате прошедших митозов в печени наметилась отчетливая тенденция к увеличению Кнг. Через 4 часа их количество увеличилось до 5,61±0,7 клеток на тест-площадь препарата, а через 8 часов - до 6,09±0,8 клеток (Р<0,01). Через 12 часов после введения гормона отмечен значительный рост количества ДНК в ядрах гепатоцитов, а через 16 часов - новый подъем митотической активности, который продолжался до 24 часов, но был более, чем в 2 раза ниже, чем у не лечённых животных. Тем не менее, Кнг достигло 6,78±0,33 клеток. Среди них было много двуядерных. Заметно вырос среднесуточный уровень Кнг, хотя среднесуточное содержание ДНК на ядро гепатоцита и МИ даже снизились. Количество дегенерирующих гепатоцитов снизилось с 43,7% при хроническом гепатите до 22,5% у леченных животных.
После введения ХГч в 2 раза снизилась абсолютная амплитуда колебаний ДНК на ядро и МИ, но почти в 2 раза увеличилась абсолютная амплитуда Кнг. Относительная амплитуда всех изученных показателей уменьшилась.
Через 24 часа после одной инъекции ХГч существенных изменений в концентрации ДНК печени не произошло. Через 48 часов повысилось содержание общей ДНК печени, в основном за счет ДНК ядерной суспензии гепатоцитов (Р<0,05). В то же время количество ДНК на ядро клетки снизилось до нормальных значений, а МИ увеличился до 2,21±0,3‰. Кнг увеличилось на 71,5%, причем, число Ког составило 95,5% (у контрольных крыс - 92,2%).
Через 72 часа после трёх инъекций ХГч содержание общей и ядерной ДНК печени увеличилось (P<0,05) по сравнению с не леченными животными. Значительно повысилась ДНК клеток соединительной ткани (ДНКнпк) и составила 32,7% от общей (в контроле - 18%, P<0,01). В этот период отмечено высокое содержание ДНК на ядро гепатоцита, МИ равен 0,16±0,04‰, а Кнг немного уменьшилось, что связано, вероятно, с гипертрофией печеночных клеток. Увеличение ДНКнпк по сравнению с не леченными животными свидетельствует о стимуляции клеток соединительной ткани.
Таким образом, под влиянием ХГч происходит увеличение общей ДНК печени и ДНК ядер гепатоцитов в течение первых трех суток. Реакция соединительнотканных клеток на введение ХГч определяется уже в первые 3 часа, когда в них снижается содержание ДНК. Наибольший ДНК-синтезирующий эффект на гепатоциты и соединительнотканные клетки ХГч оказывает через 72 часа после первой инъекции гормона, когда пролиферативная активность гепатоцитов снижена, уменьшается Кнг на тест-площади препарата, но возрастает Кдг на 14,3% по сравнению с предыдущим сроком. Это связано, по всей вероятности, с явлениями гипертрофии клеток печени, что подтверждают данные Н.Л. Ивановой (1983). На этот срок увеличивается средний объем гепатоцита до 1,93±0,46 усл. ед. (в норме - 1,13±0,09 усл. ед.) и возрастает плоидность клеток.
Изучение влияния ХГч на пролиферацию клеточной культуры Hep-2 показало, что все исследованные дозы ХГч существенно изменяют структуру клеточного пласта, достоверно снижают митотический индекс и повышают количество поликариоцитов (в клетках наблюдалось до 5-7 ядер). Эти эффекты проявились в зависимости от дозы гормона. При введении 50, 100 и 150 МЕ/мл ХГч снижал митозы соответственно через 48 часов культивирования на 3,6%, 26,54%, 22,9%, а через 72 часа на 8,72%, 32,18% и 40,0%. Доля поликариоцитов через 48 часов увеличивалась на 20,38% , 49,56%, 73,16%, а через 72 часа культивирования на 125,37%, 142,19% и 163,69% соответственно. Корреляция между дозой гормона и величиной митотического индекса составила -0,88 (обратная, сильная), а между дозой гормона и количеством поликариоцитов +0,99 (прямая, сильная).
ХГч в исследуемых дозировках достоверно повышал частоту патологических форм митозов. Через 48 часов при использовании концентрации ХГч в 50, 100 и 150МЕ/мл доля патологических митозов относительно контроля повысилась на 15,15%, 31,7%, 57,54%, а через 72 часа на 27,21%, 88,09%, 61,48% соответственно. При этом выявлена высокая прямая корреляционная зависимость между дозой ХГч и долей патологических митозов (r = 0,99). Закономерно изменялся и метафазно-профазный индекс - при воздействии 50МЕ/мл ХГч через 48 часов он снижался в 2,5 раза, а через 72 часа - в 1,76 раза. Это говорит о повышении доли профаз. Учитывая, что при этом происходит снижение общего митотического индекса, это может свидетельствовать о задержке митоза в профазе, что также является патологией митоза.
Таким образом, в результате исследований показано, что ХГч в дозах 50, 100 и 150 МЕ/мл достоверно снижает митотический индекс опухолевой культуры и повышает образование поликариоцитов и патологических митозов, приводя культуру к дезорганизации in vitro. Эти данные свидетельствуют о противоопухолевом действии ХГч относительно paка гортани, что открывает перспективу для дальнейших исследований свойств данного гормона.
При сравнении действия ХГч на клетки печени в условиях патологии с его влиянием на клетки перевиваемой опухоли четко выявляется противоположный эффект. В первом случае ХГч оказывает выраженное стимулирующее влияние на пролиферацию гепатоцитов, обеспечивая их дифференцировку. В случае влияния на опухолевую клеточную культуру in vitro данный гормон оказывает торможение размножения клеток, нарушая процессы их деления, тем самым, вызывая дезорганизацию клеточной культуры. Следовательно, эффект ХГч зависит от условий его использования.
Статья в формате PDF
295 KB...
14 02 2025 12:59:19
Статья в формате PDF
102 KB...
13 02 2025 4:49:30
Статья в формате PDF
183 KB...
11 02 2025 21:14:32
Статья в формате PDF
284 KB...
10 02 2025 8:54:33
Статья в формате PDF
112 KB...
09 02 2025 1:49:32
Статья в формате PDF
111 KB...
08 02 2025 18:25:54
Статья в формате PDF
351 KB...
07 02 2025 11:38:10
05 02 2025 18:21:57
Статья в формате PDF
162 KB...
04 02 2025 9:56:14
Статья в формате PDF
118 KB...
03 02 2025 5:22:26
В статье даны пpaктические рекомендации для проектирования вибратора грохота, который по технологическим соображениям был переведён в режим работы с повышенной частотой вращения и уменьшенной амплитудой. Разработана динамическая схема грохота и предложен алгоритм решения дифференциального уравнения. Короб грохота рассматривался как одномассная система с элементами переменной жесткости опор короба, что позволило определить требуемую возмущающую силу вибратора и величину статического момента массы дeбaлансов при заданных кинематических параметрах. На основе полученных результатов разработана рациональная конструкция дeбaлансов.
...
01 02 2025 14:50:29
Статья в формате PDF
255 KB...
31 01 2025 8:11:23
Изучен качественный и количественный состав молекул средней массы, выделенных из плазмы крови и патологического эпидермиса больных хроническими, тяжелыми дерматозами. В эксперименте in vitro на эритроцитах здоровых лиц установлено, что данные МСМ активируют перекисное окисление липидов, увеличивают сорбционную емкость эритроцитов и влияют на активность ферментов биотрaнcформации. Это позволяет считать, что при дерматозах развивается эндогенная интоксикация как общебиологическая реакция на патологически измененный метаболизм, обусловленная накоплением в крови молекул средней массы.
...
30 01 2025 4:56:26
Статья в формате PDF
245 KB...
29 01 2025 19:27:16
28 01 2025 1:48:17
Статья в формате PDF
331 KB...
27 01 2025 7:52:48
Статья в формате PDF
289 KB...
25 01 2025 6:24:52
Статья в формате PDF
203 KB...
24 01 2025 18:11:36
Статья в формате PDF
121 KB...
23 01 2025 6:31:33
22 01 2025 12:50:28
Исследовали влияние продолжительного пребывания в условиях невесомости на механические свойства и электромеханическую задержку (ЭМЗ) трехглавой мышцы голени (ТМГ) у 7 космонавтов до полета и на 3-5 день после возвращения на Землю. Механические свойства ТМГ оценивали по показателям максимальной произвольной силы (МПС), максимальной силы (Ро; частота 150 имп/с), силы одиночного сокращения (Рос), времени одиночного сокращения (ВОС), времени полурасслабления (1/2 ПР), времени развития напряжения до уровня 25, 50, 75 и 90% от максимума. Рассчитывали силовой дефицит (Рд) и тетанический индекс (ТИ). ЭМЗ регистрировали во время произвольного и непроизвольного сокращения ТМГ. В ответ на световой сигнал космонавт выполнял произвольное подошвенное сгибание при условии «сократить как можно быстро и сильно». Определяли общее время реакции (ОВР), премоторное время (ПМВ) и моторное время (МТ) или иначе ЭМЗ. В ответ на супрамаксимальный одиночный электрический импульс, приложенный к n. tibialis, определяли латентный период между М-ответом и началом развития Рос. После полета Рос, МПС и Ро уменьшились на 14,8; 41,7 и 25.6%, соответственно. Величина Рд и ТИ увеличилась на 49,7 и 46,7%, соответственно. ВОС увеличилось на 7,7%, а время 1/2 ПР уменьшилось – на 20,6%. Время развития произвольного изометрического сокращения значительно увеличилось, тогда как электрически вызванное сокращение не обнаружило существенных различий. ЭМЗ произвольного сокращения увеличилась на 34,1%, а ПМВ и ОВР уменьшились на 19,0 и 14,1%, соответственно. ЭМЗ электрически вызванного сокращения существенно не изменилось. Таким образом, механические изменения предполагают, что невесомость изменяет не только периферические процессы, связанные с сокращениями, но изменяет также и центрально-нервную комaнду. ЭМЗ при вызванном одиночном сокращении простой и быстрый метод оценки изменения жесткости мышцы. Более того, ЭМЗ при вызванном одиночном сокращении мышцы может служить показателем функционального состояния нервно-мышечного аппарата, а соотношение ЭМЗ при произвольном и вызванном сокращениях показателем функционального состояния центральной нервной системы.
...
21 01 2025 12:55:46
Статья в формате PDF
112 KB...
20 01 2025 5:20:45
Статья в формате PDF
282 KB...
19 01 2025 1:33:53
Проведен анализ криминальной агрессии лиц с психическими расстройствами в различные социально-экономические периоды развития России (советский, перестройка, современный период). Выявлена прямая корреляционная зависимость уровня криминальной агрессии лиц с умственной отсталостью со снижением уровня жизни. Существенную роль в формировании криминальной агрессии указанного контингента играли корыстные мотивы. Предлагаются методы первичной и вторичной психопрофилактики.
...
18 01 2025 18:53:43
Статья в формате PDF
108 KB...
17 01 2025 4:31:19
Статья в формате PDF
102 KB...
16 01 2025 0:29:54
Проведен анализ опубликованных данных по вопросу генетических факторов развития гемолитических анемий (мембранопатий, энзимопатий). Список возможных мутаций при определенной форме анемии обобщен в виде таблиц. Дано понятие о сущности, строении и функции основной клетки красной крови – эритроците. Приведена классификация различных групп анемий, причины их возникновения, возможные симптомы проявления заболевания, прогноз для жизни. Затронуты аспекты донорства при ферментодефицитных состояниях доноров и реципиентов.
...
14 01 2025 18:29:42
Статья в формате PDF
255 KB...
13 01 2025 23:24:38
Статья в формате PDF
121 KB...
12 01 2025 17:42:48
Статья в формате PDF
122 KB...
11 01 2025 20:54:43
Статья в формате PDF
112 KB...
09 01 2025 3:31:37
Статья в формате PDF
126 KB...
08 01 2025 5:17:34
07 01 2025 12:59:41
Статья в формате PDF
101 KB...
06 01 2025 7:46:16
Еще:
Поддержать себя -1 :: Поддержать себя -2 :: Поддержать себя -3 :: Поддержать себя -4 :: Поддержать себя -5 :: Поддержать себя -6 :: Поддержать себя -7 :: Поддержать себя -8 :: Поддержать себя -9 :: Поддержать себя -10 :: Поддержать себя -11 :: Поддержать себя -12 :: Поддержать себя -13 :: Поддержать себя -14 :: Поддержать себя -15 :: Поддержать себя -16 :: Поддержать себя -17 :: Поддержать себя -18 :: Поддержать себя -19 :: Поддержать себя -20 :: Поддержать себя -21 :: Поддержать себя -22 :: Поддержать себя -23 :: Поддержать себя -24 :: Поддержать себя -25 :: Поддержать себя -26 :: Поддержать себя -27 :: Поддержать себя -28 :: Поддержать себя -29 :: Поддержать себя -30 :: Поддержать себя -31 :: Поддержать себя -32 :: Поддержать себя -33 :: Поддержать себя -34 :: Поддержать себя -35 :: Поддержать себя -36 :: Поддержать себя -37 :: Поддержать себя -38 ::