1

• Авторы
• Файлы

Минина В.И. Ахматьянова В.Р. Савченко Я.С. Ветрова И.В Ковальская Т.Н. Ярунова Е.Н. Статья в формате PDF 136 KB В настоящее время интерес к ядрышковому показателю вновь возрастает среди специалистов в области медицины и биологии. Это связано с тем, что на основании полученных данных о структуре ядрышек, их размерах, форме и количестве можно судить о степени функциональной активности рибосомных генов, входящих в состав интерфазных ядрышек. Особое внимание направлено на изучение данного показателя у представителей малых этнических групп Сибири. Это обусловлено тем, что представители таких популяций в большинстве случаев живут компактно на одной определённой территории в течение многих поколений. В результате этого в таких популяциях могут накапливаться определённые морфофункциональные, биохимические варианты, а также генетические маркёры. В связи с этим нами был проведен количественный анализ ядрышек в ядрах лимфоцитов периферической крови у представителей таких этнографических групп Кемеровской области, как телеуты, калмаки, шорцы и русские.

Материалы и методы.

Для анализа количества ядрышек периферической крови осуществляли подготовку препаратов с использованием стандартного полумикрометода культивирования лимфоцитов [Hungerford P.,1964].

Изучение ядрышек проводили на препаратах хромосом, окрашенных раствором азотнокислого серебра по методу Howell W.M. и Black D.A [1980] с некоторыми модификациями [Ляпунова Н.А., 1998].

На препаратах, приготовленных от каждого обследованного, было подсчитано количество ядрышек в 100 ядрах лимфобластов.

Результаты.

На основе количественного анализа ядрышек мы получили возможность выявления некоторых этнических особенностей. Полученные результаты представлены в таблице 1.

Таблица 1. Количество ядрышек в ядрах лимфоцитов периферической крови у народов Кемеровской области

Группа	Количество ядрышек в ядрах лимфоцитов
	Клеток	M ± m	Min - Max
Русские (г. Кемерово)	55000	2,64 ± 0,07	1,66 - 4,47
Телеуты (п. Беково)	66000	2,57 ± 0,08	1,68 - 4,49
Шорцы (г. Таштагол)	28000	1,68 ± 0,04*	1,36 - 2,16
Калмаки (п. Юрт-Константиново)	25000	1,78 ± 0,05*	1,45 - 2,67

^* достоверно отличается от русских жителей р < 0,0001

Из таблицы видно, что среднее число ядрышек в ядрах лимфоцитов периферической крови у телеутов, шорцев и калмаков меньше, чем у русских жителей Кемеровской области. Достоверно значимые отличия от русских жителей были отмечены в группах шорцев и калмаков (U_M-W=16,5 и 25,5). В целом, полученные данные могут свидетельствовать о существовании этнических особенностей прострaнcтвенного расположения хромосом, несущих рибосомные гены.

Известно, что на прострaнcтвенную организацию ядра могут влиять различные факторы, вызывающие повреждение структуры хромосом, например, радиация. В изученных группах ранее был проведен анализ частоты хромосомных аберраций [Дружинин В.Г., 2003] в лимфоцитах периферической крови (табл.2). Из таблицы видно, что самые высокие значения по уровню хромосомных нарушений были отмечены в группе шорцев - 5,80%. В тоже время, среднее число ядрышек на ядро у них самое низкое (1,68 на ядро), т.е. в данной этнической группе хромосомный мутагенез не оказывал значимого влияния на прострaнcтвенную организацию ядра и формирование ядрышек. Это справедливо также и для группы калмаков.

Таблица 2. Частота аберрантных метафаз в изученных группах

Группа	Частота хромосомных аберраций (%)
	n	M±m	Min-Max
Русские	51	3,46 ± 0,35	0 - 13,0
Телеуты	66	2,73 ± 0,25	0 - 9,5
Шорцы	26	5,80 ± 0,63*	0 - 15,9
Калмаки	25	3,79 ± 0,55	0 - 9,0

 * достоверно выше по сравнению с другими группами р<0,05

Группы телеутов и русских доноров по частоте аберрантных метафаз достоверно друг от друга не отличаются. Эти же группы достоверно не различаются по количеству ядрышек в ядре.

На следующем этапе исследования всех обследованных доноров разделили на две группы в зависимости от индивидуальной частоты хромосомных аберраций (ХА). Исходя из того, что общепопуляционный уровень хромосомных мутаций в Кемеровской области составляет 2,86% [Дружинин В.Г., 2003] были сформированы группы доноров с индивидуальной частотой ХА менее 3% и 3% и выше. В связи с этим был проведен учет количества ядрышек в зависимости от частоты хромосомных аберраций у представителей разных этнографических групп Кемеровской области (табл.3).

Таблица 3. Количество ядрышек в зависимости от частоты хромосомных аберраций

Группа	ХА < 3		ХА >= 3
	n	M ± m	n	M ± m
Русские (общ)	24	2,68 ±0,12	27	2,61 ± 0,09
Телеуты	45	2,29 ± 0,05*	20	3,20 ± 0,17
Шорцы	5	1,56 ± 0,05	21	1,73 ± 0,05
Калмаки	13	1,66 ± 0,03	12	1,78 ± 0,09

* достоверно отличается от ХА>=3, Р<0,05

Было выявлено, что у телеутов среднее число ядрышек в ядрах лимфоцитов периферической крови при частоте ХА менее 3%, достоверно меньше, чем при частоте ХА более 3%. У русских жителей Кемеровской области такая закономерность не обнаружена.

Данный факт может свидетельствовать о том, что у телеутов ядрышковый показатель является специфическим маркером повышенной индивидуальной токсико-генетической чувствительности к факторам среды.

Кроме этого, во всех исследуемых группах был проведен анализ частоты встречаемости клеток с различным числом ядрышек (от 1 до 6). Было выявлено, что вне зависимости от национальности чаще всего встречались клетки с 1-3 ядрышками на ядро.

У шорцев и калмаков частота встречаемости клеток с большим количеством ядрышек (4 и более) заметно меньше, чем у представителей других этнических групп.

При сравнении всех распределений с помощью критерия χ² было показало существование достоверно значимых отличий (лишь распределения в группах телеутов и русских достоверно не отличались).

Таким образом, на основании полученных результатов можно сделать следующие выводы:

1. вне зависимости от национальной принадлежности во всех группах чаще всего встречались клетки с одним - тремя ядрышками в ядре;
2. в группах шорцев и калмаков отмечено достоверно меньшее количество ядрышек в лимфоцитах, чем в группах русских жителей Кузбасса и телеутов;
3. несмотря на высокие значения хромосомных мутаций у шорцев и калмаков прострaнcтвенная организация ядра у них не претерпевает существенных изменений;
4. по среднему количеству ядрышек в лимфоцитах группа телеутов достоверно не отличается от группы русских жителей Кузбасса;
5. в группе телеутов выявлена следующая особенность: у индивидов с повышенными значениями частоты аберрантных метафаз наблюдались и более высокое число ядрышек в лимфоцитах.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Дружинин В.Г. Хромосомные нарушения у населения крупного промышленного региона: прострaнcтвенно-временной цитогенетический мониторинг. - Автореферат докторской диссертации. М., 2003.
2. Ляпунова Н.А., Кравец-Maндрон И.А., Цветкова Т.Г. Цитогенетика ядрышкообразующих районов (ЯОР) хромосом человека: выделение четырех морфофункциональных вариантов ЯОР, их межиндивидуальное и межхромосомное распределение //Генетика. - 1998. - Т.34. - № 9. - С. 1298 - 1306.
3. Howell W.M., Black D.A. Controlled silver-staining of nucleolus organizer regions a protective colloidal developer: a one step method //Experienta. - 1980. - V. 36. - P. 1014-1015.
4. Hungerford D.A. Leucocytes cultured from small inocula of whole blood and preparation of methaphase chromosomes by treatment with hypotonic KCl //Stain. Technol. - 1964. - Vol. 40. - P. 333 - 338.

---