АТОМНО-СИЛОВАЯ МИКРОСКОПИЯ КАК МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ СТРУКТУРНЫХ СВОЙСТВ КАРБОГИДРАЗ
Для исследования особенностей надмолекулярной организации ферментов в настоящее время успешно применяются различные сочетания классических методов биохимического анализа и современные биофизические подходы, в том числе метод атомно-силовой микроскопии (АСМ). Объектом исследований является инулиназа из Kluyveromyces marxianus Y-303, которая гидролизует инулин и другие фруктозосодержащие полимеры. Данный фермент может использоваться для получения фруктозы из инулинсодержащего растительного сырья, а изготовленные из инулина фруктозные сиропы применяются в кондитерской промышленности, в лечебном питании, а также для профилактики сахарного диабета, кариеса и ожирения.
Гомогенность фpaкций фермента и его субъединиц контролировали электрофоретическим анализом. Содержание белка определяли методом Лоури, каталитическую активность энзима измеряли спектрофотометрически. Визуализацию олигомерной структуры инулиназы осуществляли с помощью атомно-силовой микроскопии на сканирующем зондовом микроскопе SOLVER P47PRO фирмы НТ-МДТ. Для изучения четвертичной структуры фpaкции фермента инкубировали с додецилсульфатом натрия (ДСН) в концентрации 3,5·10-5 моль/л. При гель-хроматографии на колонке с сефадексом G-150 субъединицы выходят двумя пиками, что свидетельствует об асимметричности их строения. Кажущаяся молекулярная масса субъединиц равна 54,8 кДа и 8,4 кДа. Установлено, что они обладают каталитической активностью 1,35±0,21 ед/мг и 1,05±0,23 ед/мг соответственно.
Нами были получены изображения молекул инулиназы на пластинках свежесколотой слюды. Показано, что данный белок имеет олигомерную структуру и состоит из двух субъединиц, различных по размеру. Длина глобулы намного превышает ее высоту, возможно, что такое уплощение молекулы происходит за счет многоточечного связывания заряженных аминокислотных остатков, расположенных на поверхности белка, с поверхностью слюды. Показано, что высота большей субъединицы (54,8 кДа) превышает высоту малой (8,4 кДа) в 2 раза. При разделении белка на субъединицы происходит изменение их структуры, а следовательно, и размеров по отношению к нативному препарату. При разделении димера инулиназы на мономеры происходит небольшая их компактизация, и субъединицы пpaктически сравниваются по высоте.
Таким образом, результаты экспериментов по гель-хроматографии, электрофорезу и визуализации олигомерной структуры методом атомно-силовой микроскопии, позволяют сделать заключение о том, что четвертичная структура инулиназы Kluyveromyces marxianus представлена двумя субъединицами, различающимися по размерам, молекулярной массе и активности. Процессы диссоциации-ассоциации субъединиц, возможно, принимают участие в процессе регуляции каталитической активности данного фермента.
Статья в формате PDF
119 KB...
23 03 2023 15:23:39
Статья в формате PDF
131 KB...
22 03 2023 11:30:14
Статья в формате PDF
122 KB...
21 03 2023 2:28:59
Статья в формате PDF
197 KB...
20 03 2023 17:41:54
Статья в формате PDF
121 KB...
19 03 2023 3:15:28
Статья в формате PDF
152 KB...
18 03 2023 17:22:21
Статья в формате PDF
219 KB...
17 03 2023 22:56:36
Статья в формате PDF
132 KB...
16 03 2023 10:57:16
Предложен ландшафтный метод районирования торфяных месторождений. Проведен геосистемный анализ и дана хаpaктеристика торфяных ресурсов.
...
15 03 2023 15:52:55
Статья в формате PDF 298 KB...
14 03 2023 4:10:57
Статья в формате PDF
125 KB...
12 03 2023 4:51:47
Статья в формате PDF
138 KB...
11 03 2023 19:40:22
Статья в формате PDF
358 KB...
10 03 2023 2:45:16
08 03 2023 10:27:25
В статье на основании анализа серий срезов зародышей человека изучены особенности формирования артериального русла отделов головного мозга, определены возрастные критерии появления закладок как отделов головного мозга, так и основных сосудов и их ветвей в плане обоснования возможных вариантов строения артериальной сети головного мозга в онтогенезе.
...
07 03 2023 3:36:15
Статья в формате PDF
114 KB...
06 03 2023 13:25:55
05 03 2023 22:10:20
Статья в формате PDF
127 KB...
04 03 2023 4:27:35
Статья в формате PDF
129 KB...
03 03 2023 17:37:56
02 03 2023 20:49:42
01 03 2023 20:27:42
Статья в формате PDF
153 KB...
28 02 2023 11:56:59
Статья в формате PDF
115 KB...
27 02 2023 18:34:43
Статья в формате PDF
119 KB...
26 02 2023 10:11:23
Статья в формате PDF
281 KB...
25 02 2023 5:13:46
Статья в формате PDF
111 KB...
24 02 2023 12:47:50
Статья в формате PDF
104 KB...
23 02 2023 9:53:34
Статья в формате PDF
214 KB...
22 02 2023 5:59:30
Статья в формате PDF
103 KB...
21 02 2023 14:17:36
20 02 2023 17:24:23
Статья в формате PDF
133 KB...
19 02 2023 14:49:53
Статья в формате PDF
312 KB...
18 02 2023 4:30:13
Статья в формате PDF
130 KB...
17 02 2023 3:48:57
Статья в формате PDF
235 KB...
16 02 2023 8:23:20
Статья в формате PDF
114 KB...
14 02 2023 13:12:42
13 02 2023 6:49:46
Статья в формате PDF
112 KB...
12 02 2023 18:11:44
Статья в формате PDF
124 KB...
11 02 2023 5:44:47
Статья в формате PDF
124 KB...
10 02 2023 17:33:32
Предложено устранять внутриутробную гипоксию и асфиксию плода путем искусственной вентиляции его легких дыхательным газом. Для искусственного дыхания внутриутробного плода разработано специальное устройство, названное внутриматочным аквалангом. Внутриматочный акваланг включает аппарат искусственной вентиляции легких и дыхательный контур со специальной раскладной (раздувной) дыхательной маской, надеваемой внутри матки на голову плода наподобие сетчатого шлема. Разработана контролируемая с помощью УЗИ технология введения маски внутрь матки через естественное отверстие в шейке матки, технология одевания дыхательной маски на голову внутриутробного плода при головном его предлежании и технология вентилирования легких внутриутробного плода дыхательным газом.
...
09 02 2023 6:53:42
В работе проведено исследование цитрусового пектина на сорбционную способность по отношению к ионам свинца, а также влияние температуры на сорбционную емкость. В работе проведен расчет физико-химических параметров процесса сорбции ионов свинца цитрусовом пектином, позволивший установить, что процесс образования пектата свинца протекает как реакция первого порядка, а функциональная зависимость сорбции от концентрации ионов свинца подчиняется уравнению изотермы адсорбции Фрейндлиха. Высокая степень извлечения ионов свинца (64% от исходной концентрации) позволяет рекомендовать цитрусовые пектины в качесве энтеросорбентов при свинцовой интоксикации, а также в качестве пищевой добавки к продуктам лечебного и профилактического действия.
...
08 02 2023 23:54:18
Статья в формате PDF
108 KB...
07 02 2023 1:35:33
Статья в формате PDF
106 KB...
06 02 2023 21:55:43
Статья в формате PDF
103 KB...
05 02 2023 23:34:35
Статья в формате PDF
123 KB...
04 02 2023 3:55:36
Статья в формате PDF
122 KB...
03 02 2023 6:24:53
Статья в формате PDF
301 KB...
02 02 2023 1:12:51
Еще:
Поддержать себя -1 :: Поддержать себя -2 :: Поддержать себя -3 :: Поддержать себя -4 :: Поддержать себя -5 :: Поддержать себя -6 :: Поддержать себя -7 :: Поддержать себя -8 :: Поддержать себя -9 :: Поддержать себя -10 :: Поддержать себя -11 :: Поддержать себя -12 :: Поддержать себя -13 :: Поддержать себя -14 :: Поддержать себя -15 :: Поддержать себя -16 :: Поддержать себя -17 :: Поддержать себя -18 :: Поддержать себя -19 :: Поддержать себя -20 :: Поддержать себя -21 :: Поддержать себя -22 :: Поддержать себя -23 :: Поддержать себя -24 :: Поддержать себя -25 :: Поддержать себя -26 :: Поддержать себя -27 :: Поддержать себя -28 :: Поддержать себя -29 :: Поддержать себя -30 :: Поддержать себя -31 :: Поддержать себя -32 :: Поддержать себя -33 :: Поддержать себя -34 :: Поддержать себя -35 :: Поддержать себя -36 :: Поддержать себя -37 :: Поддержать себя -38 ::