АТОМНО-СИЛОВАЯ МИКРОСКОПИЯ КАК МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ СТРУКТУРНЫХ СВОЙСТВ КАРБОГИДРАЗ
Для исследования особенностей надмолекулярной организации ферментов в настоящее время успешно применяются различные сочетания классических методов биохимического анализа и современные биофизические подходы, в том числе метод атомно-силовой микроскопии (АСМ). Объектом исследований является инулиназа из Kluyveromyces marxianus Y-303, которая гидролизует инулин и другие фруктозосодержащие полимеры. Данный фермент может использоваться для получения фруктозы из инулинсодержащего растительного сырья, а изготовленные из инулина фруктозные сиропы применяются в кондитерской промышленности, в лечебном питании, а также для профилактики сахарного диабета, кариеса и ожирения.
Гомогенность фpaкций фермента и его субъединиц контролировали электрофоретическим анализом. Содержание белка определяли методом Лоури, каталитическую активность энзима измеряли спектрофотометрически. Визуализацию олигомерной структуры инулиназы осуществляли с помощью атомно-силовой микроскопии на сканирующем зондовом микроскопе SOLVER P47PRO фирмы НТ-МДТ. Для изучения четвертичной структуры фpaкции фермента инкубировали с додецилсульфатом натрия (ДСН) в концентрации 3,5·10-5 моль/л. При гель-хроматографии на колонке с сефадексом G-150 субъединицы выходят двумя пиками, что свидетельствует об асимметричности их строения. Кажущаяся молекулярная масса субъединиц равна 54,8 кДа и 8,4 кДа. Установлено, что они обладают каталитической активностью 1,35±0,21 ед/мг и 1,05±0,23 ед/мг соответственно.
Нами были получены изображения молекул инулиназы на пластинках свежесколотой слюды. Показано, что данный белок имеет олигомерную структуру и состоит из двух субъединиц, различных по размеру. Длина глобулы намного превышает ее высоту, возможно, что такое уплощение молекулы происходит за счет многоточечного связывания заряженных аминокислотных остатков, расположенных на поверхности белка, с поверхностью слюды. Показано, что высота большей субъединицы (54,8 кДа) превышает высоту малой (8,4 кДа) в 2 раза. При разделении белка на субъединицы происходит изменение их структуры, а следовательно, и размеров по отношению к нативному препарату. При разделении димера инулиназы на мономеры происходит небольшая их компактизация, и субъединицы пpaктически сравниваются по высоте.
Таким образом, результаты экспериментов по гель-хроматографии, электрофорезу и визуализации олигомерной структуры методом атомно-силовой микроскопии, позволяют сделать заключение о том, что четвертичная структура инулиназы Kluyveromyces marxianus представлена двумя субъединицами, различающимися по размерам, молекулярной массе и активности. Процессы диссоциации-ассоциации субъединиц, возможно, принимают участие в процессе регуляции каталитической активности данного фермента.
Статья в формате PDF
131 KB...
02 07 2026 7:42:48
Статья в формате PDF
122 KB...
30 06 2026 9:43:50
К концу ХХ века накопилось огромное количество фактов и доказательств научной несостоятельности постулатов теории относительности (ТО), положенных в основу физических представлений о структуре микро- и макромира. ТО оторвала науку от изучения природных взаимосвязей, подменив их уравнениями с некими значками без чёткого понимания их сущности: масса, заряд, магнетизм и т.д. Игнорирование законов Природы привело человечество к цивилизационному кризису – нарушено равновесие биосферы. Причина глобальных изменений состоит в том, что антропогенное производство энергии в десятки раз превышает допустимый по законам межсистемного обмена порог. Продолжение технократического развития – тупик, катастрофа. Необходимо новое естествопонимание на основе аксиомы: «Мир построен системно». Структура материального мира определяется взаимодействием непрерывной не материальной вихреобразной среды и дискретных образований материи – элементарных частиц, из которых закономерно и системно построено всё от атомов до звёзд и галактик.
...
29 06 2026 8:39:14
Статья в формате PDF
124 KB...
28 06 2026 16:11:18
Статья в формате PDF
132 KB...
27 06 2026 15:50:46
Статья в формате PDF
120 KB...
25 06 2026 3:10:49
Статья в формате PDF
118 KB...
24 06 2026 13:39:40
Статья в формате PDF
220 KB...
23 06 2026 18:39:24
Основным направлением совершенствования межбюджетных отношений является достижение сбалансированности бюджетов различных уровней, что, в свою очередь, позволит регионам активно используя потенциал всех форм собственности, иметь самостоятельную базу финансовых ресурсов как основу саморазвития и самообеспечения воспроизводственного процесса.
...
22 06 2026 13:47:54
Статья в формате PDF
147 KB...
21 06 2026 12:48:46
Статья в формате PDF
103 KB...
20 06 2026 15:40:46
Статья в формате PDF
245 KB...
19 06 2026 2:32:26
Статья в формате PDF
94 KB...
18 06 2026 2:53:26
Статья в формате PDF
123 KB...
17 06 2026 21:40:52
Статья в формате PDF 151 KB...
16 06 2026 22:16:39
Статья в формате PDF
108 KB...
14 06 2026 11:47:52
Статья в формате PDF
136 KB...
13 06 2026 17:34:32
Статья в формате PDF
121 KB...
09 06 2026 18:27:18
Изложенные в статье результаты свидетельствуют о тождестве динамики формирования алкогольной зависимости у неэпилептической линии крыс (Вистар) и крыс с абсансной эпилепсией (WAG/Rij).
...
08 06 2026 16:10:40
Статья в формате PDF
127 KB...
07 06 2026 1:12:30
Статья в формате PDF
113 KB...
06 06 2026 3:27:51
Статья в формате PDF
121 KB...
05 06 2026 21:44:47
Статья в формате PDF
108 KB...
04 06 2026 23:57:19
Статья в формате PDF
312 KB...
03 06 2026 0:39:26
Статья в формате PDF
120 KB...
02 06 2026 10:33:17
Статья в формате PDF
102 KB...
31 05 2026 21:35:33
Статья в формате PDF
104 KB...
30 05 2026 2:47:43
Статья в формате PDF
120 KB...
27 05 2026 7:19:17
Статья в формате PDF
151 KB...
26 05 2026 14:19:54
Статья в формате PDF
172 KB...
25 05 2026 19:32:29
Статья в формате PDF
117 KB...
24 05 2026 22:19:51
Еще:
Поддержать себя -1 :: Поддержать себя -2 :: Поддержать себя -3 :: Поддержать себя -4 :: Поддержать себя -5 :: Поддержать себя -6 :: Поддержать себя -7 :: Поддержать себя -8 :: Поддержать себя -9 :: Поддержать себя -10 :: Поддержать себя -11 :: Поддержать себя -12 :: Поддержать себя -13 :: Поддержать себя -14 :: Поддержать себя -15 :: Поддержать себя -16 :: Поддержать себя -17 :: Поддержать себя -18 :: Поддержать себя -19 :: Поддержать себя -20 :: Поддержать себя -21 :: Поддержать себя -22 :: Поддержать себя -23 :: Поддержать себя -24 :: Поддержать себя -25 :: Поддержать себя -26 :: Поддержать себя -27 :: Поддержать себя -28 :: Поддержать себя -29 :: Поддержать себя -30 :: Поддержать себя -31 :: Поддержать себя -32 :: Поддержать себя -33 :: Поддержать себя -34 :: Поддержать себя -35 :: Поддержать себя -36 :: Поддержать себя -37 :: Поддержать себя -38 ::
