АТОМНО-СИЛОВАЯ МИКРОСКОПИЯ КАК МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ СТРУКТУРНЫХ СВОЙСТВ КАРБОГИДРАЗ
Для исследования особенностей надмолекулярной организации ферментов в настоящее время успешно применяются различные сочетания классических методов биохимического анализа и современные биофизические подходы, в том числе метод атомно-силовой микроскопии (АСМ). Объектом исследований является инулиназа из Kluyveromyces marxianus Y-303, которая гидролизует инулин и другие фруктозосодержащие полимеры. Данный фермент может использоваться для получения фруктозы из инулинсодержащего растительного сырья, а изготовленные из инулина фруктозные сиропы применяются в кондитерской промышленности, в лечебном питании, а также для профилактики сахарного диабета, кариеса и ожирения.
Гомогенность фpaкций фермента и его субъединиц контролировали электрофоретическим анализом. Содержание белка определяли методом Лоури, каталитическую активность энзима измеряли спектрофотометрически. Визуализацию олигомерной структуры инулиназы осуществляли с помощью атомно-силовой микроскопии на сканирующем зондовом микроскопе SOLVER P47PRO фирмы НТ-МДТ. Для изучения четвертичной структуры фpaкции фермента инкубировали с додецилсульфатом натрия (ДСН) в концентрации 3,5·10-5 моль/л. При гель-хроматографии на колонке с сефадексом G-150 субъединицы выходят двумя пиками, что свидетельствует об асимметричности их строения. Кажущаяся молекулярная масса субъединиц равна 54,8 кДа и 8,4 кДа. Установлено, что они обладают каталитической активностью 1,35±0,21 ед/мг и 1,05±0,23 ед/мг соответственно.
Нами были получены изображения молекул инулиназы на пластинках свежесколотой слюды. Показано, что данный белок имеет олигомерную структуру и состоит из двух субъединиц, различных по размеру. Длина глобулы намного превышает ее высоту, возможно, что такое уплощение молекулы происходит за счет многоточечного связывания заряженных аминокислотных остатков, расположенных на поверхности белка, с поверхностью слюды. Показано, что высота большей субъединицы (54,8 кДа) превышает высоту малой (8,4 кДа) в 2 раза. При разделении белка на субъединицы происходит изменение их структуры, а следовательно, и размеров по отношению к нативному препарату. При разделении димера инулиназы на мономеры происходит небольшая их компактизация, и субъединицы пpaктически сравниваются по высоте.
Таким образом, результаты экспериментов по гель-хроматографии, электрофорезу и визуализации олигомерной структуры методом атомно-силовой микроскопии, позволяют сделать заключение о том, что четвертичная структура инулиназы Kluyveromyces marxianus представлена двумя субъединицами, различающимися по размерам, молекулярной массе и активности. Процессы диссоциации-ассоциации субъединиц, возможно, принимают участие в процессе регуляции каталитической активности данного фермента.
Статья в формате PDF
103 KB...
23 07 2026 0:34:52
Статья в формате PDF
289 KB...
22 07 2026 19:40:23
Статья в формате PDF
172 KB...
21 07 2026 6:12:50
Статья в формате PDF
198 KB...
20 07 2026 14:38:48
Статья в формате PDF
172 KB...
19 07 2026 21:30:11
Статья в формате PDF
119 KB...
18 07 2026 13:30:59
Статья в формате PDF
107 KB...
16 07 2026 5:48:33
Статья в формате PDF
117 KB...
15 07 2026 22:50:30
Статья в формате PDF
189 KB...
14 07 2026 19:29:50
Статья в формате PDF
120 KB...
13 07 2026 13:33:20
Статья в формате PDF
121 KB...
12 07 2026 13:51:25
Статья в формате PDF
109 KB...
11 07 2026 0:46:23
Статья в формате PDF
124 KB...
10 07 2026 9:21:44
Статья в формате PDF
153 KB...
09 07 2026 23:24:20
Статья в формате PDF
100 KB...
08 07 2026 14:49:15
Статья в формате PDF
102 KB...
07 07 2026 2:54:38
Статья в формате PDF
322 KB...
05 07 2026 5:54:41
Статья в формате PDF
277 KB...
04 07 2026 6:32:48
Статья в формате PDF
305 KB...
01 07 2026 14:47:58
Статья в формате PDF
125 KB...
30 06 2026 18:31:43
Статья в формате PDF
227 KB...
28 06 2026 3:27:46
Статья в формате PDF
120 KB...
27 06 2026 2:35:42
Статья в формате PDF
130 KB...
26 06 2026 5:22:48
Статья в формате PDF
103 KB...
25 06 2026 2:32:52
В статье освещаются морфофункциональные особенности структуры стенки тонкой кишки в зависимости от хаpaктера вскармливания в экспериментальных условиях. Представлены собственные результаты исследования по вопросу о электронно-микроскопическом строении слоев стенки тонкой кишки при смешанном и искусственном вскармливании в эксперименте.
...
24 06 2026 20:25:29
Статья в формате PDF
109 KB...
23 06 2026 5:35:26
Статья в формате PDF
118 KB...
22 06 2026 15:40:33
Статья в формате PDF
136 KB...
21 06 2026 6:46:11
Статья в формате PDF
109 KB...
17 06 2026 6:45:52
Статья в формате PDF
144 KB...
16 06 2026 22:49:44
Статья в формате PDF
115 KB...
15 06 2026 6:29:45
Еще:
Поддержать себя -1 :: Поддержать себя -2 :: Поддержать себя -3 :: Поддержать себя -4 :: Поддержать себя -5 :: Поддержать себя -6 :: Поддержать себя -7 :: Поддержать себя -8 :: Поддержать себя -9 :: Поддержать себя -10 :: Поддержать себя -11 :: Поддержать себя -12 :: Поддержать себя -13 :: Поддержать себя -14 :: Поддержать себя -15 :: Поддержать себя -16 :: Поддержать себя -17 :: Поддержать себя -18 :: Поддержать себя -19 :: Поддержать себя -20 :: Поддержать себя -21 :: Поддержать себя -22 :: Поддержать себя -23 :: Поддержать себя -24 :: Поддержать себя -25 :: Поддержать себя -26 :: Поддержать себя -27 :: Поддержать себя -28 :: Поддержать себя -29 :: Поддержать себя -30 :: Поддержать себя -31 :: Поддержать себя -32 :: Поддержать себя -33 :: Поддержать себя -34 :: Поддержать себя -35 :: Поддержать себя -36 :: Поддержать себя -37 :: Поддержать себя -38 ::
