ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ АНАЛОГА ПЕПТИДА СЛИЯНИЯ ИЗ ГЕМАГГЛЮТИНИНА ВИРУСА ГРИППА С ФОСФОЛИПИДНЫМИ ЛИПОСОМАМИ: ИЗУЧЕНИЕ МЕТОДОМ 31Р-ЯМР
Пептиды слияния - фрагменты вирусных белков, состоящие из 20-25 аминокислот, способные вызывать слияние липидных и биологических мембран [1]. При изучении этих процессов удобно работать с водорастворимыми аналогами. Нами сконструирован аналог F31, состоящий из 31-го аминокислотного остатка: glfgaiagfieggwtgmidgwygygggkkkk.
С-концевой фрагмент GCGKKK обеспечивает водорастворимостиь пептида, а N-концевая часть (остатки 1-24) соответствует пептиду слияния из гемагглютинина (штамм A/PR/8/34). В пептиде имеется только один остаток глутаминовой кислоты (Glu11). Цель данной работы - изучить влияние пептида F31 на фосфолипидные липосомы при различных состояниях ионизации этого остатка. С учётом данных по величинам рКа остатков Glu в пептидах слияния, находящихся в мембранном окружении, есть основания считать, что при изменении рН от 7 до 4 с большой долей вероятности происходит протонирование боковой карбоксильной группы этого остатка. Поэтому нами взяты эти значения рН как такие, при которых остаток полностью заряжен (рН 7) и нейтрален (рН 4), соответственно. Фосфолипидные липосомы формировались из анионного фосфолипида диолеоилфосфатидилглицерина (ДОФГ). Т.к. заряд пептида в целом положителен при обоих значениях рН (4 и 7), это обеспечивает эффективное связывание с пловерхностью липосом за счёт электростатического притяжения. Следовательно, изменение хаpaктера вляиния пептида на липосомы при изменении рн от 7 до 4 будет означать изменение хаpaктера гидрофобного взаимодействия пептида с липосомами, вероятно, за счёт изменения глубины проникновения пептида в фосфолипидный бислой и/или хаpaктера ассоции пептидов на липосомах.
Наиболее удобным методом для исследования взаимодействий липид/пептид является метод 31P-ЯМР спектроскопии широких линий. Данный метод позволяет работать с бислойными мультиламеллярными липосомами, которые более адекватно моделирует биологическую мембрану. Показано, что форма линии 31P-ЯМР спектров мембран чувствительна к анизотропным движениям молекул фосфолипидов[2, 3], что позволяет следить за изменениями состояния модельной мембраны под воздействием пептида.
Для изучения рН-зависимости взаимодействия были проведены серии экспериментов при рН 4 и 7. Проанализировав полученные 31Р-ЯМР спектры с помощью разработанной нами программы P-FIT [4], были получены зависимости параметров, хаpaктеризующих состояние бислоя в зависимости от соотношения липид/пептид.
При рН 4 наблюдается значительное влияние пептида на состояние бислоя. Так, при последовательном добавлении пептида, начиная с соотношения липид/пептид 40:1 происходит формирование второй анизотропной составляющей. Данная составляющая хаpaктеризуется уменьшенным значением анизотропии химического сдвига а также уменьшенным значением степени деформации липосом магнитным полем спектрометра, что связано с уменьшением эластичности мембраны. При уменьшением соотношения липид/пептид от 40:1 до 15:1 происходит рост вклада этой составляющей от ~15% до ~50%. Также стоит отметить что начиная с соотношения липид/пептид 30:1 становится значительным вклад от изотропной составляющей, которая соответствует разрушенным липосомам. Величина этой составляющей растёт пропорционально количеству добавленного пептида и достигает значений 3-4%.
При рН 7 картина взаимодействия существенно иная: Во всём изученном диапазоне значений липид/пептид(от 50 до 15) не наблюдалось формирование дополнительных состояний модельного липидного бислоя. В то время как наблюдалось небольшое изменение параметров эластичности бислоя.
Таким образом, анализ влияния пептида на бислои ДОФГ при выбранных значениях рН подтверждает предположение о существенной роли ионогенного сотояния состояния остатка Glu11 во взаимодействии пептида слияния этого типа с липидным бислоем.
Благодарность:
Выражаем признательность РФФИ за финансовую поддержку, грант № 02-48882.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
- Dubovskii, P.V., Li, H., Takahashi, S., Arseniev, A.S., and Akasaka, K.Protein Sci., 2000 V. 9, P. 786-798.
- Seelig J. Biochim. Biophys. Acta. 1978. V. 515. P. 105-140.
- Brumm T., Mops A., Dolainsky C., Bruckner S., Bayerl T.M. Biophys. J. 1992. V. 61. P. 1018-1024.
- Dubovskii P.V., Lesovoy D.M., Dubinnyi M.A., Utkin Y.N., Arseniev A.S. // Eur. J. Biochem. 2003. V. 270. P. 2038-2046.
Статья в формате PDF
125 KB...
11 12 2024 21:14:26
Статья в формате PDF
119 KB...
10 12 2024 20:47:13
Статья в формате PDF
134 KB...
08 12 2024 18:14:21
Статья в формате PDF
175 KB...
05 12 2024 13:26:39
Статья в формате PDF
131 KB...
03 12 2024 2:58:41
Статья в формате PDF
125 KB...
02 12 2024 2:17:51
Статья в формате PDF
114 KB...
01 12 2024 15:52:15
Статья в формате PDF
123 KB...
30 11 2024 9:32:28
Статья в формате PDF
127 KB...
29 11 2024 0:48:50
Статья в формате PDF
292 KB...
28 11 2024 1:56:58
Статья в формате PDF
97 KB...
27 11 2024 23:40:34
Статья в формате PDF
252 KB...
25 11 2024 20:31:18
Статья в формате PDF
115 KB...
24 11 2024 17:38:16
Статья в формате PDF
109 KB...
23 11 2024 8:29:40
Статья в формате PDF
112 KB...
22 11 2024 23:38:38
Статья в формате PDF
92 KB...
21 11 2024 13:13:24
Статья в формате PDF
113 KB...
20 11 2024 19:29:29
Статья в формате PDF
286 KB...
19 11 2024 13:16:48
Статья в формате PDF
92 KB...
18 11 2024 5:46:33
Статья в формате PDF
132 KB...
16 11 2024 14:30:11
Статья в формате PDF
100 KB...
14 11 2024 9:41:42
Статья в формате PDF
106 KB...
13 11 2024 14:59:11
Статья в формате PDF
107 KB...
12 11 2024 3:18:50
Статья в формате PDF
263 KB...
11 11 2024 6:33:16
Статья в формате PDF
132 KB...
10 11 2024 2:57:38
Статья в формате PDF
109 KB...
09 11 2024 16:34:22
Статья в формате PDF
253 KB...
08 11 2024 3:13:10
Статья в формате PDF
102 KB...
06 11 2024 2:31:42
Статья в формате PDF
112 KB...
05 11 2024 0:51:13
Статья в формате PDF 283 KB...
04 11 2024 1:14:33
Статья в формате PDF
112 KB...
03 11 2024 4:35:27
Исследованы особенности взаимосвязи увеличения массы и продольных размеров тела и его частей у здоровых новорожденных (535), детей с задержкой внутриутробного развития (938) и 221 детей с отставанием в росте одной из нижних конечностей. Использованы методы антропометрии детей, ультразвуковое исследование плода и оценка психического развития дошкольников. В этих группах обследуемых выявлены хаpaктерные различия динамики продольных размеров тела, отнесенных к его массе. Показано, что церебральный тип конституции появляется у детей при отсутствии диспластической задержки роста тела. Для успешного психического развития дошкольников благоприятны не максимальные, а средние размеры тела детей.
...
02 11 2024 9:19:36
Еще:
Поддержать себя -1 :: Поддержать себя -2 :: Поддержать себя -3 :: Поддержать себя -4 :: Поддержать себя -5 :: Поддержать себя -6 :: Поддержать себя -7 :: Поддержать себя -8 :: Поддержать себя -9 :: Поддержать себя -10 :: Поддержать себя -11 :: Поддержать себя -12 :: Поддержать себя -13 :: Поддержать себя -14 :: Поддержать себя -15 :: Поддержать себя -16 :: Поддержать себя -17 :: Поддержать себя -18 :: Поддержать себя -19 :: Поддержать себя -20 :: Поддержать себя -21 :: Поддержать себя -22 :: Поддержать себя -23 :: Поддержать себя -24 :: Поддержать себя -25 :: Поддержать себя -26 :: Поддержать себя -27 :: Поддержать себя -28 :: Поддержать себя -29 :: Поддержать себя -30 :: Поддержать себя -31 :: Поддержать себя -32 :: Поддержать себя -33 :: Поддержать себя -34 :: Поддержать себя -35 :: Поддержать себя -36 :: Поддержать себя -37 :: Поддержать себя -38 ::
