НОВЫЙ ПОДХОД К ОРГАНИЗАЦИИ СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ

1

• Авторы
• Файлы

Маpaкасова Е.С. Ольшанский А.Я. Валеева А.Р. Волынская Е.В. Стаханова В.М. Казеева Т.Н. Осипенкова О.В. Валиуллин Л.Ф. Шевелёв Б.И. Статья в формате PDF 189 KB

Стандартная схема исследования для постановки лабораторного диагноза «ВИЧ-инфекция» применяемая в настоящее время включает следующие этапы: 1. единичный скрининговый иммуноферментный тест для первичного выявления специфических антител к антигенам ВИЧ; 2. конфирмация положительного результата (повторный ИФА-тест); 3. верификация (дешифровка) положительного результата с применением иммуно-вестерн-БЛОТа. При верификации сложных случаев в последние годы рекомендовано также применять ИФА-тест для выявления растворимого вирусного антигена р24. Однако, описанная схема априори имеет ряд недостатков: не подвергаются конфирмации отрицательные результаты; для материалов с сильным сигналом в ИФА (реактивность ≤2) возможно получение отрицательного результата в БЛОТе. Так, в лабораторном отделении (ЛО) МГЦ СПИД ежемecячно исследуют около 3500 проб и при этом примерно для 30 проб получают «ИФА-положительный - БЛОТ-отрицательный» результат.

Нами предлагается оптимизированная схема, где «ложноположительные» результаты полностью отсутствуют, а при осуществлении скрининга - не получается «ложно-отрицательных» результатов и потерь материалов, содержащих специфические антитела. В силу этого на этапе скрининга образцы параллельно исследуются в двух и более ИФА-наборах, и все материалы, для которых хотя бы один положительный результат передаются для верификационного исследования. В ЛО МГЦ СПИД применяют диагностические наборы для выявления растворимого р24 с чувствительностью 0,5 пг/мл, с применением в верификации моноантигенных ИФА-тест-систем (пример - наборы типа СПЕКТР производства НПО «Диагностические системы»). Около 100 проб плазмы крови, для которых был получен результат «ИФА - положительный БЛОТ-отрицательный были исследованы с применением ДОТ-БЛОТа производства ООЛ «Биосервис». Примерно для 30% проб был получен неотрицательный результат, т.е. результат, тpaктуемый как положительный или «неопределенный», но в любом случае подтверждающий наличие в пробе специфических антител.

Оптимизированная схема верификации распадается на два этапа:

- первый этап полностью повторяет верификацию в схеме стандартной (выявляется спектр антител к антигенам вириона ВИЧ и ставится лабораторный диагноз «ВИЧ-инфекция»).

- второй этап заключает в себе исследование материалов, для которых показано наличие антител к отдельным антигенам или получен «БЛОТ-отрицательный» результат. На этом этапе работы используют расширяющуюся верификационную базу с набором тестов для серодиагностики вирусных гепатитов и набором тестов для выявления онкомаркёров. Одним из важнейших компонентом верификационной базы являются наборы для выявления антигена р24, обладающего групповой специфичностью. К сожалению, ныне выпускаемые наборы, несмотря на очень высокую чувствительность, далеко не всегда эффективны. Наши исследования показывают, что для получения полной картины необходимо применение теста для выявления антигена, иммобилизованного на поверхности циркулирующих лимфоцитов крови. Результаты заключительного этапа верификации позволяют выявить причины появления специфических антител к отдельным антигенам вне связи с ВИЧ-инфекцией: вирусные гепатиты, гематологические и oнкoлoгические заболевания, беременность, возрастные изменения.

Таким образом, был разработан новый подход к организации серологической диагностики ВИЧ-инфекции, основанный на оптимизированной схеме верификации.

Настоящая работа выполнена при поддержке Государственных контpaктов №14.740.11.0184, №П807, №П1253, №П1263, №16.740.11.0027, №14.740.11.0123, №14.740.11.0122, №02.512.12.2055; проектов
в рамках мероприятия 1.2.2 шифры заявок (2010-1.2.2-203-002-038, 2010-1.2.2-207-003-082, 2010-1.2.2-141-022-040, 2010-1.2.2-141-022-018); мероприятия 1.3.1 шифры заявок (2010-1.3.1-207-003-043, 2010-1.3.1-203-002-017, 2010-1.3.1-203-002-018, 2010-1.3.1-220-006-021; 2010-1.3.1-141-022-028); проектов №2.1.1/2468, №2.1.1/4510, №2.1.1/2516 ФЦП «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 годы.

---