АТОМНО-СИЛОВАЯ МИКРОСКОПИЯ КАК МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ СТРУКТУРНЫХ СВОЙСТВ КАРБОГИДРАЗ
Для исследования особенностей надмолекулярной организации ферментов в настоящее время успешно применяются различные сочетания классических методов биохимического анализа и современные биофизические подходы, в том числе метод атомно-силовой микроскопии (АСМ). Объектом исследований является инулиназа из Kluyveromyces marxianus Y-303, которая гидролизует инулин и другие фруктозосодержащие полимеры. Данный фермент может использоваться для получения фруктозы из инулинсодержащего растительного сырья, а изготовленные из инулина фруктозные сиропы применяются в кондитерской промышленности, в лечебном питании, а также для профилактики сахарного диабета, кариеса и ожирения.
Гомогенность фpaкций фермента и его субъединиц контролировали электрофоретическим анализом. Содержание белка определяли методом Лоури, каталитическую активность энзима измеряли спектрофотометрически. Визуализацию олигомерной структуры инулиназы осуществляли с помощью атомно-силовой микроскопии на сканирующем зондовом микроскопе SOLVER P47PRO фирмы НТ-МДТ. Для изучения четвертичной структуры фpaкции фермента инкубировали с додецилсульфатом натрия (ДСН) в концентрации 3,5·10-5 моль/л. При гель-хроматографии на колонке с сефадексом G-150 субъединицы выходят двумя пиками, что свидетельствует об асимметричности их строения. Кажущаяся молекулярная масса субъединиц равна 54,8 кДа и 8,4 кДа. Установлено, что они обладают каталитической активностью 1,35±0,21 ед/мг и 1,05±0,23 ед/мг соответственно.
Нами были получены изображения молекул инулиназы на пластинках свежесколотой слюды. Показано, что данный белок имеет олигомерную структуру и состоит из двух субъединиц, различных по размеру. Длина глобулы намного превышает ее высоту, возможно, что такое уплощение молекулы происходит за счет многоточечного связывания заряженных аминокислотных остатков, расположенных на поверхности белка, с поверхностью слюды. Показано, что высота большей субъединицы (54,8 кДа) превышает высоту малой (8,4 кДа) в 2 раза. При разделении белка на субъединицы происходит изменение их структуры, а следовательно, и размеров по отношению к нативному препарату. При разделении димера инулиназы на мономеры происходит небольшая их компактизация, и субъединицы пpaктически сравниваются по высоте.
Таким образом, результаты экспериментов по гель-хроматографии, электрофорезу и визуализации олигомерной структуры методом атомно-силовой микроскопии, позволяют сделать заключение о том, что четвертичная структура инулиназы Kluyveromyces marxianus представлена двумя субъединицами, различающимися по размерам, молекулярной массе и активности. Процессы диссоциации-ассоциации субъединиц, возможно, принимают участие в процессе регуляции каталитической активности данного фермента.
Статья в формате PDF
148 KB...
31 10 2026 15:59:12
Статья в формате PDF 100 KB...
29 10 2026 22:42:38
Статья в формате PDF
256 KB...
28 10 2026 10:28:20
Статья в формате PDF
170 KB...
27 10 2026 23:44:47
Статья в формате PDF
98 KB...
26 10 2026 21:38:35
Статья в формате PDF
113 KB...
23 10 2026 21:45:47
Статья в формате PDF
124 KB...
22 10 2026 2:29:23
Статья в формате PDF
353 KB...
21 10 2026 21:36:31
Статья в формате PDF
252 KB...
20 10 2026 19:35:11
Статья в формате PDF
253 KB...
19 10 2026 17:41:53
Статья в формате PDF
262 KB...
18 10 2026 13:16:22
Статья в формате PDF
127 KB...
17 10 2026 22:19:44
Статья в формате PDF
133 KB...
16 10 2026 6:22:35
Статья в формате PDF
259 KB...
15 10 2026 13:28:57
Статья в формате PDF
111 KB...
14 10 2026 5:27:20
Статья в формате PDF
99 KB...
13 10 2026 23:43:24
Статья в формате PDF
139 KB...
11 10 2026 12:13:13
Статья в формате PDF
132 KB...
10 10 2026 15:53:56
Статья в формате PDF
83 KB...
09 10 2026 4:37:25
Статья в формате PDF
109 KB...
08 10 2026 9:23:23
Статья в формате PDF
144 KB...
07 10 2026 14:29:27
В статье дана хаpaктеристика отдельных особенностей государственного участия в экономике. В частности, уделено внимание роли государства как гаранта существующей системы прав собственности, монополиста по производству общественных благ и хозяйствующего субъекта, стремящегося к максимизации собственных, неналоговых доходов.
...
06 10 2026 9:14:27
Статья в формате PDF
130 KB...
05 10 2026 9:19:22
Статья в формате PDF
99 KB...
04 10 2026 20:35:25
Статья в формате PDF
314 KB...
03 10 2026 21:55:33
Статья в формате PDF
106 KB...
02 10 2026 7:26:26
Статья в формате PDF
120 KB...
01 10 2026 16:46:57
Статья в формате PDF
121 KB...
30 09 2026 18:14:15
Статья в формате PDF
288 KB...
29 09 2026 14:17:10
Статья в формате PDF
261 KB...
28 09 2026 10:57:26
Статья в формате PDF
152 KB...
26 09 2026 8:46:14
Статья в формате PDF
115 KB...
24 09 2026 11:26:53
Статья в формате PDF
130 KB...
23 09 2026 13:16:26
Статья в формате PDF
100 KB...
22 09 2026 1:10:55
Еще:
Поддержать себя -1 :: Поддержать себя -2 :: Поддержать себя -3 :: Поддержать себя -4 :: Поддержать себя -5 :: Поддержать себя -6 :: Поддержать себя -7 :: Поддержать себя -8 :: Поддержать себя -9 :: Поддержать себя -10 :: Поддержать себя -11 :: Поддержать себя -12 :: Поддержать себя -13 :: Поддержать себя -14 :: Поддержать себя -15 :: Поддержать себя -16 :: Поддержать себя -17 :: Поддержать себя -18 :: Поддержать себя -19 :: Поддержать себя -20 :: Поддержать себя -21 :: Поддержать себя -22 :: Поддержать себя -23 :: Поддержать себя -24 :: Поддержать себя -25 :: Поддержать себя -26 :: Поддержать себя -27 :: Поддержать себя -28 :: Поддержать себя -29 :: Поддержать себя -30 :: Поддержать себя -31 :: Поддержать себя -32 :: Поддержать себя -33 :: Поддержать себя -34 :: Поддержать себя -35 :: Поддержать себя -36 :: Поддержать себя -37 :: Поддержать себя -38 ::
