ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ АНАЛОГА ПЕПТИДА СЛИЯНИЯ ИЗ ГЕМАГГЛЮТИНИНА ВИРУСА ГРИППА С ФОСФОЛИПИДНЫМИ ЛИПОСОМАМИ: ИЗУЧЕНИЕ МЕТОДОМ 31Р-ЯМР

Авторы
Файлы

Лесовой Д.М. Жмак М.Н. Люкманова Е.Н. Дубовский П.В. Статья в формате PDF 112 KB

Пептиды слияния - фрагменты вирусных белков, состоящие из 20-25 аминокислот, способные вызывать слияние липидных и биологических мембран [1]. При изучении этих процессов удобно работать с водорастворимыми аналогами. Нами сконструирован аналог F31, состоящий из 31-го аминокислотного остатка: glfgaiagfieggwtgmidgwygygggkkkk.

С-концевой фрагмент GCGKKK обеспечивает водорастворимостиь пептида, а N-концевая часть (остатки 1-24) соответствует пептиду слияния из гемагглютинина (штамм A/PR/8/34). В пептиде имеется только один остаток глутаминовой кислоты (Glu11). Цель данной работы - изучить влияние пептида F31 на фосфолипидные липосомы при различных состояниях ионизации этого остатка. С учётом данных по величинам рК_а остатков Glu в пептидах слияния, находящихся в мембранном окружении, есть основания считать, что при изменении рН от 7 до 4 с большой долей вероятности происходит протонирование боковой карбоксильной группы этого остатка. Поэтому нами взяты эти значения рН как такие, при которых остаток полностью заряжен (рН 7) и нейтрален (рН 4), соответственно. Фосфолипидные липосомы формировались из анионного фосфолипида диолеоилфосфатидилглицерина (ДОФГ). Т.к. заряд пептида в целом положителен при обоих значениях рН (4 и 7), это обеспечивает эффективное связывание с пловерхностью липосом за счёт электростатического притяжения. Следовательно, изменение хаpaктера вляиния пептида на липосомы при изменении рн от 7 до 4 будет означать изменение хаpaктера гидрофобного взаимодействия пептида с липосомами, вероятно, за счёт изменения глубины проникновения пептида в фосфолипидный бислой и/или хаpaктера ассоции пептидов на липосомах.

Наиболее удобным методом для исследования взаимодействий липид/пептид является метод ³¹P-ЯМР спектроскопии широких линий. Данный метод позволяет работать с бислойными мультиламеллярными липосомами, которые более адекватно моделирует биологическую мембрану. Показано, что форма линии ³¹P-ЯМР спектров мембран чувствительна к анизотропным движениям молекул фосфолипидов[2, 3], что позволяет следить за изменениями состояния модельной мембраны под воздействием пептида.

Для изучения рН-зависимости взаимодействия были проведены серии экспериментов при рН 4 и 7. Проанализировав полученные ³¹Р-ЯМР спектры с помощью разработанной нами программы P-FIT [4], были получены зависимости параметров, хаpaктеризующих состояние бислоя в зависимости от соотношения липид/пептид.

При рН 4 наблюдается значительное влияние пептида на состояние бислоя. Так, при последовательном добавлении пептида, начиная с соотношения липид/пептид 40:1 происходит формирование второй анизотропной составляющей. Данная составляющая хаpaктеризуется уменьшенным значением анизотропии химического сдвига а также уменьшенным значением степени деформации липосом магнитным полем спектрометра, что связано с уменьшением эластичности мембраны. При уменьшением соотношения липид/пептид от 40:1 до 15:1 происходит рост вклада этой составляющей от ~15% до ~50%. Также стоит отметить что начиная с соотношения липид/пептид 30:1 становится значительным вклад от изотропной составляющей, которая соответствует разрушенным липосомам. Величина этой составляющей растёт пропорционально количеству добавленного пептида и достигает значений 3-4%.

При рН 7 картина взаимодействия существенно иная: Во всём изученном диапазоне значений липид/пептид(от 50 до 15) не наблюдалось формирование дополнительных состояний модельного липидного бислоя. В то время как наблюдалось небольшое изменение параметров эластичности бислоя.

Таким образом, анализ влияния пептида на бислои ДОФГ при выбранных значениях рН подтверждает предположение о существенной роли ионогенного сотояния состояния остатка Glu11 во взаимодействии пептида слияния этого типа с липидным бислоем.

Благодарность:

Выражаем признательность РФФИ за финансовую поддержку, грант № 02-48882.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Dubovskii, P.V., Li, H., Takahashi, S., Arseniev, A.S., and Akasaka, K.Protein Sci., 2000 V. 9, P. 786-798.
Seelig J. Biochim. Biophys. Acta. 1978. V. 515. P. 105-140.
Brumm T., Mops A., Dolainsky C., Bruckner S., Bayerl T.M. Biophys. J. 1992. V. 61. P. 1018-1024.
Dubovskii P.V., Lesovoy D.M., Dubinnyi M.A., Utkin Y.N., Arseniev A.S. // Eur. J. Biochem. 2003. V. 270. P. 2038-2046.

Оценка гигиенической безопасности сырого молока

Статья в формате PDF 148 KB...

17 04 2026 16:38:34

ПРАКТИЧЕСКИЕ ВОПРОСЫ МАРШРУТИЗАЦИИ В IP-СЕТЯХ

Статья в формате PDF 293 KB...

16 04 2026 3:14:19

ОТОЖДЕСТВЛЕНИЕ ПАРАМЕТРОВ ФУНКЦИИ ВЕЙЕРШТРАССА-МАНДЕЛЬБРОТА ПРИ МОДЕЛИРОВАНИИ МИКРОУСКОРЕНИЙ

Статья в формате PDF 120 KB...

15 04 2026 23:34:40

ПЕРЕРАБОТКА ПЛАСТИКОВЫХ ОТХОДОВ

Статья в формате PDF 267 KB...

14 04 2026 9:31:31

ОПТИМАЛЬНОЕ УПРАВЛЕНИЕ ДИНАМИКОЙ ПРОИЗВОДСТВЕННЫХ ПОТОКОВ НА ТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ ЛИНИЯХ

Статья в формате PDF 96 KB...

13 04 2026 15:26:28

Влияние климатических факторов на здоровье молодых людей, проживающих в условиях центра и юга Сибири

Статья в формате PDF 304 KB...

12 04 2026 23:18:38

ПРОБЛЕМЫ РЕЛАКСАЦИИ И ДВИГАТЕЛЬНОГО РЕЖИМА У СТУДЕНТОВ СПЕЦИАЛЬНЫХ МЕДИЦИНСКИХ ГРУПП

Статья в формате PDF 139 KB...

11 04 2026 14:59:56

ПРОИЗВОДСТВО ОВОЩНОГО ПЮРЕ НА ПРЕДПРИЯТИИ ООО «СТАРОРУССКИЙ МЯСНОЙ ДВОР»

Статья в формате PDF 254 KB...

10 04 2026 10:52:30

Морфои экогенез экзогенного фиброзирующего альвеолита в условиях жаркого климата

Статья в формате PDF 104 KB...

09 04 2026 10:18:38

АНАЛИЗ ПОКАЗАТЕЛЕЙ, ХАРАКТЕРИЗУЮЩИХ БИОЭНЕРГЕТИЧЕСКОЕ СОСТОЯНИЕ ПРОМЫСЛОВЫХ СЕВЕРНЫХ РЫБ

Статья в формате PDF 103 KB...

08 04 2026 22:55:56

ПРИМЕНЕНИЕ МЕТОДОВ АППРОКСИМАЦИИ ДАННЫХ

Статья в формате PDF 253 KB...

07 04 2026 21:22:26

ОЦЕНКА СОВРЕМЕННОГО СОСТОЯНИЯ ЦЕНОПОПУЛЯЦИЙ ALLIUM SZOVITSII REGEL НА ТЕРРИТОРИИ НАЦИОНАЛЬНОГО ПАРКА «ПРИЭЛЬБРУСЬЕ»

Статья в формате PDF 152 KB...

06 04 2026 23:57:41

ПЕРЕСТРОЙКА ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ СЫВОРОТОЧНОГО АЛЬБУМИНА У БОЛЬНЫХ С ГАСТРОДУОДЕНАЛЬНОЙ ПАТОЛОГИЕЙ

Статья в формате PDF 121 KB...

05 04 2026 23:25:44

Протекторное и лечебное применение тыквеола при патологии гепатобилиарной системы у больных тяжелой бронхиальной астмой

Статья в формате PDF 104 KB...

04 04 2026 12:44:49

ТРЕБОВАНИЯ К ОБРАЗОВАТЕЛЬНОМУ ПРОЦЕССУ НА БАЗЕ СОВЕРШЕНСТВОВАНИЯ НОВЫХ ТЕХНОЛОГИЙ

Статья в формате PDF 174 KB...

03 04 2026 12:57:14

ОСОБЕННОСТИ ЦЕНОТИПА КИШЕЧНИКА ПРИ ПСОРИАЗЕ И ЭКЗЕМЕ

Статья в формате PDF 124 KB...

02 04 2026 8:22:45

ОПТИМИЗАЦИЯ ПРОЦЕССОВ НАГРЕВА С ОГРАНИЧЕНИЯМИ НА ТЕРМОНАПРЯЖЕНИЯ

Статья в формате PDF 306 KB...

01 04 2026 6:37:24

ГИГИЕНИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ПДК ДИСПЕРСНЫХ АЗОКРАСИТЕЛЕЙ НА ПРИМЕРЕ ЖЕЛТО-КОРИЧНЕВОГО 2Ж И АЛОГО 2А

Статья в формате PDF 303 KB...

31 03 2026 4:58:31

ПРИМЕНЕНИЕ КОМПЛЕКСНОЙ ЛАЗЕРОТЕРАПИИ И ФАРМАКОТЕРАПИИ В РЕАБИЛИТАЦИИ БОЛЬНЫХ ЯЗВЕННОЙ БОЛЕЗНЬЮ ЖЕЛУДКА

Статья в формате PDF 113 KB...

30 03 2026 4:53:23

ФАКТОРЫ РАЗЖИЖЕНИЯ КОАГУЛИРОВАВШЕГО ЭЯКУЛЯТА ЧЕЛОВЕКА

Из аспирата семенных пузырьков человека сочетанием катионообменной хроматографии на S-сефарозе и диск-электрофореза выделен белок. Молекулярная масса полученного белка, по данным SDS-PAGE, составила 53,5 kDa. Исходя из электрофоретической подвижности, мы предположили, что полученный белок –семеногелин-I (SPMIP/Sg-I). После обработки полученного препарата очищенным простатоспецифическим антигеном (человеческий калликреин-3 (hK3)), электрофоретически были выявлены многочисленные полипептиды с молекулярной массой от 5 до 24 kDa. Проверка биологической активности на образцах нативной cпepмы подтвердила наличие у полипептидных фрагментов способности ингибировать двигательную активность cпepматозоидов и они были отнесены к SPMI. Электрофоретическая подвижность фpaкции SPMI с молекулярной массой 18-20 kDa, которую мы назвали «тяжелой» (SPMI-h), соответствовала электрофоретической подвижности фpaкции нативной cпepмы человека, проявляющей ингибиторную активность. Изучение в казиинолитическом тесте (с химотрипсином и папаином в качестве ферментов) возможной ингибиторной активности SPMI-h, показало наличие подобной активности в отношении папаина, влияние на ферментативную активность химотрипсина выявлено не было. ...

29 03 2026 10:23:34

ПРОСТРАНСТВЕННАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ СИНУСНО-ПРЕДСЕРДНОГО УЗЛА СЕРДЦА КРЫСЫ

Статья в формате PDF 112 KB...

28 03 2026 5:56:41

КЛИНИЧЕСКАЯ ПОЛИФОНИЯ ЗАСТАРЕЛОГО РОТАЦИОННОГО ПОДВЫВИХА С1 У ДЕТЕЙ

Статья в формате PDF 126 KB...

27 03 2026 11:18:50

ПРОГНОЗИРОВАНИЕ УРОЖАЙНОСТИ СЕНА ОТ УЛУЧШЕННЫХ СЕНОКОСОВ

По статистическим рядам динамики урожайности сена однолетних и многолетних трав показаны результаты идентификации биотехнического закона и его применения в волновых составляющих математической модели динамики. ...