ВЛИЯНИЕ МОЛЕКУЛ СРЕДНЕЙ МАССЫ НА АЛЬДЕГИДДЕГИДРОГЕНАЗНУЮ СИСТЕМУ ПЕЧЕНИ И ЭРИТРОЦИТОВ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
Одним из ведущих симптомов термического поражения является интоксикация, наступающая с первых минут после травмы и продолжающаяся в течение всех фаз ожоговой болезни. Несомненно, что важными звеньями в патогенезе ожоговой токсемии являются нарушения функций внутренних органов, прежде всего печени [7]. Так Р.М. Гланц и Б.Т. Билынский [1] установили в эксперименте, что сразу после термической травмы печень становится подвержена влиянию токсических продуктов на фоне резко сниженной ее антитоксической функции. Б.Е. Мовшев и Р.В. Недошивина в своих работах [5,6] констатируют резко выраженную токсичность экстpaктов, приготовленных из термически поврежденных органов.
Настоящее исследование посвящено изучению токсических свойств экстpaктов обожженной in vitro печени на каталитические и кинетические свойства одного из ключевых ферментов биотрaнcформации - альдегиддегидрогеназу (АлДГ) (КФ 1.2.1.3).
Материал и методы исследования
В опытах использовали печень нормальных беспородных крыс. Термическую обработку печени in vitro проводили обжигом печени в спирте в течение 45 секунд. Через 1 час готовили гомогенат в среде, содержащей 0,25 М раствор сахарозы, 0,01М Трис-HCI буфер (рН = 7,5). Из гомогената получали фpaкцию молекул средней массы (МСМ) по М.Я.Малаховой [3]. Полученный раствор МСМ нейтрализовали 1М раствором К2СО3. Контроль представлен фpaкцией МСМ, выделенной аналогично из нормальной печени крыс. Токсический эффект МСМ оценивали по изменению активности АлДГ. Полученные экстpaкты МСМ (ожог и контроль) вводили интактным крысам внутрибрюшинно. Через час после введения животные забивались путем декапитации. Готовили 10% гомогенат печени на основе среды выделения митохондрий. Цитоплазматическую фpaкцию печени получали методом дифференциального центрифугирования гомогената [4]. Кровь забирали из шейной артерии в пробирки, содержащие 3,8% раствор цитрата натрия. Затем кровь центрифугировали при 3000 об/мин, плазму удаляли. Эритроциты промывали дважды в физиологическом растворе. Промытые эритроциты гемолизировали добавлением 4 объемов бидистиллированной воды. Активность альдегиддегидрогеназы в гемолизате эритроцитов и цитоплазматической фpaкции печени крыс определяли по Б. М. Кершенгольцу и Е. М. Серкиной [2], в качестве субстрата использовали 18 мМ ацетальдегид.
Из первичных экспериментальных данных полной кинетической кривой зависимости (V от t), используя математический метод, рассчитывали кинетические параметры ферментативной реакции: Kt - время полупревращения субстрата для ферментативной реакции (мин); Vmax - максимальную скорость накопления продукта реакции при полном расходовании субстрата (мкмоль/мин); Vmax/Kt - коэффициент каталитической эффективности ферментативной реакции (мкмоль/мин2) [8].
Концентрацию белка определяли по методу Лоури [9]. Полученные результаты обработаны статистически с оценкой достоверности различий между средними величинами по критерию Стьюдента.
Результаты и их обсуждение
Введение экстpaкта МСМ, приготовленного из обожженной in vitro печени, оказывает влияние на активность АлДГ как клеток крови, так и цитоплазматической фpaкции печени крыс. Активность АлДГ достоверно снижена в гемолизате эритроцитов (табл.1), и цитоплазме (табл.2) соответственно на 87% и 45% по сравнению с введением раствора "МСМ-контроль". По сравнению с нормой раствор "МСМ-ожог" приводит к снижению активности АлДГ в гемолизате на 84%, в цитоплазматической фpaкции гепатоцитов - на 32%.
Таблица 1. Изменение каталитических и кинетических параметров альдегиддегидрогеназной реакции в эритроцитах крови под влиянием МСМ
|
Показатель |
N |
Кмсм |
Омсм |
|
А |
12,31+1,46 n = 20 |
15,37+1,34 n = 5 |
1,99+0,03 */** n = 5 |
|
Кt |
6,03+1,19 |
3,21+0,73 |
3,39+0,25 |
|
Vmax |
8,37+1,56 |
1,29+0,25 |
0,73+0,05*/** |
|
Vmax/Kt |
1,53+0,12 |
0,42+0,02 |
0,22+0,03*/** |
Примечания: N - норма, Кмсм - "МСМ-контроль", Омсм - "МСМ-ожог", n - количество животных, * - различия достоверны между группами "МСМ-контроль" и "МСМ- ожог" (р<0,05), **- различия достоверны по сравнению с нормой, А - активность (нмоль/мин на мг белка).
Таблица 2. Изменение каталитических и кинетических свойств цитоплазматической АлДГ печени крыс под влиянием МСМ
|
Показатель |
N |
Кмсм |
Омсм |
|
А |
76,70+4,81 n=20 |
94,73+4,39 n=5 |
52,17+3,17 * n=5 |
|
Kt |
3,16+0,66 |
4,59+0,73 |
10,63+1,90 */** |
|
Vmax |
12,74+1,61 |
5,73+0,68 |
8,50+1,80 |
|
Vmax/Kt |
5,02+0,30 |
1,32+0,12 |
0,75+0,06*/** |
Примечания: N - норма, Кмсм - "МСМ-контроль", Омсм - "МСМ-ожог", n - количество животных, * - различия достоверны между группами "МСМ-контроль" и "МСМ- ожог" (р<0,05), **- различия достоверны по сравнению с нормой, А - активность (нмоль/мин на мг белка).
Таким образом, мы наблюдаем однонаправленное снижение активности АлДГ в крови и печени под влиянием ожоговых МСМ и по сравнению с раствором "МСМ -контроль", и по сравнению с нормой. Наибольшее падение активности фермента в эритроцитах по сравнению с гепатоцитами обусловлено, вероятно, тем, что кровь является той тканью, которая в первую очередь подвергается действию токсических веществ, возникших в очаге поражения.
Контролем для оценки токсичности раствора МСМ, полученных из обожженной in vitro печени, служили показатели изменения активности АлДГ под влиянием раствора, приготовленного из печени нормальной крысы. Введение крысам внутрибрюшинно раствора "МСМ - контроль" приводит к увеличению активности АлДГ в цитоплазматической фpaкции печени крыс на 24% с 76,70+4,81 до 94,73+4,39 нмоль/мин на мг белка. Активность АлДГ в гемолизате пpaктически не изменяется и остается в пределах нормы.
Таким образом МСМ, выделенные из обожженной in vitro печени, обладают явно выраженными токсическими свойствами, вызывая уменьшение активности АлДГ, что не наблюдалось при введении крысам раствора "МСМ - контроль".
Снижение активности АлДГ в гемолизате под влиянием раствора "МСМ - ожог" по сравнению со "МСМ - контроль" обусловлено достоверным снижением максимальной скорости накопления продукта реакции при полном расходовании субстрата на 43% и уменьшением коэффициента каталитической эффективности ферментативной реакции на 48%. Теми же причинами обусловлено снижение активности АлДГ при введении "ожоговых МСМ" по сравнению с нормой: Vmax уменьшается на 91%, Vmax/Kt - уменьшается на 86%.
Падение активности АлДГ в цитоплазматической фpaкции печени крыс под влиянием раствора обожженных МСМ по сравнению со "МСМ-контроль" обусловлено достоверным возрастанием времени полупревращения субстрата более чем на 100% и снижением коэффициента каталитической эффективности ферментативной реакции на 43%.
Снижение активности цитоплазматической АлДГ под влиянием "ожоговых" МСМ по сравнению с нормой связано с увеличением времени полупревращения субстрата для ферментативной реакции более чем на 100%, уменьшением Vmax на 33% и снижением коэффициента каталитической эффективности ферментативной реакции на 85%.
Таким образом, МСМ, выделенные из обоженной in vitro печени выступают в роли ингибиторов активности АлДГ в эритроцитах и цитозоле печени. Кинетический механизм ингибирования фермента разный. Раствор "МСМ-ожог" снижает активность фермента в гемолизате эритроцитов по типу "чистого неконкурентного" ингибирования: Kt не изменяется, Vmax и Vmax/Kt уменьшаются (табл.1), а в цитозоле - по типу "конкурентного" ингибирования, когда увеличивается Kt, уменьшается Vmax/Kt, остается без изменения величина Vmax.
Проведенные исследования свидетельствуют об отчетливой корреляции изменения активности фермента в цитозоле печени и эритроцитах под влиянием МСМ, полученных из обоженной in vitro печени.
Таким образом можно заключить, что фpaкция МСМ, выделенных из обожженной in vitro печени, обладает токсическими свойствами, приводя к достоверному снижению активности АлДГ в гемолизате и цитоплазматической фpaкции печени крыс, связанному с изменением кинетических свойств альдегиддегидрогеназы при термической травме.
Литература
- Гланц Р.М., Билынский Б.Т. Роль функционального состояния печени в патогенезе ожоговой болезни. - В кн.: Ожоговая болезнь. Киев, 1975. С.28-33.
- Кершенгольц Б.М., Серкина Е.В. Некоторые методические подходы к изучению метаболизма этанола // Лабораторное дело. 1981. №2.С.126.
- Малахова М.Я. Метод регистрации эндогенной интоксикации (пособие для врачей). СПб., 1995. 34с.
- Методы биохимических исследований /Под ред. М.И.Прохоровой. Л.,1982.С.29-33.
- Мовшев Б.Е., Недошивина Р.В. Токсичность экстpaктов обожженной кожи в зависимости от способа их приготовления и хранения // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 1973. №6. С. 59 - 61.
- Мовшев Б.Е., Недошивина Р.В. Влияние температуры и pH среды на токсические свойства экстpaктов обожженной и нормальной кожи // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 1974. №4. С. 38 - 41.
- Федоров Н.А., Мовшев Б.Е., Недошивина Р.В., Корякина И.К. Ожоговая аутоинтоксикация. Пути иммунологического преодоления. М., 1985.С.27.
- Kostir J. Prime stanoveni michaelisovy konstanty // Chemicke Listy. 1985. V. 79, № 9. P.989 - 991.
- Lowry O.U., Rosebrough N.J., Forr A.L., Rondall R.J. Protein measurement with the Folin Phenol reagent // Journal of Biological Chemistry. 1951. №193. P.265-275.
Статья в формате PDF
119 KB...
08 09 2026 3:19:21
В западных предгорьях Алтая скважинами вскрыты погребенные долины, выполненные верхнеолигоцен-нижнемиоценовым аллювием. Литологические, минералогические, геохимические особенности этих отложений и спорово-пыльцевые спектры свидетельствуют об их накоплении, и формировании долин в условиях влажного умеренно теплого климата со среднегодовыми положительными температурами не ниже +3 °С и годовым количеством осадков не менее 800 мм. В это время здесь, в ныне самом засушливом районе Алтая со среднегодовым количеством осадков 200 мм, были развиты ландшафты хвойно-широколиственных и листопадных лесов тургайского типа с участием отдельных теплолюбивых субтропических элементов.
...
07 09 2026 8:34:25
Статья в формате PDF
250 KB...
06 09 2026 7:39:29
Статья в формате PDF
251 KB...
05 09 2026 1:50:34
Статья в формате PDF
293 KB...
04 09 2026 3:13:53
Статья в формате PDF
140 KB...
03 09 2026 11:37:59
Статья в формате PDF
103 KB...
02 09 2026 3:43:39
Статья в формате PDF
188 KB...
01 09 2026 3:12:34
Статья в формате PDF
117 KB...
30 08 2026 19:19:26
Статья в формате PDF
100 KB...
29 08 2026 22:23:53
Статья в формате PDF
130 KB...
28 08 2026 2:25:39
Статья в формате PDF
90 KB...
27 08 2026 3:58:49
С целью оценки клинико-лабораторной эффективности плазмафереза в лечении больных с тяжелой дифтерией проведено обследование 28 пациентов с токсической дифтерией ротоглотки 3-й степени. Установлено, что использование плазмафереза в лечении больных дифтерией позволяет ускорить исчезновение симптомов интоксикации, специфического воспаления в ротоглотке, снизить частоту встречаемости осложнений заболевания и изменить их хаpaктер в сторону уменьшения тяжелых форм, а также способствует динамичному восстановлению показателей обмена гликопротеидов, активности изоферментов аминотрaнcфераз.
...
25 08 2026 5:45:25
Статья в формате PDF
291 KB...
24 08 2026 23:29:54
Статья в формате PDF
142 KB...
23 08 2026 21:35:31
Исследования проведены на 128 пoлoвoзрелых крысах различного пола, содержавшихся в «курительных камерах» в течение 60 дней с ежедневной затравкой животных в течение 1 часа. Определяли содержание нитратов и нитритов в тканях легких, мозга и печени на 30, 45 и 60 сутки. Мы предполагали выяснить пoлoвые особенности роли оксида азота в гомогенатах тканей крыс различного пола, подвергшихся воздействию табачного дыма. Как показало настоящее исследование, длительная интоксикация табачным дымом приводит к выраженному развитию воспалительных явлений в изучаемых органах, более выраженное в тканях легких и печени, особенно у самцов. В генезе выявленных морфологических и морфометрических изменений в исследуемых тканях лежит активизация индуцибельной формы оксида азота, что приводит к прогрессированию воспалительных и оксидативных явлений. Выявлен пoлoвoй диморфизм в регуляции уровня оксида азота.
...
21 08 2026 15:23:48
Статья в формате PDF
117 KB...
19 08 2026 9:56:35
Цитомегаловирусная инфекция (ЦМВИ) относится к числу самых распространенных вирусных заболеваний. Наиболее уязвимыми являются плод и новорожденный. Целью данного исследования явилась ранняя диагностика нарушений внутриутробного состояния плода у беременных с ЦМВИ.
Благодаря разработке новой ультразвуковой аппаратуры, основанной на эффекте Допплера проводились исследования кровотока в магистральных сосудах, а именно маточных артериях. Согласно поставленной цели по разработанной нами методике были рассмотрены анкеты клинико-лабораторного исследования у беременных
с ЦМВИ. Всего обследовано 115 женщин с различными сроками беременности и 40, составляющих контрольную группу.
Из общего числа беременных у 64 (55,7 %) ЦМВИ протекала в легкой форме, первично-латентную инфекцию наблюдали у 48 (41,7 %) пациенток.
Ультразвуковое сканирование проводилось в разные сроки беременности, преимущественно во II-III триместрах, однако, по показаниям в некоторых случаях УЗИ осуществляли и в более ранние сроки. Исследование проводилось на аппарате «Aloka» 1700 SSD с допплерометрическим блоком пульсирующей волны, с использованием трaнcдьюсеров 3,5 и 5 мГц и трaнcвaгинальным датчиком 6,5 мГц. При допплерографии в акушерстве применяется качественный анализ кривых скоростей кровотока (КСК). Определяются систоло-диастолическое соотношение (СДО), индекс резистентности (ИР), пульсовый индекс (ПИ). В нашем исследовании наиболее нeблагоприятным признаком явилось появление дикротической выемки на фоне двухстороннего нарушения маточно-плацентарного кровотока. У беременных с латентной формой ЦМВИ нами выявлена также ассиметрия маточно-плацентарного кровотока. Изменение кровотока в правой МА более выражено, что, по-видимому связано с наличием плацентации одноименной стороны.
Снижение маточно-плацентарного кровотока в правой МА постепенно приводит к снижению в левой МА, и связано с наличием морфологических изменений в плаценте. Более выраженные нарушения маточно-плацентарного кровотока встретились у беременных с СЗРП. Из этого следует, что основная причина гипотрофии – это нарушение маточно-плацентарного кровотока.
...
17 08 2026 9:37:54
Статья в формате PDF
577 KB...
16 08 2026 17:23:11
Статья в формате PDF
257 KB...
15 08 2026 4:21:56
Статья в формате PDF
111 KB...
14 08 2026 12:23:46
Статья в формате PDF
276 KB...
11 08 2026 18:31:59
Статья в формате PDF
118 KB...
10 08 2026 15:35:41
Статья в формате PDF
113 KB...
09 08 2026 21:53:18
Статья в формате PDF
172 KB...
08 08 2026 16:18:20
Приведенные материалы исследования позволяют заключить следующее. Изменения в диссимиляции глюкозы происходят еще до утраты клетками способности образовывать колонии на питательных средах. Уменьшение количества и замедление выхода радиоактивного углекислого газа в НФ холерных вибрионов, вероятно, связано с перестройкой метаболизма, проявляющемся в сдвиге его в сторону гликолиза и разрывом цепей цикла Кребса, хаpaктерным для хемолитоавтотрофов. Пребывание в условиях микрокосмов при низкой температуре индуцирует функционирования цикла Кальвина, что вероятно, обеспечивает клетку необходимыми пластическими материалами и способствует выживанию при отсутствии органических питательных веществ.
...
07 08 2026 15:56:11
Статья в формате PDF
89 KB...
06 08 2026 0:28:16
Статья в формате PDF
134 KB...
05 08 2026 5:13:24
Статья в формате PDF
274 KB...
04 08 2026 21:37:59
Статья в формате PDF
987 KB...
03 08 2026 11:21:33
Статья в формате PDF
119 KB...
02 08 2026 10:13:23
Статья в формате PDF
115 KB...
01 08 2026 1:40:31
Исследовано явление физической адсорбции высших предельных аминов, которые являются распространенными органическими загрязняющими веществами водных объектов, на поверхности раздела фаз «твердое — жидкое». Изучены возможности спектрофотометрического определения концентрации додециламина в воде применительно к явлениям адсорбции этого вещества на поверхности силикатных минералов, имеющих место в пpaктике обогащения полезных ископаемых и химической промышленности.
...
31 07 2026 21:16:39
Еще:
Поддержать себя -1 :: Поддержать себя -2 :: Поддержать себя -3 :: Поддержать себя -4 :: Поддержать себя -5 :: Поддержать себя -6 :: Поддержать себя -7 :: Поддержать себя -8 :: Поддержать себя -9 :: Поддержать себя -10 :: Поддержать себя -11 :: Поддержать себя -12 :: Поддержать себя -13 :: Поддержать себя -14 :: Поддержать себя -15 :: Поддержать себя -16 :: Поддержать себя -17 :: Поддержать себя -18 :: Поддержать себя -19 :: Поддержать себя -20 :: Поддержать себя -21 :: Поддержать себя -22 :: Поддержать себя -23 :: Поддержать себя -24 :: Поддержать себя -25 :: Поддержать себя -26 :: Поддержать себя -27 :: Поддержать себя -28 :: Поддержать себя -29 :: Поддержать себя -30 :: Поддержать себя -31 :: Поддержать себя -32 :: Поддержать себя -33 :: Поддержать себя -34 :: Поддержать себя -35 :: Поддержать себя -36 :: Поддержать себя -37 :: Поддержать себя -38 ::
