ТРОМБОЦИТАРНЫЙ ГЕМОСТАЗ У ЗДОРОВЫХ ЛЮДЕЙ И ЖИВОТНЫХ В ЦЕНТРАЛЬНОМ ЧЕРНОЗЕМЬЕ РОССИИ

1

• Авторы
• Файлы

Медведев И.Н. Наумов М.М. Павлов М.Н. Статья в формате PDF 240 KB Тромбоцитарное звено гемостаза выполняет ряд функций, важнейшей из которых является адгезия и агрегация кровяных пластинок к поврежденному участку сосуда с последующей остановкой кровотечения. От активности тромбоцитов во многом зависит скорость нормального протекания всего первичного гемостаза и возможность развития патологических процессов - атеросклероза, ишемии внутренних органов, тромбозов различных локализаций, состояние микроциркуляции и др. Агрегационная способность тромбоцитов (АТ) под действием различных индукторов и их внутрисосудистая активность (ВАТ) может зависить от многих условий, в т.ч. от особенностей региона проживания. Проведение исследований тромбоцитарного гемостаза у различных групп живых существ с медицинских и биологических позиций требует определения нормативных показателей тромбоцитарного гемостаза у здоровых жителей г. Курска и новорожденных телят.

Цель работы: определить некоторые параметры тромбоцитарного гемостаза у здоровых людей и новорожденных телят.

Материалы и методы.

С учетом цели работы обследовано в летне-осенний период 21 здоровый человек и 23 новорожденных теленка. На момент осмотра не выявлено отклонений в объективном статусе людей и животных. В анамнезе существенных заболеваний не отмечено. Лабораторные и инструментальные методы исследования не выявили отклонений от общепринятой нормы.

Оценивали следующие параметры. Активность перекисного окисления липидов (ПОЛ) плазмы определяли по содержанию ТБК-активных продуктов набором фирмы ООО «Агат-Мед», ацилгидроперекисей (АГП) [2] и антиокислительному потенциалу жидкой части крови [1]. Внутротромбоцитарное ПОЛ оценили по концентрации базального и стимулированного тромбином уровня малонового диальдегида (МДА) в реакции восстановления тиобарбитуровой кислоты [9], в модификации [2]. Внутритромбоцитарную антиоксидантную систему хаpaктеризовали активность каталазы и супероксиддисмутазы (СОД) по [7]. Для косвенной оценки обмена арахидоновой кислоты в тромбоцитах, а также выявления уровня активности в них циклооксигеназы и тромбоксансинтетазы использованы 3 пробы переноса по методу Ермолаевой Т.А, и соавт. (1992) с регистрацией агрегации тромбоцитов (АТ) на ФЕКе [5]. Производили подсчет количества тромбоцитов в капиллярной крови в камере Горяева. Агрегационная способность тромбоцитов исследовалась визуальным микрометодом [3] по Шитиковой А.С. (1999) с использованием в качестве индукторов АДФ (0,5х10^{-4 М.),} коллагена (разведение 1:2 основной суспензии), тромбина (0,125 ед/мл.), ристомицина (0,8 мг/мл.), адреналина (5х10-6 М.) и перекиси водорода (7,3х10-3 М.). Внутрисосудистую активность тромбоцитов (ВАТ) оценивали с фазовым контрастом по Шитиковой А.С. (1997). Статистическая обработка полученных результатов проведена с использованием t-критерия Стьюдента.

Результаты исследования обсуждение

Концентрация ТБК-активных продуктов в плазме здоровых людей составила 3,50±0,03 мкмоль/л., у телят - 3,92±0,06 мкмоль/л. Уровень МДА в тромбоцитах составлял у людей 0,66±0,003 нмоль/10⁹ тр., у телят - 0,89±0,02 нмоль/10⁹ тр. Уровень стимулированного тромбином МДА тромбоцитов у людей составлял 6,38±0,04 нмоль/10⁹ тр. и его выделение 5,79±0,05 номоль/10⁹ тр. были ниже аналогичных показателей у животных (8,01±0,02 нмоль/10⁹ тр. и 7,12±0,05 нмоль/10⁹ тр., соответственно. Содержание АГП в плазме людей составило 1,44±0,006 Д₂₃₃/1 мл., у животных 1,92±0,02 Д₂₃₃/1 мл. В тромбоцитах телят содержание АГП 2,87±0,04 Д₂₃₃/1 тр. также достоверно превышало аналогичный показатель у людей 2,13±0,01 Д₂₃₃/1 тр.

Данный уровень ПОЛ в плазме и тромбоцитах у людей и животных поддерживался в результате определенного уровня антиоксидантной активности плазмы у людей - 32,5±013%, у телят - 28,6±0,04% и состояния антиокислительных ферментов кровяных пластинок - СОД- у людей 1520,0±4,03 МЕ/10⁹ тр., у телят -1360,0±6,11 МЕ/10⁹ тр. и каталазы у людей - 9620,0±16,08 МЕ/10⁹ тр, у животных - 7300,0±14,20 МЕ/10⁹ тр.

Уровень обмена в тромбоцитах арахидоновой кислоты определял состояние тромбоксанообразования. В простой пробе переноса косвенно оценивался уровень тромбоксана в кровяных пластинках, составляющий у людей - 35,7±0,13%, у животных 39,2±0,02%. Активность циклооксигеназы, выявленной по восстановлению АТ в коллаген-аспириновой пробе, у животных составляла 78,4±0,19% и тромбоксансинтетазы, определенной по восстановлению АТ в коллаген-имидазольной пробе - 63,8±0,17%. У здоровых лиц аналогичные показатели составили 67,9±0,13 и 57,4±0,17%, соответственно. Количество тромбоцитов в крови у людей и животных было в пределах нормы.

Наиболее активным индуктором при исследовании АТ на стекле у здоровых лиц оказался коллаген (33,0±0,13с.). За ним следовали АДФ (42,0±0,40 с.), ристомицин (45,0±0,30 с.) и Н₂О₂ (47,0±0,35 с.). Поздняя АТ отмечена под действием тромбина (55,0±0,40 с.) и адреналина (94,0±0,37 с.).

Содержание интактных форм тромбоцитов - дискоцитов составило 84,0±0,10%. Количество тромбоцитов, находящихся в начальной фазе активации - диско-эхиноцитов достигало 11,4±0,10%. Число сфероцитов, сферо-эхиноцитов и входящих в рефpaктерное состояние биполярных форм тромбоцитов равнялось 2,4±0,03%, 1,8±0,04% и 0,4±0,01%, соответственно. Сумма активных форм тромбоцитов у здоровых жителей г. Курска составила 16,0±0,10%. Установлено, что в их крови циркулирует 3,2±0,015 малых агрегатов и 0,16±0,002 больших агрегатов кровяных пластинок на 100 свободных тромбоцитов с вовлеченными в них 6,6±0,10% тромбоцитов от общего числа.

Наиболее активным индуктором при исследовании АТ на стекле у здоровых телят оказался коллаген (30,0±0,12с.). За ним по активности следовали АДФ (39,0±0,28с.) и ристомицин (41,0±0,26с.). Еще менее активными были Н₂О₂ (43,4±0,03с.) и адреналин (97,0±0,45с.).

Содержание интантных форм тромбоцитов - дискоцитов в кровотоке телят составило 82,0±0,16%. Количество тромбоцитов, находящихся в начальной фазе активации - диско-эхиноцитов достигало 10,3±0,10%. Число сфероцитов, сферо-эхиноцитов и входящих в рефpaктерное состояние биополярных форм тромбоцитов равнялась 4,6±0,6%, 2,6±0,02% и 0,5±0,04%, соответственно. Сумма активных форм тромбоцитов у здоровых телят составила 18,0±0,12%. Установлено, что в их крови циркулирует 3,6±0,04 малых агрегатов и 0,12±0,01 больших агрегатов кровяных пластинок на 100 свободных тромбоцитов с вовлеченными в них 5,0±0,2% тромбоцитов от общего числа.

Полученные параметры тромбоцитарного гемостаза могут считаться нормативными, т.к. получены в тщательно подобранных однородных группах здоровых людей и животных и в последующих исследованиях могут быть использованы как контрольные показатели.

Более высокий уровень ПОЛ в плазме и тромбоцитах животных обуславливает более высокую агрегационную активность тромбоцитов in vivo. Возможными механизмами этого усиления можно считать активизацию обмена арахидоновой кислоты с повышением в них тромбоксанообразования, зарегистрированную в пробах переноса и повышение концентрации участвующего в процессе агрегации фактора Виллебранда, косвенно оцененной по ускорению АТ с ристомицином. Активное тромбоксанообразование требует у телят повышение простациклиногенерации для поддержания баланса про- и антиагрегантных веществ в кровотоке. Исследование ВАТ позволяет приблизиться к пониманию реальных условий кровотока у людей и животных и состояния у них микроциркуляции.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Волчегорский И.А., Долгушин И.И., Колесников О.Л., Цейликман В.Э. Экспериментальное моделирование и лабораторная оценка адаптивных реакций организма. Челябинск. 2000.-167с.
2. Гаврилов В.Б., Мишкорудная М.И. Спектрофотометрическое определение содержания гидроперекисей липидов в плазме крови //Лабор. Дело. 1983.-№3.-с.33-36.
3. Гемостаз. Физиологические механизмы, принципы диагностики основных форм геморрагических заболеваний. Петрищев Н.Н., Папаян Л.П. (ред.) СПб.: 1999.-117с.
4. Ермолаева Т.А., Головина О.Г., Морозова Т.В. и др. Программа клинико-лабораторного исследования больных тромбоцитопатиями. СП.б, 1992.-25с.
5. Захария Е.А., Кипах М.В. Упрощенный способ определения агрегации и дезагрегации тромбоцитов. Лабораторное дело. 1989.-№1.- с.36-38.
6. Кубатиев А.А., Андреев С.В. Перекиси липидов и тромбоз. Бюлл. эксперим. биол. и мед. 1979.-№ 5.- с.414-417.
7. Чевари С., Андял Т., Штренгер Я. Определение антиоксидантных параметров крови и их диагностическое значение в пожилом возрасте. //Лабор. Дело. 1991.-№10.- с.9-13.
8. Шитикова А.С., Тарковская Л.Р., Каргин В.Д. Метод определения внутрисосудистой активации тромбоцитов и его значение в клинической пpaктике. Клинич. и лабор. диагностика. 1997.-№ 2.- с. 23-35.
9. Schmith J.B., Jngerman C.M., Silver M.J. Malondialdehyde formation as an indicator of prostaglandin, production by human platelet J.Lab. Clin. Med.1976.-Vol. 88.-№1.-р.167-172.

---