Исследование структурно-функциональных свойств глюкоамилазы из дрожжей saccharomyces cerevisiae

Авторы
Файлы

Ковалева Т.А. Кожокина О.М. Артюхов В.Г. Статья в формате PDF 101 KB Изучение структурно-функциональных свойств глюкоамилазы необходимо для расшифровки молекулярного механизма катализа реакции гидролиза крахмала до глюкозы. В качестве продуцента фермента нами был выбран штамм хлебопекарных дрожжей Saccharomyces cerevisiae. Методика очистки глюкоамилазы включала стадии ультрафильтрации на мембране УФМ-50, осаждения изопропиловым спиртом и гель-хроматографии на сефадексах G-25 и G-100. Оптимальными условиями функционирования полученного фермента являются температура 37^oС, значение рН среды 4,7, концентрация субстрата 1,17 10^-6 моль/л. Исследование процесса термической инактивации показало низкую термостабильность глюкоамилазы дрожжевого происхождения по сравнению с энзимом из микромицета Aspergillus awamopi. На основании данных, полученных при изучении кинетико-термодинамических параметров термоденатурации, и результатов дифференциально-термического анализа сделано заключение о сложном механизме разворачивания упорядоченной белковой глобуле в хаотический клубок, включающем ряд промежуточных стадий.

Сравнение аминокислотных последовательностей глюкоамилаз из Saccharomyces cerevisiae и Aspergillus awamopi показало их гомологичность на 13,1%. Анализ вторичной структуры этих ферментов свидетельствует об участии ≈ 60% всех аминокислотных остатков в образовании упорядоченных элементов данного уровня организации. Выявлено, что α -спирали и β-слои, хаpaктеризующиеся наличием исключительно антипараллельных цепей, не имеют тенденции к топологии в определенных участках белковой глобулы. Установлено, что в молекулах глюкоамилазы отсутствуют π -спирали, полипролиновые спирали и, по-видимому, 3₁₀-спирали.

Сравнительный анализ прострaнcтвенных моделей глюкоамилаз из Saccharomyces cerevisiae и Aspergillus awamopi позволил обнаружить их значительное сходство аналогична плотная упаковка гидрофобного ядра, активный центр находится в полости, содержащей молекулы воды, в каталитическом акте принимает участие карбоксильная группа глутаминовой кислоты.

На основании данных по определению значений рК диссоциирующих групп, фотоокисления в присутствии метиленового гoлyбого и результатов компьютерного моделирования установлено, что в связывании крахмала принимают участие О-гликозилированные участки крахмалсвязывающего домена и Trp-120 за разрыв гликозидных связей ответственны СООН-группы Asp-55, Glu-179, Glu-400.

УСТРОЙСТВО ДЛЯ СБОРА ПРОЛИТЫХ НЕФТЕПРОДУКТОВ С ПОВЕРХНОСТИ ЗЕМЛИ

Статья в формате PDF 293 KB...

23 05 2026 18:30:56

СОЦИАЛЬНАЯ ПОЗИЦИЯ И НРАВСТВЕННАЯ РОЛЬ КАТОЛИЦИЗМА В СОВРЕМЕННОМ МИРЕ

Статья в формате PDF 269 KB...

22 05 2026 6:32:35

ЗАПАС ЭНЕРГИИ В ОРГАНИЗМЕ

Статья в формате PDF 134 KB...

21 05 2026 4:39:35

ТЕХНИЧЕСКИЕ РЕШЕНИЯ ОПТИМИЗАЦИИ ГИБКИХ ХТС, СОДЕРЖАЩИХ МОДУЛИ С ВРАЩАЮЩЕЙСЯ НАСАДКОЙ

Статья в формате PDF 156 KB...

20 05 2026 7:50:56

ИНОРОДНЫЕ ТЕЛА ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНОГО ТРАКТА

Под наблюдением автора было 298 больных инородными телами желудочнокишечного тpaкта. Обсуждаются вопросы тактики консервативного лечения. В основном тактика консервативная. У поступивших больных спустя 2-3 часа инородные тела удалены эндоскопически 185 (62%), инородные отошли самостоятельно у 88 больных. Однако, 35 (11,7%) больных были оперированы. Поэтому авторами обсуждаются сроки оперативных вмешательств. Сформулирована концепция сроков операций. Больные с перитонитом, кровотечением, непроходимостью, с инородными телами длиной более 13 см оперируются в экстренном порядке, а пациенты с фиксированными инородными телами (диагноз рентгенологически) с клиническими проявлениями (боль, повышение температуры, лейкоцитоз) оперируются в срочном порядке. В несрочном порядке авторы предлагают оперировать больных с фиксированными инородными телами на 5-7 день (диагноз рентгенологически без клинических проявлений). Летальных исходов не было. ...