ДАЛАРГИН-ИНДУЦИРУЕМАЯ МОДУЛЯЦИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНО-МЕТАБОЛИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ЛЕЙКОЦИТОВ

1

• Авторы
• Файлы

Балачевский Б.В. Курзанов А.Н. Славинский А.А. Статья в формате PDF 108 KB

Функционально-метаболический потенциал нейтрофильных лейкоцитов определяет выраженность воспалительной реакции как асептического хаpaктера, так и развивающейся в ответ на проникновение в организм инфекционных возбудителей (Козлов И.Г. и соавт., 2002). Нарушение целостности тканей вызывает активацию нейтрофильных лейкоцитов, которая сопровождается перестройкой метаболизма, выработкой активных форм кислорода, стимуляцией хемокинеза и фагоцитоза (Schratzberger P. et al., 1996; Клебанов Г.И., Владимиров Ю.А., 1999). Эти процессы направлены на уничтожение возбудителей и патологически измененных клеток (Falanga A., et al., 2000). Однако в состоянии гипеpaктивации нейтрофилы способны повреждать не затронутую патологическим процессом ткань (Hoffmeyer MR. et al., 2000; Ikeda Y. et al., 2001; Assimakopoulos S.F., et al., 2004; Sener G. et al., 2004).

Известно, что иммунная система связана с нервной системой (Бахов Н.И. и соавт., 1988; Fiset M.E. et al., 2003) посредством продукции и секреции биологически активных веществ (Кветной И.М., Кветная Т.В. и соавт., 2005), к которым относятся опиоидные пептиды (Акоев Г.Н. и соавт., 1989). Широкая распространенность в центральной и периферической нервной системе, нервных окончаниях, эндокринных клетках и клетках иммунной системы обусловливает универсальную роль этих веществ как регуляторов физиологических и патологических процессов в организме (Кветной И.М. и соавт., 2005; Королева С.В., Ашмарин И.П., 2005).

Опиоидный пептид даларгин является синтетическим аналогом регуляторного нейропептида лейцин-энкефалина (Виноградов В.А., Буглак Н.П., 1988). Даларгин обладает широким спектром биологической активности: оказывает иммуномодулирующее действие, ингибирует перекисное окисление липидов, ограничивает гормонально-метаболические и энергетические нарушения, улучшает микроциркуляцию, ускоряет физиологическую и репаративную регенерацию (Панькова Т.М., Тимошин С.С., 1990; Бажанов Н.Н. и соавт., 1991; Курзанов А.Н., 2001).

Имеющаяся информация о влиянии опиоидных пептидов на нейтрофилы, а также об их роли в развитии патологических состояний носит противоречивый хаpaктер. В связи с этим представляет интерес изучение воздействия опиоидного пептида даларгина как препарата, способного оказывать корригирующее влияние на функционально-метаболическую активность нейтрофильных лейкоцитов в физиологических условиях и при различных патологических состояниях.

Объект исследования - венозная кровь 27 здоровых людей, 15 больных с ожоговой травмой и капиллярная кровь 28 крыс. Экспериментальная часть работы выполнена на 28 стандартизированных аутбредных крысах-самцах породы Sprague Dawley 4-5 мecячного возраста массой 420-500 граммов, которые были разделены на 5 групп: интактные -   здоровые животные (28 крыс); 1 группа (контрольная) - животные, которым производили лапаротомию (5 крыс); 2 группа - животные с лапаротомией, получавшие инъекции даларгина (5 крыс); 3 группа - животные с острым экспериментальным панкреатитом (9 крыс); 4 группа - животные с острым экспериментальным панкреатитом, получавшие инъекции даларгина (9 крыс).

Моделировали острый экспериментальный панкреатит путем глубокого охлаждения обеих поверхностей поджелудочной железы хлорэтилом (Малхасян В.А., Симоворян П.Р., 1972). Для подтверждения развития острого экспериментального панкреатита проводили морфологическое исследование состояния поджелудочной железы крыс в динамике эксперимента.

Функционально-метаболическую активность нейтрофилов исследовали на первые (до манипуляций), и после операции на третьи и седьмые сутки эксперимента. В нейтрофильных лейкоцитах определяли активность НАДФH-оксидазы с помощью НСТ-теста (Нестерова И.В., 1980), активность миелопероксидазы оценивали по методу Шафран М.Г. и соавт. (1979), щелочной фосфатазы - по методике М.Г. Шубича (1965). Содержание катионных белков выявляли по методике А.А. Славинского и Г.В. Никитиной (1999). Активационный потенциал ядерного хроматина оценивали поляризационно-оптическим методом А.А. Евглевского (2000).

Компьютерную морфометрию изображения нейтрофильных лейкоцитов выполняли при помощи цветной телевизионной системы для микроскопических исследований «CitoW» (Москва). Для оценки результатов компьютерной морфометрии изображения использовали вычисляемый критерий - интегральный цитохимический показатель (ИЦП) (Славинский А.А., 2000).

Оценку значимости различий между средними значениями двух сравниваемых исследуемых показателей выполняли с помощью дисперсионного анализа, вычисляли критерий Стьюдента (t) и доверительную вероятность различий (р) (Гланц С., 1999).

В результате проведенных исследований установлено, что даларгин in vitro стимулирует изначально низкую активность нейтрофилов периферической крови здоровых людей и ингибирует повышенную (у больных с ожоговой травмой). Это свидетельствует о том, что пептид влияет на процессы активации нейтрофильных лейкоцитов разнонаправленно, в зависимости от их исходного состояния. У здоровых людей даларгин дозозависимо стимулирует способность нейтрофильных лейкоцитов периферической крови к активации in vitro, о чем свидетельствует увеличение количества активированных клеток и повышение активности НАДФH-оксидазы. Наиболее выраженное действие пептид проявляет в концентрации 5×10^-8M. Влияние даларгина на способность нейтрофилов к активации опосредовано через опиатные рецепторы, блокада которых налоксоном устраняет стимулирующий эффект.

У больных людей с обширным повреждением тканей (ожоговая травма) даларгин ингибирует повышенную активность нейтрофильных лейкоцитов венозной крови in vitro. Это проявляется уменьшением количества активированных клеток со снижением в них активности НАДФH-оксидазы и свидетельствует о нормализации уровня кислородзависимого метаболизма нейтрофилов.

Острый экспериментальный панкреатит у крыс сопровождается резким повышением функционально-метаболической активности нейтрофильных лейкоцитов. Воспалительно-деструктивным изменениям в поджелудочной железе сопутствует увеличение в нейтрофилах крови активности ядерного хроматина, НАДФH-оксидазы, щелочной фосфатазы и содержания катионных белков со снижением активности миелопероксидазы.

Введение даларгина крысам с острым экспериментальным панкреатитом оказывает протекторное действие на ткань поджелудочной железы с повышением регенераторной способности органа. В отношении функционально-метаболической активности нейтрофильных лейкоцитов пептид проявил ингибирующее действие со снижением активности НАДФH-оксидазы, щелочной фосфатазы, ядерного хроматина и уменьшением содержания неферментных катионных белков. Сниженную активность миелопероксидазы даларгин повышал. При репаративных изменениях в поджелудочной железе под действием даларгина показатели функционально-метаболической активности нейтрофильных лейкоцитов периферической крови нормализуются.

Таким образом, можно заключить: даларгин проявляет модулирующее действие на функционально-метаболическую активность нейтрофилов, которое зависит от их исходного состояния. Пептид повышает изначально низкую функциональную активность нейтрофилов и снижает высокую. Даларгининдуцированные эффекты проявляются in vitro и in vivo, как в норме, так и при повреждении тканей различной этиологии у людей и экспериментальных животных.

---