ОЦЕНКА АДГЕЗИВНОЙ СПОСОБНОСТИ И ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АНТИФУНГАЛЬНЫМ ПРЕПАРАТАМ ГРИБОВ РОДА CANDIDA В КОНТЕКСТЕ ИСТОЧНИКА ИЗОЛЯЦИИ
В тоже время, возрастающая частота кандидозов, в т.ч. вызванных Candida non albicans, может свидетельствовать об импорте инфекции и (или) о замене, в силу каких-то обстоятельств, «добропорядочных» комменсалов на агрессивные («дикие») штаммы.
Целью данного исследования было сравнить природные и клинические изоляты грибов рода Candida:
- по чувствительности к антифунгальным препаратам in vitro;
- по адгезивной способности в системе «Candida spp. - буккальные/вaгинальные эпителиоциты» in vitro.
1. Исследуемые культуры. В работе были использованы:
- культуры грибов рода Candida, выделенные из: а) влагалища женщин с различной гeнитaльной патологией (n = 22); б) ротовой полости больных с кандидозом ротовой полости (n = 12); в) окружающей среды (n = 10);
- штамм Candida albicans ATCC 10231.
Все клинические изоляты первоначально идентифицировали с помощью теста на ростовую трубку. Candida non albicans виды идентифицировали далее с помощью тест-системы «Auxocolor» (BioRad, Франция). Среди штаммов, выделенных из влагалища, одна культура была идентифицирована как Candida krusei, три - Candida glabrata; остальные - Candida albicans. Opaльные изоляты все были представлены видом C. albicans. Природные штаммы были любезно предоставлены кафедрой биологии почв факультета почвоведения МГУ. Среди них было восемь коллекционных (три культуры - Candida guilliermondii, три - Candida tropicalis, одна - Candida maltosa, одна - Rhodotorula rubra) и две музейные культуры. Музейные культуры были реидентифицированы нами как Rhodotorula rubra и Candida kefyr («Auxocolor»).
2. Чувствительность к антифунгальным препаратам. Для определения чувствительности грибов использовали коммерческую тест-систему «Fungitest» (BioRad, Франция), включающую следующие препараты:
- Флуконазол в концентрации 8 и 64 мкг/мл,
- Итpaконазол 0,5 и 4 мкг/мл,
- Кетоконазол 0,5 и 4 мкг/мл,
- Миконазол 0,5 и 8 мкг/мл,
- Амфотерицин В 2 и 8 мкг/мл,
- 5-флюороцитозин 2 и 32 мкг/мл.
Методику проводили согласно прилагаемой инструкции.
Кроме этого, из тех лунок, где результат был расценен как «чувствителен», для оценки эффекта действия на грибы антифунгального препарата, производили высев 10 мкл содержимого каждой лунки микропланшета на среду Сабуро. Если через 48 часов инкубации при 28°С проявлялся рост грибов, то эффект расценивали как фунгистатический; если роста не было - как фунгицидный.
Результаты. Природные изоляты грибов рода Candida проявили наибольшую чувствительность к антифунгальным препаратам (77,3% чувствительных штаммов) по сравнению с клиническими (59,8%). Максимальную активность в отношении природных и клинических изолятов грибов рода Candida продемонстрировали амфотерицин В (100% чувствительных штаммов) и 5-флюороцитозин (100% среди природных по отношению к 77-92% клинических). Природные штаммы, в отличие от клинических изолятов, показали высокую чувствительность кетоконазолу, но оказались устойчивыми по отношению к миконазолу в концентрации 0,5 мкг/мл (при концентрации 8 мкг/мл показали 100% чувствительность). Обращает внимание низкая чувствительность клинических изолятов к флуконазолу при обеих концентрациях. Для всех антимикотиков было отмечено, что если при минимальной концентрации препарат оказывал фунгистатическое действие, то при увеличении концентрации - эффект становился фунгицидным.
Штамм C.albicans АТСС 10231 продемонстрировал 100% чувствительность ко всем антимикотикам, входящим в набор «Fungitest».
Вывод. Природные изоляты проявили более высокую чувствительность к антифунгальным препаратам, чем клинические, что, возможно, является отражением общей тенденции роста числа резистентных к антифунгальным препаратам клинических штаммов грибов рода Candida.
3. Адгезия к эпителиальным клеткам здорового человека in vitro. Для изучения адгезивной способности грибов было выбрано две модели: буккальный и вaгинальный эпителий. Известно, что успешность адгезии (с последующей колонизацией слизистых поверхностей человека) зависит от координированной регуляции большого количества генов и тестирования множества окружающих параметров, включая физиологические, экологической ниши заселения. Исходя из сказанного, адгезия проводилась с созданием следующих условий: температура 37°С, контактный эпителий из ротовой и вaгинальной полости здоровых лиц, pH культуральной среды соответствовал физиологическим показателям той экологической ниши, из которой был получен эпителий (адгезию к вaгинальному эпителию для всех штаммов проводили при рН 4,0-4,5; к буккальному - при рН 7,0).
Адгезивная способность всех изученных культур грибов рода Candida оценивалась на буккальном эпителии. У части культур (17 вaгинальных, 7 opaльных и 5 природных) адгезия оценивалась одновременно на буккальном и вaгинальном эпителии.
С целью определения индекса адгезии (ИА) смешивали равные объемы эпителия и грибов при соотношении клеток 1:100 соответственно. Пробирки встряхивали в ротаторе 1 час при 37°С, 70 об/мин. Затем готовили мaзoк, который окрашивали метиленовой синью. Подсчитывали индекс адгезии - среднее количество адгезированных грибов в пересчете на один эпителиоцит. Определение индекса прочности адгезии (ИПА) проводили следующим образом - эпителиоциты с прикрепившимися кандидами наслаивали на фиколл-верографин (плотность 1,077 г/см3) и центрифугировали при 1000 об/мин 10 минут. Из клеточного осадка делали мaзoк и подсчитывали индекс прочности адгезии (количество кандид в пересчете на один эпителиоцит, оставшихся адгезированными после прохождения через фиколл-верографин). Процент прочноадгезированных кандид по отношению ко всем прикрепившимся определяли по формуле: ИПА/ ИА × 100%.
Статистическую обработку полученных результатов проводили, используя критерий Стьюдента.
Результаты. Сравнение индексов адгезии opaльных, вaгинальных и природных изолятов грибов рода Candida к буккальному эпителию (таблица 1) показало наличие достоверно более низкого показателя у природных изолятов по отношению к клиническим штаммам (p<0,01). В то же время, отношение индекса прочности адгезии к индексу адгезии было достоверно выше среди природных изолятов по сравнению с opaльными и вaгинальными (p<0,05).
Штамм C.albicans АТСС 10231 и природные изоляты имели пpaктически равный индекс адгезии (3,9 и 3,8 соответственно) к буккальному эпителию, но количество прочноадгезированных кандид по отношению ко всем адгезированным клеткам у АТСС штамма было в два раза ниже (25,6% и 50,8% соответственно).
Сравнение индексов адгезии к вaгинальному эпителию показало наличие более высокого показателя у вaгинальных изолятов в сравнении с opaльными (p<0,02) и природными. В то же время, прочность крепления к вaгинальному эпителию изолятов из разных экологических ниш достоверно не различалась.
Вывод. Сравнительный анализ адгезивной способности клинических и природных изолятов грибов рода Candida к эпителиальным клеткам различных экологических ниш тела человека (к буккальным и вaгинальным) показал, что opaльные изоляты демонстрируют достоверно выраженную сайт-специфическую адгезию к буккальному эпителию (p<0,05); вaгинальные изоляты имеют пpaктически равный индекс адгезии к буккальному и вaгинальному эпителию, а природные штаммы - пониженные индексы адгезии к человеческому эпителию в сравнении с клиническими изолятами. Кроме того, у природных изолятов процент прочноадгезированных кандид ассоциировался с типом эпителия, используемым в реакции: был выше для буккального и ниже для вaгинального эпителия в сравнении с клиническими изолятами.
4. Обсуждение результатов исследования. Проведенные исследования показали наличие фенотипических вариаций грибов рода Candida в контексте источника изоляции и позволили высказать несколько соображений.
- Способность вaгинальных изолятов Candida albicans одинаково успешно осуществлять адгезию к клеткам вaгинального и opaльного эпителия (одинаковые индексы адгезии и индексы прочности адгезии) позволяет предположить, что вaгинально-opaльный путь передачи штаммов рода Candida в родах новорожденному является эволюционно-отраженным физиологическим путем создания нормобиоты ротовой полости, но может стать путем патофизиологическим (т.е. путем развития opaльного кандидоза у новорожденных) в условиях клинически выраженного вульвовaгинального кандидоза у матери.
- Хорошо выраженная сайт-специфическая адгезия opaльных изолятов Candida albicans к буккальному эпителию может свидетельствовать об успешном импорте opaльной кандидозной инфекции в госпитальных условиях (через предметы личного пользования: ложка, стакан и т.д.), особенно когда речь идет о заселении ротовой полости новорожденного или грудного младенца.
- Можно предположить, что существенный процент заболеваний (и opaльных, и вaгинальных кандидозов) может быть связан с частыми opaльно-гeнитaльными контактами, а источником кандид могут служить как ротовая, так и вaгинальная (более вероятно) полости ceкcуальных партнеров.
- В связи с тем, что природные штаммы демонстрируют высокую прочность крепления к буккальному эпителию, можно высказать предположение, что при наличии определенных условий природные изоляты имеют шанс стать успешными opaльными комменсалами.
Таблица 1. Сравнение адгезивной способности природных и клинических изолятов грибов рода Candida к буккальному и вaгинальному эпителию
Хаpaктер изолятов |
Буккальный эпителий |
Baгинальный эпителий |
||||
ИА |
ИПА |
% прочноадгезированных кандид |
ИА |
ИПА |
% прочноадгезированных кандид |
|
1. |
2. |
3. |
4. |
5. |
6. |
|
1. Baгинальные изоляты |
6,6±0,8 |
2,1±0,4 |
29,0±3,3 |
7,1±0,6*** |
3,0±0,6 |
39,3±5,7 |
2. Opaльные изоляты |
7,7±1,6**** |
2,8±0,7 |
34,1±3,8 |
4,4±0,9 |
2,0±0,5 |
44,6±4,4 |
3. Природные изоляты |
3,8±0,6* |
1,8±0,4 |
50,8±8,5** |
5,0±1,2 |
1,5±0,4 |
31,0±3,6 |
Примечание:* р<0,01 по отношению к 1.1. и 1.2.
** р<0,05 по отношению к 1.3. и 2.3.
*** р<0,02 по отношению к 2.4. и 3.4.
**** р<0,05 по отношению к 2.4.
Статья в формате PDF
106 KB...
09 07 2025 6:24:53
Статья в формате PDF
101 KB...
08 07 2025 1:49:48
Проблема формирования здоровья детей в дошкольных образовательных учреждениях (ДОУ) остаётся актуальной до сих пор. На основе применения низкоинтенсивного лазерного излучения ( НИЛИ) были разработаны способы низкоинтенсивной лазерной реабилитации (НИЛР). В результате НИЛР детей достигались снижение показателей респираторной заболеваемости, экстренной медицинской помощи, госпитализации, временной утраты трудоспособности родителей. Рост среднего показателя здоровья и показателя динамичности здоровья отражали повышение уровня здоровья детей. НИЛР доступна, эффективна и безопасна.
...
07 07 2025 18:50:58
Статья в формате PDF
264 KB...
06 07 2025 4:30:16
Статья в формате PDF
110 KB...
05 07 2025 9:11:54
Статья в формате PDF
113 KB...
02 07 2025 11:24:39
Статья в формате PDF
102 KB...
30 06 2025 20:50:15
Статья в формате PDF
302 KB...
29 06 2025 18:48:33
Статья в формате PDF
112 KB...
28 06 2025 5:33:19
Статья в формате PDF
123 KB...
27 06 2025 12:57:59
Статья в формате PDF
309 KB...
26 06 2025 4:22:22
Статья в формате PDF
312 KB...
25 06 2025 14:29:47
Статья в формате PDF
250 KB...
24 06 2025 3:35:56
Статья в формате PDF
107 KB...
23 06 2025 15:44:18
Статья в формате PDF
123 KB...
21 06 2025 3:49:11
Статья в формате PDF
216 KB...
20 06 2025 20:29:39
Статья в формате PDF
216 KB...
19 06 2025 13:51:20
Статья в формате PDF
789 KB...
18 06 2025 0:11:38
Статья в формате PDF
157 KB...
17 06 2025 19:19:17
Статья в формате PDF
119 KB...
16 06 2025 19:47:26
Статья посвящена вопросам изучения антимикробных свойств природных биологически активных соединений – флавоноидов и фенолкарбоновых кислот, извлекаемых методом вихревой турбоэкстpaкции из сырья растений рода Veronica L. (сем. Scrophulariaceae Juss.) ПреДypaлья. На основании проведенного исследования авторы делают вывод о возможности применения растительного сырья Veronica L. в медицинской пpaктике.
...
15 06 2025 1:44:54
Статья в формате PDF
121 KB...
13 06 2025 4:11:31
Статья в формате PDF
320 KB...
12 06 2025 13:49:10
Статья в формате PDF
301 KB...
11 06 2025 10:29:11
Статья в формате PDF
119 KB...
10 06 2025 22:46:41
Сравнительным исследованием костного мозга больных, перенесших
острую и хроническую кровопотери, установлено, что после острой кровопотери общее количество миелокариоцитов, количества эритрокариоцитов и гранулоцитов были существенно меньше аналогичных показателей морфологического состава костного мозга после хронической кровопотери. Уменьшение содержания гранулоцитарных миелокариоцитов после острой кровопотери было обусловлено резким снижением количества их созревающих форм, чего не наблюдалось после хронической кровопотери. При этом содержание в костном мозге зрелых форм гранулоцитов было одинаковым после обоих видов кровопотери. Уменьшение содержания в костном мозге после острой кровопотери созревающих форм гранулоцитов сопровождалось значительным уменьшением индекса созревания нейтрофилов, что свидетельствует об ускорении их созревания и выброса в кровеносное русло. Для хронической кровопотери была хаpaктерна эритроидная гиперплазия костного мозга.
...
09 06 2025 1:33:17
Статья в формате PDF
113 KB...
08 06 2025 11:46:21
Статья в формате PDF 119 KB...
07 06 2025 2:35:21
Статья в формате PDF
124 KB...
06 06 2025 11:38:29
На здоровье населения особое влияние оказывают экологические, гигиенические, социально-медицинские причины. В работе была реализована специально созданные социологические карты. Результаты социологического исследования показали, что к причинам, сильно влияющим на здоровье мигрантов-репатриантов относятся экологически нeблагоприятные условия окружающей среды. Заболеваемость мигрантов-репатриантов, проживающих в высокой степени опасности экологически наблагоприятных районах достигает от 2227,9 до 3010,9 ‰. Этот показатель указывает на значительное повышение показателей мигрантов, проживающих районах, где экологическая обстановка средняя, низкая и неопасная .Между загрязнением атмосферного воздуха и почвы и патологиями иммунной системы, минерализацией воды и заболеваниями мочепoлoвoй системы, загрязнением атмосферного воздуха и патологиями дыхательных путей есть прямая и в высокой степени связь.
...
05 06 2025 3:41:57
Статья в формате PDF
121 KB...
04 06 2025 17:42:20
Статья в формате PDF
131 KB...
03 06 2025 7:21:11
Статья в формате PDF
108 KB...
02 06 2025 0:55:34
Статья в формате PDF
140 KB...
01 06 2025 12:52:46
Статья в формате PDF
111 KB...
31 05 2025 9:58:31
Еще:
Поддержать себя -1 :: Поддержать себя -2 :: Поддержать себя -3 :: Поддержать себя -4 :: Поддержать себя -5 :: Поддержать себя -6 :: Поддержать себя -7 :: Поддержать себя -8 :: Поддержать себя -9 :: Поддержать себя -10 :: Поддержать себя -11 :: Поддержать себя -12 :: Поддержать себя -13 :: Поддержать себя -14 :: Поддержать себя -15 :: Поддержать себя -16 :: Поддержать себя -17 :: Поддержать себя -18 :: Поддержать себя -19 :: Поддержать себя -20 :: Поддержать себя -21 :: Поддержать себя -22 :: Поддержать себя -23 :: Поддержать себя -24 :: Поддержать себя -25 :: Поддержать себя -26 :: Поддержать себя -27 :: Поддержать себя -28 :: Поддержать себя -29 :: Поддержать себя -30 :: Поддержать себя -31 :: Поддержать себя -32 :: Поддержать себя -33 :: Поддержать себя -34 :: Поддержать себя -35 :: Поддержать себя -36 :: Поддержать себя -37 :: Поддержать себя -38 ::