ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ АНАЛОГА ПЕПТИДА СЛИЯНИЯ ИЗ ГЕМАГГЛЮТИНИНА ВИРУСА ГРИППА С ФОСФОЛИПИДНЫМИ ЛИПОСОМАМИ: ИЗУЧЕНИЕ МЕТОДОМ 31Р-ЯМР
Пептиды слияния - фрагменты вирусных белков, состоящие из 20-25 аминокислот, способные вызывать слияние липидных и биологических мембран [1]. При изучении этих процессов удобно работать с водорастворимыми аналогами. Нами сконструирован аналог F31, состоящий из 31-го аминокислотного остатка: glfgaiagfieggwtgmidgwygygggkkkk.
С-концевой фрагмент GCGKKK обеспечивает водорастворимостиь пептида, а N-концевая часть (остатки 1-24) соответствует пептиду слияния из гемагглютинина (штамм A/PR/8/34). В пептиде имеется только один остаток глутаминовой кислоты (Glu11). Цель данной работы - изучить влияние пептида F31 на фосфолипидные липосомы при различных состояниях ионизации этого остатка. С учётом данных по величинам рКа остатков Glu в пептидах слияния, находящихся в мембранном окружении, есть основания считать, что при изменении рН от 7 до 4 с большой долей вероятности происходит протонирование боковой карбоксильной группы этого остатка. Поэтому нами взяты эти значения рН как такие, при которых остаток полностью заряжен (рН 7) и нейтрален (рН 4), соответственно. Фосфолипидные липосомы формировались из анионного фосфолипида диолеоилфосфатидилглицерина (ДОФГ). Т.к. заряд пептида в целом положителен при обоих значениях рН (4 и 7), это обеспечивает эффективное связывание с пловерхностью липосом за счёт электростатического притяжения. Следовательно, изменение хаpaктера вляиния пептида на липосомы при изменении рн от 7 до 4 будет означать изменение хаpaктера гидрофобного взаимодействия пептида с липосомами, вероятно, за счёт изменения глубины проникновения пептида в фосфолипидный бислой и/или хаpaктера ассоции пептидов на липосомах.
Наиболее удобным методом для исследования взаимодействий липид/пептид является метод 31P-ЯМР спектроскопии широких линий. Данный метод позволяет работать с бислойными мультиламеллярными липосомами, которые более адекватно моделирует биологическую мембрану. Показано, что форма линии 31P-ЯМР спектров мембран чувствительна к анизотропным движениям молекул фосфолипидов[2, 3], что позволяет следить за изменениями состояния модельной мембраны под воздействием пептида.
Для изучения рН-зависимости взаимодействия были проведены серии экспериментов при рН 4 и 7. Проанализировав полученные 31Р-ЯМР спектры с помощью разработанной нами программы P-FIT [4], были получены зависимости параметров, хаpaктеризующих состояние бислоя в зависимости от соотношения липид/пептид.
При рН 4 наблюдается значительное влияние пептида на состояние бислоя. Так, при последовательном добавлении пептида, начиная с соотношения липид/пептид 40:1 происходит формирование второй анизотропной составляющей. Данная составляющая хаpaктеризуется уменьшенным значением анизотропии химического сдвига а также уменьшенным значением степени деформации липосом магнитным полем спектрометра, что связано с уменьшением эластичности мембраны. При уменьшением соотношения липид/пептид от 40:1 до 15:1 происходит рост вклада этой составляющей от ~15% до ~50%. Также стоит отметить что начиная с соотношения липид/пептид 30:1 становится значительным вклад от изотропной составляющей, которая соответствует разрушенным липосомам. Величина этой составляющей растёт пропорционально количеству добавленного пептида и достигает значений 3-4%.
При рН 7 картина взаимодействия существенно иная: Во всём изученном диапазоне значений липид/пептид(от 50 до 15) не наблюдалось формирование дополнительных состояний модельного липидного бислоя. В то время как наблюдалось небольшое изменение параметров эластичности бислоя.
Таким образом, анализ влияния пептида на бислои ДОФГ при выбранных значениях рН подтверждает предположение о существенной роли ионогенного сотояния состояния остатка Glu11 во взаимодействии пептида слияния этого типа с липидным бислоем.
Благодарность:
Выражаем признательность РФФИ за финансовую поддержку, грант № 02-48882.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
- Dubovskii, P.V., Li, H., Takahashi, S., Arseniev, A.S., and Akasaka, K.Protein Sci., 2000 V. 9, P. 786-798.
- Seelig J. Biochim. Biophys. Acta. 1978. V. 515. P. 105-140.
- Brumm T., Mops A., Dolainsky C., Bruckner S., Bayerl T.M. Biophys. J. 1992. V. 61. P. 1018-1024.
- Dubovskii P.V., Lesovoy D.M., Dubinnyi M.A., Utkin Y.N., Arseniev A.S. // Eur. J. Biochem. 2003. V. 270. P. 2038-2046.
Статья в формате PDF
126 KB...
06 09 2026 20:49:54
Статья в формате PDF
105 KB...
05 09 2026 5:12:32
Статья в формате PDF
105 KB...
04 09 2026 15:50:42
Статья в формате PDF
137 KB...
03 09 2026 9:31:52
Статья в формате PDF
119 KB...
02 09 2026 17:23:24
Статья в формате PDF
122 KB...
01 09 2026 16:30:15
Статья в формате PDF
124 KB...
31 08 2026 5:48:29
Статья в формате PDF
244 KB...
30 08 2026 2:49:25
Статья в формате PDF
286 KB...
29 08 2026 4:43:11
Статья в формате PDF
133 KB...
28 08 2026 4:34:20
Статья в формате PDF
250 KB...
27 08 2026 19:52:34
Статья в формате PDF
128 KB...
26 08 2026 0:40:20
Статья в формате PDF
292 KB...
25 08 2026 3:53:37
Проведен анализ эффективности курсового гетеросуггестивного воздействия на функциональное состояние ЦНС у женщин репродуктивного возраста. С помощью методов электроэнцефалографии и спектрального анализа вариабельности сердечного ритма получены достоверные данные о положительной динамике на центральном и вегетативном уровнях обеспечения психофизиологической устойчивости обследованных женщин.
...
24 08 2026 21:27:42
Статья в формате PDF
528 KB...
23 08 2026 10:22:21
Статья в формате PDF
115 KB...
22 08 2026 4:25:31
Статья в формате PDF
102 KB...
21 08 2026 5:16:47
Статья в формате PDF
353 KB...
20 08 2026 22:18:26
Статья в формате PDF
117 KB...
18 08 2026 1:34:56
Статья в формате PDF
244 KB...
17 08 2026 21:11:42
В данной работе авторами выдвигается и обосновывается тезис о том, что торгово-коммерческая деятельность является определяющим фактором в системе рыночных отношений.
...
16 08 2026 1:47:59
Статья в формате PDF
271 KB...
14 08 2026 7:19:15
Статья в формате PDF
235 KB...
12 08 2026 22:11:46
Статья в формате PDF
131 KB...
11 08 2026 6:45:21
Статья в формате PDF
133 KB...
10 08 2026 0:39:30
Эмбриональная полукольцевидная форма является исходной в морфогенезе дефинитивной двенадцатиперстной кишки человека. Она преобразуется в кольцевидную у большинства плодов десятой недели, последняя в типичную подковообразную форму — к середине утробной жизни человека.
...
08 08 2026 11:58:37
Статья в формате PDF
117 KB...
07 08 2026 10:13:50
Статья в формате PDF
120 KB...
06 08 2026 7:36:49
Статья в формате PDF
123 KB...
05 08 2026 5:58:39
Статья в формате PDF
107 KB...
03 08 2026 6:17:46
Статья в формате PDF
109 KB...
02 08 2026 9:23:16
Статья в формате PDF
109 KB...
01 08 2026 8:33:45
Статья в формате PDF
105 KB...
31 07 2026 22:56:57
Статья в формате PDF
112 KB...
30 07 2026 19:27:48
Статья в формате PDF
263 KB...
29 07 2026 1:19:56
Еще:
Поддержать себя -1 :: Поддержать себя -2 :: Поддержать себя -3 :: Поддержать себя -4 :: Поддержать себя -5 :: Поддержать себя -6 :: Поддержать себя -7 :: Поддержать себя -8 :: Поддержать себя -9 :: Поддержать себя -10 :: Поддержать себя -11 :: Поддержать себя -12 :: Поддержать себя -13 :: Поддержать себя -14 :: Поддержать себя -15 :: Поддержать себя -16 :: Поддержать себя -17 :: Поддержать себя -18 :: Поддержать себя -19 :: Поддержать себя -20 :: Поддержать себя -21 :: Поддержать себя -22 :: Поддержать себя -23 :: Поддержать себя -24 :: Поддержать себя -25 :: Поддержать себя -26 :: Поддержать себя -27 :: Поддержать себя -28 :: Поддержать себя -29 :: Поддержать себя -30 :: Поддержать себя -31 :: Поддержать себя -32 :: Поддержать себя -33 :: Поддержать себя -34 :: Поддержать себя -35 :: Поддержать себя -36 :: Поддержать себя -37 :: Поддержать себя -38 ::
