Морфология колоний, формируемых индуцибельными остеогенными клеткамипредшественниками в культурах селезёнки мышей разного возраста

Авторы
Файлы

Лебединская О.В. Горская Ю.Ф. Швецов Е.Н. Статья в формате PDF 115 KB Установлено, что в кроветворных органах взрослых млекопитающих имеется два типа остеогенных клеток-предшественников, способных при эксплантации ин витро образовывать колонии - клоны фибробластов и обладающих остеогенными свойствами. Это детерминированные остеогенные клеткипредшественники (ДОКП), входящие в состав популяции стромальных клоногенных клеток (КОК-Ф) костного мозга и индуцибельные остеогенные предшественники (ИОКП), являющиеся составной частью популяций клоногенных клеток стромы селезёнки и тимуса и выявляющиеся в периферической крови (А.Я. Фриденштейн, К.С. Лалыкина, 1973). ДОКП включают в себя те костномозговые стромальные клетки, которые способны реализовать потенции дифференцировки без действия индуцирующих факторов остеогенеза, в то время как ИОКП для дифференцировки нуждаются в специфических индукторах остеогенеза (например, переходном эпителии мочевого пузыря или декальцированной костной матрице). Существует предположение, что пул ДОКП и ИОКП может постепенно истощаться при сенильном остеопорозе. Во всяком случае, численность ИОКП в кроветворных органах морских свинок и мышей с возрастом существенно снижается (Ю.Ф. Горская с соавт., 2000).

Известно, что для пролиферации КОК-Ф костного мозга мышей и крыс в культурах необходимы тромбоцитарные ростовые факторы, источником которых служат облученные костномозговые клетки морской свинки (фидер). В связи с этим интересно выяснить, как влияет на пролиферацию индуцибельных остеогенных клеток-предшественников, входящих в состав КОК-Ф селезёнки, совместное присутствие облучённого фидера и эпителия мочевого пузыря и какие изменения наблюдаются в этом процессе при старении.

Этот вопрос возможно прояснить при исследовании морфологии колоний, формируемых ИОКП в культурах селезёнки молодых (12 мес.) и старых (24 мес.) мышей при добавлении им только фидера, или совместно фидера и эпителия мочевого пузыря, помещённого в инсерт (Costar, США) с непроницаемым для клеток фильтром.

Колонии, сформированные индуцибельными остеогенными клетками-предшественниками мы изучали после окраски азур II эозином и подсчитывали процентное содержание двух типов колоний, отражающих различную пролиферативную активность составляющих их клеток.

Поскольку каждая из колоний представляет собой клон - потомство одной стромальной клеткипредшественницы, основную массу колонии составляют фибробласты. Наибольшей пролиферативной активностью обладают фибробласты, формирующие компактные колонии с одним или несколькими центрами размножения (О.В. Лебединская, И.А. Кочурова, 1997). Менее активными в пролиферативном плане являются диффузные колонии, в которых фибробласты разобщены между собой и одинаково свободно распределены по всей колонии.

Результаты исследования прежде всего показали, что в культурах селезёнки молодых животных (с добавлением фидера) преобладающими являются активные в пролиферативном плане компактные колонии (78.6 и 21,4%), а у старых почти равное соотношение обоих видов с недостоверным превышением содержания колоний диффузного типа (42 и 58%).

Заметно меняется морфологическая картина колоний при добавлении в культуры эпителия мочевого пузыря. У старых животных процентное содержание компактных колоний уже в полтора раза превышает число диффузных (60,9 и 39,1%), а у молодых животных это соотношение ещё в большей степени сдвигается в сторону пролиферативно-активного типа колоний (86,5 и 13,5%).

Таким образом, полученные данные позволяют предположить, что с возрастом заметно снижается пролиферативная активность индуцибельных остеогенных клеток-предшественников селезёнки, но их популяция неоднородна. Часть КОК-Ф селезёнки требуют для пролиферации тромбоцитарных ростовых факторов (РФ), содержащихся в фидере - облучённом костном мозге морской свинки, а часть - кроме тромбоцитарных, нуждается в ростовом факторе переходного эпителия мочевого пузыря. Причём в молодом возрасте ИОКП, по-видимому, более чувствительны к индуцирующему действию эпителия мочевого пузыря, чем в старом.

СТРУКТУРА ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНЫХ СПОСОБНОСТЕЙ ЧЕЛОВЕКА

Статья в формате PDF 149 KB...