АТОМНО-СИЛОВАЯ МИКРОСКОПИЯ КАК МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ СТРУКТУРНЫХ СВОЙСТВ КАРБОГИДРАЗ

Для исследования особенностей надмолекулярной организации ферментов в настоящее время успешно применяются различные сочетания классических методов биохимического анализа и современные биофизические подходы, в том числе метод атомно-силовой микроскопии (АСМ). Объектом исследований является инулиназа из Kluyveromyces marxianus Y-303, которая гидролизует инулин и другие фруктозосодержащие полимеры. Данный фермент может использоваться для получения фруктозы из инулинсодержащего растительного сырья, а изготовленные из инулина фруктозные сиропы применяются в кондитерской промышленности, в лечебном питании, а также для профилактики сахарного диабета, кариеса и ожирения.
Гомогенность фpaкций фермента и его субъединиц контролировали электрофоретическим анализом. Содержание белка определяли методом Лоури, каталитическую активность энзима измеряли спектрофотометрически. Визуализацию олигомерной структуры инулиназы осуществляли с помощью атомно-силовой микроскопии на сканирующем зондовом микроскопе SOLVER P47PRO фирмы НТ-МДТ. Для изучения четвертичной структуры фpaкции фермента инкубировали с додецилсульфатом натрия (ДСН) в концентрации 3,5·10-5 моль/л. При гель-хроматографии на колонке с сефадексом G-150 субъединицы выходят двумя пиками, что свидетельствует об асимметричности их строения. Кажущаяся молекулярная масса субъединиц равна 54,8 кДа и 8,4 кДа. Установлено, что они обладают каталитической активностью 1,35±0,21 ед/мг и 1,05±0,23 ед/мг соответственно.
Нами были получены изображения молекул инулиназы на пластинках свежесколотой слюды. Показано, что данный белок имеет олигомерную структуру и состоит из двух субъединиц, различных по размеру. Длина глобулы намного превышает ее высоту, возможно, что такое уплощение молекулы происходит за счет многоточечного связывания заряженных аминокислотных остатков, расположенных на поверхности белка, с поверхностью слюды. Показано, что высота большей субъединицы (54,8 кДа) превышает высоту малой (8,4 кДа) в 2 раза. При разделении белка на субъединицы происходит изменение их структуры, а следовательно, и размеров по отношению к нативному препарату. При разделении димера инулиназы на мономеры происходит небольшая их компактизация, и субъединицы пpaктически сравниваются по высоте.
Таким образом, результаты экспериментов по гель-хроматографии, электрофорезу и визуализации олигомерной структуры методом атомно-силовой микроскопии, позволяют сделать заключение о том, что четвертичная структура инулиназы Kluyveromyces marxianus представлена двумя субъединицами, различающимися по размерам, молекулярной массе и активности. Процессы диссоциации-ассоциации субъединиц, возможно, принимают участие в процессе регуляции каталитической активности данного фермента.
Статья в формате PDF
115 KB...
11 08 2026 23:22:10
Статья в формате PDF
309 KB...
10 08 2026 22:47:21
Статья в формате PDF
114 KB...
09 08 2026 12:13:33
Статья в формате PDF
113 KB...
08 08 2026 7:30:47
Статья в формате PDF
122 KB...
07 08 2026 4:36:20
Статья в формате PDF
116 KB...
06 08 2026 9:56:35
Статья в формате PDF
106 KB...
04 08 2026 10:17:44
Статья в формате PDF
146 KB...
03 08 2026 21:44:55
Статья в формате PDF
113 KB...
02 08 2026 21:56:47
Статья в формате PDF
113 KB...
01 08 2026 23:56:18
Статья в формате PDF
162 KB...
31 07 2026 1:35:48
Статья в формате PDF
133 KB...
30 07 2026 21:26:40
Статья в формате PDF
104 KB...
29 07 2026 9:19:14
Статья в формате PDF
123 KB...
28 07 2026 22:15:35
Статья в формате PDF
265 KB...
27 07 2026 14:41:42
Статья в формате PDF
391 KB...
26 07 2026 15:49:28
Статья в формате PDF
122 KB...
24 07 2026 13:38:38
Статья в формате PDF
112 KB...
23 07 2026 8:22:41
Статья в формате PDF
133 KB...
22 07 2026 0:13:38
Статья в формате PDF
414 KB...
21 07 2026 23:32:53
Статья в формате PDF
100 KB...
20 07 2026 7:23:40
Статья в формате PDF
291 KB...
18 07 2026 7:58:25
Статья в формате PDF
108 KB...
17 07 2026 17:37:11
Статья в формате PDF
104 KB...
16 07 2026 23:32:32
15 07 2026 19:59:21
Статья в формате PDF
263 KB...
14 07 2026 14:16:19
13 07 2026 14:58:44
Статья в формате PDF
100 KB...
11 07 2026 12:24:44
Статья в формате PDF
114 KB...
10 07 2026 9:32:44
Статья в формате PDF
253 KB...
09 07 2026 2:30:21
Статья в формате PDF
102 KB...
07 07 2026 10:47:43
Статья в формате PDF
116 KB...
05 07 2026 21:18:51
Статья в формате PDF 100 KB...
04 07 2026 17:16:10
Еще:
Поддержать себя -1 :: Поддержать себя -2 :: Поддержать себя -3 :: Поддержать себя -4 :: Поддержать себя -5 :: Поддержать себя -6 :: Поддержать себя -7 :: Поддержать себя -8 :: Поддержать себя -9 :: Поддержать себя -10 :: Поддержать себя -11 :: Поддержать себя -12 :: Поддержать себя -13 :: Поддержать себя -14 :: Поддержать себя -15 :: Поддержать себя -16 :: Поддержать себя -17 :: Поддержать себя -18 :: Поддержать себя -19 :: Поддержать себя -20 :: Поддержать себя -21 :: Поддержать себя -22 :: Поддержать себя -23 :: Поддержать себя -24 :: Поддержать себя -25 :: Поддержать себя -26 :: Поддержать себя -27 :: Поддержать себя -28 :: Поддержать себя -29 :: Поддержать себя -30 :: Поддержать себя -31 :: Поддержать себя -32 :: Поддержать себя -33 :: Поддержать себя -34 :: Поддержать себя -35 :: Поддержать себя -36 :: Поддержать себя -37 :: Поддержать себя -38 ::