ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ АНАЛОГА ПЕПТИДА СЛИЯНИЯ ИЗ ГЕМАГГЛЮТИНИНА ВИРУСА ГРИППА С ФОСФОЛИПИДНЫМИ ЛИПОСОМАМИ: ИЗУЧЕНИЕ МЕТОДОМ 31Р-ЯМР

Пептиды слияния - фрагменты вирусных белков, состоящие из 20-25 аминокислот, способные вызывать слияние липидных и биологических мембран [1]. При изучении этих процессов удобно работать с водорастворимыми аналогами. Нами сконструирован аналог F31, состоящий из 31-го аминокислотного остатка: glfgaiagfieggwtgmidgwygygggkkkk.
С-концевой фрагмент GCGKKK обеспечивает водорастворимостиь пептида, а N-концевая часть (остатки 1-24) соответствует пептиду слияния из гемагглютинина (штамм A/PR/8/34). В пептиде имеется только один остаток глутаминовой кислоты (Glu11). Цель данной работы - изучить влияние пептида F31 на фосфолипидные липосомы при различных состояниях ионизации этого остатка. С учётом данных по величинам рКа остатков Glu в пептидах слияния, находящихся в мембранном окружении, есть основания считать, что при изменении рН от 7 до 4 с большой долей вероятности происходит протонирование боковой карбоксильной группы этого остатка. Поэтому нами взяты эти значения рН как такие, при которых остаток полностью заряжен (рН 7) и нейтрален (рН 4), соответственно. Фосфолипидные липосомы формировались из анионного фосфолипида диолеоилфосфатидилглицерина (ДОФГ). Т.к. заряд пептида в целом положителен при обоих значениях рН (4 и 7), это обеспечивает эффективное связывание с пловерхностью липосом за счёт электростатического притяжения. Следовательно, изменение хаpaктера вляиния пептида на липосомы при изменении рн от 7 до 4 будет означать изменение хаpaктера гидрофобного взаимодействия пептида с липосомами, вероятно, за счёт изменения глубины проникновения пептида в фосфолипидный бислой и/или хаpaктера ассоции пептидов на липосомах.
Наиболее удобным методом для исследования взаимодействий липид/пептид является метод 31P-ЯМР спектроскопии широких линий. Данный метод позволяет работать с бислойными мультиламеллярными липосомами, которые более адекватно моделирует биологическую мембрану. Показано, что форма линии 31P-ЯМР спектров мембран чувствительна к анизотропным движениям молекул фосфолипидов[2, 3], что позволяет следить за изменениями состояния модельной мембраны под воздействием пептида.
Для изучения рН-зависимости взаимодействия были проведены серии экспериментов при рН 4 и 7. Проанализировав полученные 31Р-ЯМР спектры с помощью разработанной нами программы P-FIT [4], были получены зависимости параметров, хаpaктеризующих состояние бислоя в зависимости от соотношения липид/пептид.
При рН 4 наблюдается значительное влияние пептида на состояние бислоя. Так, при последовательном добавлении пептида, начиная с соотношения липид/пептид 40:1 происходит формирование второй анизотропной составляющей. Данная составляющая хаpaктеризуется уменьшенным значением анизотропии химического сдвига а также уменьшенным значением степени деформации липосом магнитным полем спектрометра, что связано с уменьшением эластичности мембраны. При уменьшением соотношения липид/пептид от 40:1 до 15:1 происходит рост вклада этой составляющей от ~15% до ~50%. Также стоит отметить что начиная с соотношения липид/пептид 30:1 становится значительным вклад от изотропной составляющей, которая соответствует разрушенным липосомам. Величина этой составляющей растёт пропорционально количеству добавленного пептида и достигает значений 3-4%.
При рН 7 картина взаимодействия существенно иная: Во всём изученном диапазоне значений липид/пептид(от 50 до 15) не наблюдалось формирование дополнительных состояний модельного липидного бислоя. В то время как наблюдалось небольшое изменение параметров эластичности бислоя.
Таким образом, анализ влияния пептида на бислои ДОФГ при выбранных значениях рН подтверждает предположение о существенной роли ионогенного сотояния состояния остатка Glu11 во взаимодействии пептида слияния этого типа с липидным бислоем.
Благодарность:
Выражаем признательность РФФИ за финансовую поддержку, грант № 02-48882.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
- Dubovskii, P.V., Li, H., Takahashi, S., Arseniev, A.S., and Akasaka, K.Protein Sci., 2000 V. 9, P. 786-798.
- Seelig J. Biochim. Biophys. Acta. 1978. V. 515. P. 105-140.
- Brumm T., Mops A., Dolainsky C., Bruckner S., Bayerl T.M. Biophys. J. 1992. V. 61. P. 1018-1024.
- Dubovskii P.V., Lesovoy D.M., Dubinnyi M.A., Utkin Y.N., Arseniev A.S. // Eur. J. Biochem. 2003. V. 270. P. 2038-2046.
Статья в формате PDF
115 KB...
28 07 2026 3:54:14
Возникшее при низкодозовом радиационном воздействии повышение уровня ТТГ, снижение уровня тиреоидных гормонов, истощение симпатической импульсации и вегетативный дисбаланс, свидетельствует об установившейся адрено-тиреоидной дисфункции в организме жителей молодого (21–30 лет) и пожилого возраста (61–70 лет) проживающих в районах, прилегающих к Семипалатинскому ядерному полигону.
...
27 07 2026 2:31:26
Статья в формате PDF
111 KB...
24 07 2026 19:48:35
Статья в формате PDF
138 KB...
23 07 2026 21:59:35
Статья в формате PDF
121 KB...
22 07 2026 7:35:18
Статья в формате PDF
101 KB...
21 07 2026 7:33:38
Статья в формате PDF
105 KB...
20 07 2026 23:12:15
Статья в формате PDF
305 KB...
19 07 2026 2:37:33
Статья в формате PDF
253 KB...
18 07 2026 12:28:45
Статья в формате PDF
125 KB...
17 07 2026 18:34:18
Статья в формате PDF
302 KB...
16 07 2026 5:11:56
Статья в формате PDF
139 KB...
15 07 2026 23:32:32
Статья в формате PDF
120 KB...
13 07 2026 3:41:39
12 07 2026 23:12:31
Статья в формате PDF
114 KB...
11 07 2026 2:23:45
Статья в формате PDF
124 KB...
10 07 2026 0:12:21
Статья в формате PDF
236 KB...
09 07 2026 16:19:47
Статья в формате PDF
175 KB...
08 07 2026 11:41:26
Статья в формате PDF
249 KB...
07 07 2026 20:22:47
Статья в формате PDF
319 KB...
06 07 2026 3:37:13
Статья в формате PDF
105 KB...
05 07 2026 14:34:12
Статья в формате PDF
196 KB...
04 07 2026 13:28:59
Статья в формате PDF
105 KB...
03 07 2026 8:27:22
Статья в формате PDF
105 KB...
02 07 2026 18:30:34
Статья в формате PDF
333 KB...
01 07 2026 9:43:35
30 06 2026 9:31:30
Статья в формате PDF
187 KB...
29 06 2026 2:38:24
Статья в формате PDF
116 KB...
28 06 2026 14:38:22
Статья в формате PDF
393 KB...
27 06 2026 7:47:15
Статья в формате PDF
127 KB...
26 06 2026 15:37:16
Статья в формате PDF
590 KB...
23 06 2026 20:40:21
Установлена высокая активизация в костном мозге крыс необработанным янтарем процессов пролиферации и дифференциации клеток зернистого ростка лейкоцитов, эритроидного ростка и лимфоидных клеток. Изучено влияние необработанного янтаря на морфофункциональные реакции в иммунокомпетентных структурных компонентах лимфоидных органов и выявлена активизация в них Т- и В-зависимых зон. В лимфатических узлах это выражалось виде расширения площадей лимфатических узелков без светлых и со светлыми центрами, мякотных тяжей и паpaкортикальной зоны на фоне уменьшения площади, занимаемой корковым плато; в селезенке в виде расширения площадей лимфатических узелков без светлых и со светлыми центрами и периваскулярных лимфоидных муфт; в тимусе в виде расширения площади коркового вещества органа, на фоне некоторого уменьшения площади мозгового вещества органа. Разные формы применения необработанного янтаря способствовали повышению в лимфоидных органах содержания Т- и В-лимфоцитов, Т-хелперов и снижению до уровня физиологических норм Т-супрессоров/киллеров.
...
22 06 2026 12:12:54
Статья в формате PDF
127 KB...
21 06 2026 0:16:13
Статья в формате PDF
105 KB...
20 06 2026 17:38:10
Статья в формате PDF
111 KB...
19 06 2026 23:49:44
Еще:
Поддержать себя -1 :: Поддержать себя -2 :: Поддержать себя -3 :: Поддержать себя -4 :: Поддержать себя -5 :: Поддержать себя -6 :: Поддержать себя -7 :: Поддержать себя -8 :: Поддержать себя -9 :: Поддержать себя -10 :: Поддержать себя -11 :: Поддержать себя -12 :: Поддержать себя -13 :: Поддержать себя -14 :: Поддержать себя -15 :: Поддержать себя -16 :: Поддержать себя -17 :: Поддержать себя -18 :: Поддержать себя -19 :: Поддержать себя -20 :: Поддержать себя -21 :: Поддержать себя -22 :: Поддержать себя -23 :: Поддержать себя -24 :: Поддержать себя -25 :: Поддержать себя -26 :: Поддержать себя -27 :: Поддержать себя -28 :: Поддержать себя -29 :: Поддержать себя -30 :: Поддержать себя -31 :: Поддержать себя -32 :: Поддержать себя -33 :: Поддержать себя -34 :: Поддержать себя -35 :: Поддержать себя -36 :: Поддержать себя -37 :: Поддержать себя -38 ::