АТОМНО-СИЛОВАЯ МИКРОСКОПИЯ КАК МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ СТРУКТУРНЫХ СВОЙСТВ КАРБОГИДРАЗ

Для исследования особенностей надмолекулярной организации ферментов в настоящее время успешно применяются различные сочетания классических методов биохимического анализа и современные биофизические подходы, в том числе метод атомно-силовой микроскопии (АСМ). Объектом исследований является инулиназа из Kluyveromyces marxianus Y-303, которая гидролизует инулин и другие фруктозосодержащие полимеры. Данный фермент может использоваться для получения фруктозы из инулинсодержащего растительного сырья, а изготовленные из инулина фруктозные сиропы применяются в кондитерской промышленности, в лечебном питании, а также для профилактики сахарного диабета, кариеса и ожирения.
Гомогенность фpaкций фермента и его субъединиц контролировали электрофоретическим анализом. Содержание белка определяли методом Лоури, каталитическую активность энзима измеряли спектрофотометрически. Визуализацию олигомерной структуры инулиназы осуществляли с помощью атомно-силовой микроскопии на сканирующем зондовом микроскопе SOLVER P47PRO фирмы НТ-МДТ. Для изучения четвертичной структуры фpaкции фермента инкубировали с додецилсульфатом натрия (ДСН) в концентрации 3,5·10-5 моль/л. При гель-хроматографии на колонке с сефадексом G-150 субъединицы выходят двумя пиками, что свидетельствует об асимметричности их строения. Кажущаяся молекулярная масса субъединиц равна 54,8 кДа и 8,4 кДа. Установлено, что они обладают каталитической активностью 1,35±0,21 ед/мг и 1,05±0,23 ед/мг соответственно.
Нами были получены изображения молекул инулиназы на пластинках свежесколотой слюды. Показано, что данный белок имеет олигомерную структуру и состоит из двух субъединиц, различных по размеру. Длина глобулы намного превышает ее высоту, возможно, что такое уплощение молекулы происходит за счет многоточечного связывания заряженных аминокислотных остатков, расположенных на поверхности белка, с поверхностью слюды. Показано, что высота большей субъединицы (54,8 кДа) превышает высоту малой (8,4 кДа) в 2 раза. При разделении белка на субъединицы происходит изменение их структуры, а следовательно, и размеров по отношению к нативному препарату. При разделении димера инулиназы на мономеры происходит небольшая их компактизация, и субъединицы пpaктически сравниваются по высоте.
Таким образом, результаты экспериментов по гель-хроматографии, электрофорезу и визуализации олигомерной структуры методом атомно-силовой микроскопии, позволяют сделать заключение о том, что четвертичная структура инулиназы Kluyveromyces marxianus представлена двумя субъединицами, различающимися по размерам, молекулярной массе и активности. Процессы диссоциации-ассоциации субъединиц, возможно, принимают участие в процессе регуляции каталитической активности данного фермента.
Статья в формате PDF
103 KB...
11 10 2026 13:54:13
Статья в формате PDF
129 KB...
10 10 2026 15:35:50
Статья в формате PDF
114 KB...
09 10 2026 11:21:32
Статья в формате PDF
104 KB...
08 10 2026 19:33:23
Статья в формате PDF
131 KB...
07 10 2026 21:29:40
Статья в формате PDF 124 KB...
06 10 2026 15:34:35
Статья в формате PDF
101 KB...
05 10 2026 18:41:23
Статья в формате PDF
102 KB...
04 10 2026 10:55:43
Статья в формате PDF 106 KB...
03 10 2026 3:51:37
Статья в формате PDF
121 KB...
02 10 2026 1:39:37
Статья в формате PDF
289 KB...
01 10 2026 12:41:24
В работе показаны причины возникновения профессиональных заболеваний в результате воздействия на организм человека асбестовой пыли. Клинические проявления и специфические симптомы, вызванные длительным контактом с асбестовой пылью. Рекомендуется новая технология пневмообогащения асбестового минерального сырья на базе ранее разработанных Тувинским институтом комплексного освоения природных ресурсов СО РАН способов и устройств по переработке минерального сырья, содержащего тяжелые минералы и металлы.
...
30 09 2026 2:28:57
Статья в формате PDF
112 KB...
29 09 2026 1:15:52
Статья в формате PDF
322 KB...
28 09 2026 22:35:35
Статья в формате PDF
128 KB...
27 09 2026 1:30:44
Статья в формате PDF
113 KB...
25 09 2026 5:34:58
Статья в формате PDF
129 KB...
24 09 2026 13:36:50
Статья в формате PDF
240 KB...
23 09 2026 13:30:50
Статья в формате PDF
193 KB...
22 09 2026 21:31:40
Статья в формате PDF
156 KB...
20 09 2026 0:12:13
Статья в формате PDF
100 KB...
19 09 2026 6:35:32
17 09 2026 22:33:35
Статья в формате PDF
113 KB...
16 09 2026 8:52:50
Статья в формате PDF
257 KB...
14 09 2026 8:18:11
Статья в формате PDF
113 KB...
13 09 2026 16:53:42
Статья в формате PDF
103 KB...
12 09 2026 19:59:56
Статья в формате PDF
232 KB...
11 09 2026 19:48:34
10 09 2026 2:34:48
Статья в формате PDF
554 KB...
08 09 2026 3:50:34
07 09 2026 12:31:17
Статья в формате PDF
256 KB...
05 09 2026 15:58:55
Статья в формате PDF
246 KB...
04 09 2026 6:13:54
Способ глазомерного учета выхода сортиментов из деревьев лесного древостоя широко применялся в дореволюционное время под названием коммерческая таксация.
Исходя из биотехнического принципа в лесной экономике показана возможность выполнения коммерческой таксации древостоя моделированием стоимостных и возрастных распределений лесных деревьев по текущим рыночным ценам на круглые лесоматериалы.
...
02 09 2026 2:15:37
Еще:
Поддержать себя -1 :: Поддержать себя -2 :: Поддержать себя -3 :: Поддержать себя -4 :: Поддержать себя -5 :: Поддержать себя -6 :: Поддержать себя -7 :: Поддержать себя -8 :: Поддержать себя -9 :: Поддержать себя -10 :: Поддержать себя -11 :: Поддержать себя -12 :: Поддержать себя -13 :: Поддержать себя -14 :: Поддержать себя -15 :: Поддержать себя -16 :: Поддержать себя -17 :: Поддержать себя -18 :: Поддержать себя -19 :: Поддержать себя -20 :: Поддержать себя -21 :: Поддержать себя -22 :: Поддержать себя -23 :: Поддержать себя -24 :: Поддержать себя -25 :: Поддержать себя -26 :: Поддержать себя -27 :: Поддержать себя -28 :: Поддержать себя -29 :: Поддержать себя -30 :: Поддержать себя -31 :: Поддержать себя -32 :: Поддержать себя -33 :: Поддержать себя -34 :: Поддержать себя -35 :: Поддержать себя -36 :: Поддержать себя -37 :: Поддержать себя -38 ::