АТОМНО-СИЛОВАЯ МИКРОСКОПИЯ КАК МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ СТРУКТУРНЫХ СВОЙСТВ КАРБОГИДРАЗ

Авторы
Файлы

Ковалева Т.А. Холявка М.Г. Битюцкая Л.А. Гречкина М.В. Статья в формате PDF 97 KB

Для исследования особенностей надмолекулярной организации ферментов в настоящее время успешно применяются различные сочетания классических методов биохимического анализа и современные биофизические подходы, в том числе метод атомно-силовой микроскопии (АСМ). Объектом исследований является инулиназа из Kluyveromyces marxianus Y-303, которая гидролизует инулин и другие фруктозосодержащие полимеры. Данный фермент может использоваться для получения фруктозы из инулинсодержащего растительного сырья, а изготовленные из инулина фруктозные сиропы применяются в кондитерской промышленности, в лечебном питании, а также для профилактики сахарного диабета, кариеса и ожирения.

Гомогенность фpaкций фермента и его субъединиц контролировали электрофоретическим анализом. Содержание белка определяли методом Лоури, каталитическую активность энзима измеряли спектрофотометрически. Визуализацию олигомерной структуры инулиназы осуществляли с помощью атомно-силовой микроскопии на сканирующем зондовом микроскопе SOLVER P47PRO фирмы НТ-МДТ. Для изучения четвертичной структуры фpaкции фермента инкубировали с додецилсульфатом натрия (ДСН) в концентрации 3,5·10^-5 моль/л. При гель-хроматографии на колонке с сефадексом G-150 субъединицы выходят двумя пиками, что свидетельствует об асимметричности их строения. Кажущаяся молекулярная масса субъединиц равна 54,8 кДа и 8,4 кДа. Установлено, что они обладают каталитической активностью 1,35±0,21 ед/мг и 1,05±0,23 ед/мг соответственно.

Нами были получены изображения молекул инулиназы на пластинках свежесколотой слюды. Показано, что данный белок имеет олигомерную структуру и состоит из двух субъединиц, различных по размеру. Длина глобулы намного превышает ее высоту, возможно, что такое уплощение молекулы происходит за счет многоточечного связывания заряженных аминокислотных остатков, расположенных на поверхности белка, с поверхностью слюды. Показано, что высота большей субъединицы (54,8 кДа) превышает высоту малой (8,4 кДа) в 2 раза. При разделении белка на субъединицы происходит изменение их структуры, а следовательно, и размеров по отношению к нативному препарату. При разделении димера инулиназы на мономеры происходит небольшая их компактизация, и субъединицы пpaктически сравниваются по высоте.

Таким образом, результаты экспериментов по гель-хроматографии, электрофорезу и визуализации олигомерной структуры методом атомно-силовой микроскопии, позволяют сделать заключение о том, что четвертичная структура инулиназы Kluyveromyces marxianus представлена двумя субъединицами, различающимися по размерам, молекулярной массе и активности. Процессы диссоциации-ассоциации субъединиц, возможно, принимают участие в процессе регуляции каталитической активности данного фермента.

ЛАБОРАТОРНЫЙ КОМПЛЕКС  ИССЛЕДОВАНИЯ АДАПТИВНОГО ВИРТУАЛЬНОГО СКРЕМБЛИРОВАНИЯ

Статья в формате PDF 261 KB...

02 12 2022 10:39:16

СОСТАВ КОСТНОГО МОЗГА И СОДЕРЖАНИЕ В НЕМ ЭРИТРОКЛАЗИЧЕСКИХ КЛАСТЕРОВ ПРИ ПИРОГЕНАЛОВОЙ ЛИХОРАДКЕ

Проведено исследование хаpaктера образования эритроклазических костномозговых кластеров при лихорадке у лабораторных животных. Установлено, что лихорадка сопровождается увеличением клеточности костного мозга, активацией эритроклазического кластерообразования нейтрофильными миелокариоцитами и макрофагами, сопровождающегося усилением экзоцитарного лизиса эритроцитов в кластерах, то есть увеличением цитолитической активности данных миелокариоцитов. ...

01 12 2022 6:39:42

О СТОХАСТИЧЕСКОЙ ГРАМОТНОСТИ ШКОЛЬНИКОВ

Статья в формате PDF 312 KB...

30 11 2022 13:45:35

ПСИХОЛОГО-ПЕДАГОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ РАЗВИТИЯ ПРОФЕССИОНАЛЬНЫХ КОМПЕТЕНЦИЙ СТУДЕНТОВ ИНЖЕНЕРНО-ТЕХНИЧЕСКИХ ВУЗОВ (НА ПРИМЕРЕ ОБУЧЕНИЯ ГРАФИЧЕСКИМ ДИСЦИПЛИНАМ) (монография)

Статья в формате PDF 106 KB...

29 11 2022 21:28:57

НОВЫЙ МЕТОД ДОСТУПА В РОТОВУЮ ПОЛОСТЬ ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ В УСЛОВИЯХ МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКОГО ЭКСПЕРИМЕНТА

Статья в формате PDF 330 KB...

28 11 2022 5:17:45

МЕТОДЫ УСКОРЕННОГО ОСВОЕНИЯ ТЕХНИЧЕСКИХ ДИСЦИПЛИН

Статья в формате PDF 750 KB...

27 11 2022 7:22:52

СОВРЕМЕННОЕ СОСТОЯНИЕ И ПРОБЛЕМЫ РАЗВИТИЯ АКВАКУЛЬТУРЫ РОССИИ

Статья в формате PDF 258 KB...

26 11 2022 12:21:37

ОПЫТ СКРИНИНГОВЫХ УЛЬТРАЗВУКОВЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ ДЕТЕЙ ДЕТСКИХ ДОМОВ И ИНТЕРНАТОВ

Статья в формате PDF 100 KB...

25 11 2022 7:38:28

Особенности психического статуса у больных йоддефицитным зобом после лечения препаратами тиреоидных гормонов

Статья в формате PDF 110 KB...

24 11 2022 7:11:17

РОЛЬ АУДИТОРИИ В УЧЕБНОМ ПРОЦЕССЕ

Статья в формате PDF 108 KB...

23 11 2022 22:27:53

СТРАТЕГИЧЕСКИЕ НАПРАВЛЕНИЯ ЛОКАЛИЗАЦИИ НИЗКОГО УРОВНЯ ЖИЗНИ В РОССИЙСКИХ РЕГИОНАХ

Статья в формате PDF 143 KB...

22 11 2022 19:41:26

СТРЕСС НА РАБОЧЕМ МЕСТЕ

Статья в формате PDF 253 KB...

21 11 2022 22:13:45

Оптимизация заживления слизистой перегородки после септопластики у детей

Статья в формате PDF 102 KB...

20 11 2022 7:16:36

РАСПРОСТРАНЕННОСТЬ ВРОЖДЕННЫХ АНОМАЛИЙ РАЗВИТИЯ НЕРВНОЙ И ДРУГИХ СИСТЕМ ОРГАНИЗМА В РЕСПУБЛИКЕ ТАТАРСТАН (1980-2000 г.г.)

Статья в формате PDF 129 KB...

19 11 2022 13:15:57

МОНИТОРИНГ КОРПОРАТИВНОГО КОММУНИКАЦИОННОГО ОБОРУДОВАНИЯ

Статья в формате PDF 134 KB...

18 11 2022 16:40:54

ПОКАЗАТЕЛИ ПРО – И АНТИОКСИДАНТНОЙ СИСТЕМ КРОВИ В ОЦЕНКЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ТЕРАПИИ БОЛЬНЫХ С НЕЙРОСОСУДИСТЫМИ ФОРМАМИ ЛЮМБОИШАЛГИЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МЕТОДОВ РЕАБИЛИТАЦИОННОЙ И ТРАДИЦИОННОЙ МЕДИЦИНЫ

Статья в формате PDF 112 KB...

17 11 2022 22:29:25

ПОЛИМОРФНЫЕ ВИРУСЫ

Статья в формате PDF 254 KB...

16 11 2022 6:58:58

АУДИТ ТУРИСТСКИХ ОРГАНИЗАЦИЙ (учебное пособие)

Статья в формате PDF 107 KB...

15 11 2022 23:34:51

АКТУАЛЬНЫЕ ПРОБЛЕМЫ РАЗВИТИЯ ЕСТЕСТВЕННОНАУЧНЫХ СПОСОБНОСТЕЙ ШКОЛЬНИКОВ

Формирование эффективной системы работы с детьми, обладающими повышенными естественнонаучными способностями, может стать залогом успешного продвижения экономических и образовательных реформ в нашей стране. ...

14 11 2022 17:45:17

ВЛИЯНИЕ ФИТОНЦИДОВ И ЭФИРНЫХ МАСЕЛ НА МИКРОФЛОРУ ВОЗДУХА

Статья в формате PDF 117 KB...

13 11 2022 10:54:10

РИЗОГЕННАЯ АКТИВНОСТЬ ЧЕРЕНКОВ ВИНОГРАДА ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ РЕГУЛЯТОРОВ РОСТА

Статья в формате PDF 89 KB...

12 11 2022 5:54:38

ИНТЕГРАЦИЯ И КООРДИНАЦИЯ ИНТЕРЕСОВ СУБЪЕКТОВ В СФЕРЕ ОБРАЗОВАНИЯ

Статья в формате PDF 98 KB...

11 11 2022 12:19:53

ОКСИД АЗОТА И СУЛЬФГИДРИЛЬНЫЕ ГРУППЫ В МЕХАНИЗМАХ РАЗВИТИЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ОЖОГА

Статья в формате PDF 245 KB...

10 11 2022 23:31:38

Экология и проблемы питания

Статья в формате PDF 114 KB...

09 11 2022 0:12:30

Основные факторы риска гипертонической болезни в этнических группах республики Мордовия

Статья в формате PDF 104 KB...

08 11 2022 8:42:35

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СООТВЕТСТВИЯ РАЗМЕРОВ ЗУБОВ ПАРАМЕТРАМ ЗУБНЫХ ДУГ ПО ФРОНТАЛЬНО-ДИСТАЛЬНОЙ ДИАГОНАЛИ

Статья в формате PDF 297 KB...

07 11 2022 22:33:10

КЛИНИКО-СОЦИАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЖЕНЩИН, УПОТРЕБЛЯВШИХ ВО ВРЕМЯ БЕРЕМЕННОСТИ АЛКОГОЛЬ

Статья в формате PDF 105 KB...

06 11 2022 10:12:30

КОЭФФИЦИЕНТ ЗАПАСА ПРИ ОБЪЕМНОМ НАПРЯЖЕННОМ СОСТОЯНИИ ДЛЯ НЕЛИНЕЙНО-УПРУГИХ МАТЕРИАЛОВ

Статья в формате PDF 276 KB...

05 11 2022 3:31:18

ОЦЕНКА ГЕМОДИНАМИЧЕСКОГО СТАТУСА НА РАННИХ СТАДИЯХ АРТЕРИАЛЬНОЙ ГИПЕРТЕНЗИИ У МОЛОДЫХ МУЖЧИН

Статья в формате PDF 107 KB...

04 11 2022 5:42:59

МИКРОЭЛЕМЕНТОЗЫ ЧЕЛОВЕКА В УСЛОВИЯХ КРУПНОГО ПРОМЫШЛЕННОГО ГОРОДА

Статья в формате PDF 101 KB...

03 11 2022 10:25:12

МОДЕЛИРОВАНИЕ МИНИАТЮРНОГО ВАКУУМНОГО КЛАПАНА НА НАЧАЛЬНЫХ СТАДИЯХ ПРОЕКТИРОВАНИЯ

Статья в формате PDF 199 KB...

02 11 2022 4:55:52

МЕТОДИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ КЛИНИКО-МОРФОЛОГИЧЕСКИХ КРИТЕРИЕВ ВАРИАНТОВ И АНОМАЛИЙ СТРОЕНИЯ АРТЕРИЙ ГОЛОВНОГО МОЗГА

Статья в формате PDF 126 KB...

01 11 2022 11:55:38

ПОВЫШЕНИЕ ИЗНОСОСТОЙКОСТИ УПОРНЫХ ПОДШИПНИКОВ СКОЛЬЖЕНИЯ ПУТЕМ НАНЕСЕНИЯ ПОЛИМЕРНОГО ПОКРЫТИЯ

Статья в формате PDF 283 KB...

31 10 2022 1:17:41

СИСТЕМОГЕНЕЗ ВНЕШНЕГО ДЫХАНИЯ У ЗДОРОВЫХ ДЕТЕЙ ПРЕПУБЕРТАТНОГО ВОЗРАСТА

Статья в формате PDF 99 KB...

30 10 2022 13:13:16

ЭКОЛОГО–БИОГЕОХИМИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА РАСТИТЕЛЬНОГО ПОКРОВА В ЗОНЕ ВЛИЯНИЯ ГОРНО-ОБОГАТИТЕЛЬНОГО КОМБИНАТА В ТУВЕ

Статья в формате PDF 101 KB...

29 10 2022 20:26:43

НАЦИОНАЛЬНЫЙ ПРИОРИТЕТ «ЗДОРОВЬЕ» И ДЕМОГРАФИЧЕСКАЯ СИТУАЦИЯ

Статья в формате PDF 93 KB...

28 10 2022 22:35:25

ПЕРСПЕКТИВЫ ДИАГНОСТИКИ И ПРОФИЛАКТИКИ ОПУХОЛЕЙ ЯИЧНИКОВ

Предложен арсенал эмбриональных белков – потенциальных маркеров опухолей яичников. Испытано более десятка новых эмбриональных белков, но строго специфичного белка для диагностики опухолей яичников не обнаружено; наиболее перспективным маркером остается СОВА-1. Достойное внимание уделено особенностям эволюции и механизму раннего распространения опухолевого процесса. Обсуждается роль беременности – как средства профилактики опухолевого заболевания яичников. В работе предпринята попытка осмыслить истоки и логику заболевания. ...