ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНА ФАКТОРА НЕКРОЗА ОПУХОЛЕЙ α У БОЛЬНЫХ РЕВМАТОИДНЫМ АРТРИТОМ РУССКОЙ ПОПУЛЯЦИИ ЧЕЛЯБИНСКОЙ ОБЛАСТИ > Полезные советы
Тысяча полезных мелочей    

ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНА ФАКТОРА НЕКРОЗА ОПУХОЛЕЙ α У БОЛЬНЫХ РЕВМАТОИДНЫМ АРТРИТОМ РУССКОЙ ПОПУЛЯЦИИ ЧЕЛЯБИНСКОЙ ОБЛАСТИ

ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНА ФАКТОРА НЕКРОЗА ОПУХОЛЕЙ α У БОЛЬНЫХ РЕВМАТОИДНЫМ АРТРИТОМ РУССКОЙ ПОПУЛЯЦИИ ЧЕЛЯБИНСКОЙ ОБЛАСТИ

Бурмистрова А.Л. Сташкевич Д.С. Суслова Т.А. Хромова Е.Б. Исаканова А.О. Девальд И.В. Статья в формате PDF 145 KB

Данная работа является фрагментом исследований по генетическому полиморфизму цитокинов и направления «HLA и болезни» Научно-учебного Центра Молекулярной иммуногенетики УРО РАН/ ГОУ ВПО «Челябинский государственный университет»/ ОГУП «Челябинская областная станция переливания крови».

Ревматоидный артрит - хроническое системное заболевание соединительной ткани, клинически проявляющееся прогрессирующим поражением преимущественно периферических суставов по типу эрозивно-деструкивного полиартрита [1].

Ревматоидный артрит - мультифакторное заболевание, патологический процесс которого хаpaктеризуется дисбалансом противовоспалительных цитокинов со сдвигом в сторону провоспалительных цитокинов, среди которых большое значение отводится фактору некроза опухолей α (TNFα) [4]. Участие TNFα в развитии предрасположенности и клинических вариантах РА ведется в направлениях оценки содержания TNFα в сыворотке и синовиальной жидкости больных РА, уровня экспрессии м-РНК для TNFα и изучения полиморфизма гена TNFα [3].

Ген TNFα - один из самых полиморфных генов цитокинов, располагается в теломерной части шестой хромосомы в составе генов главного комплекса гистосовместимости (HLA III класса) и хаpaктеризуется высоким количеством SNPs  в промоторной области, наиболее известными являются положения - 308, -238. Однако, есть и другие полиморфизмы типа SNP, например, -863, способные также влиять на экспрессию TNFα. Данные о влиянии SNPs -308,-238, -863 на  экспрессию и на предрасположенность и клинические варианты РА спopны: существуют исследования, в которых показана связь этих полиморфизмов и предрасположенности и тяжести течения РА,  и есть работы опровергающие роль SNPs -308, -238, -863 при РА [2, 3, 4].

Цель исследования: оценка распределения частот аллельных вариантов, генотипов и сочетаний генотипов полиморфизма типа SNP  в точках -863, -308, -238 промотора гена TNFα у здоровых лиц и больных ревматоидным артритом русской этнической группы Челябинской области.

Задачи исследования:

  1. Установить распределение аллелей и генотипов в выборках здоровых лиц и больных РА в зависимости от клинического варианта РА (серопозитивный, серонегативный) РА с системными проявлениями и без них, и возраста начала РА русской этнической группы.
  2. Оценить частоты сочетаний генотипов исследуемых полиморфизмов гена TNFα в выборках больных РА и здоровых лиц.
  3. Оценить шансы возникновения заболевания в зависимости от носительства определенного аллеля, генотипа или комбинации генотипов.

Материалы и методы

Отбор пациентов (92 человек) проводился на кафедре госпитальной терапии Челябинской Государственной Медицинской Академии и в ревматологическом отделении Городской клинической больницы №6 (ГКБ№6) вне зависимости от стадии, клинического варианта течения заболевания и возраста начала РА. Выборка больных РА хаpaктеризовалась следующими показателями: 14 человек с системными проявлениями, полиартрит у 78 человек, серопозитивный вариант - 78, серонегативный - 16, средний возраст начала - 40,5 лет±1,5.

Контрольная группа (212 человек) составлялась из кадровых доноров костного мозга ОГУП Челябинской областной станции переливания крови. Принадлежность к этнической группе определялась по данным генеалогического анамнеза в третьем поколении (согласно рекомендациям 8-го Международного Симпозиума в 1980г., Лос-Анджелес, США). Типирование SNPs  в гене TNFα - ПДРФ - анализ полиморфизма длины рестрикционных фрагментов: амплификация с последующей обработкой ампликонов эндонуклеазами рестрикции NcoI   для положения -308 (G/A), BamHI для положения -238 (G/A) при 37°С, TaiI для положения -863 при 65°С. Детекция результатов - электрофорез в 8% ПААГе. Статистическая обработка результатов: иерархический логлинейный анализ для расчета критерия максимального правдоподобия (G или χ2ML) и отклонений Фримана-Тьюки, позволяющие определить  за счет каких ячеек таблиц сопряженности может получаться значимый эффект или тенденция к различиям. Критерий хи-квадрат с поправкой Йетса на непрерывность применялся для одной степени свободы, когда абсолютные частоты меньше 10. Для оценки вероятности возникновения признака (заболевания или какой-то клинической хаpaктеристики) в зависимости от генетического варианта (аллеля, генотипа, комбинации генотипов) применялся критерий отношения шансов (ОШ) с расчетом 95% ДИ - отношение шансов в одной группе к шансам этого же событии в другой группе. Во всех случаях различия считали статистически значимыми при р≤0,05, незначимыми при р>0,10; для промежуточных значений р (0,05≤р≤ 0,10) обсуждали тенденцию к различиям.

Результаты исследования

Распределение частот генотипов SNPs -308, -238, -863 TNFα в исследуемых выборках подчинялось закону Харди-Вайнберга.

1. Анализ распределения аллелей и генотипов SNPs -308, -238, -863 TNFα в группе здоровых лиц русской этнической группы Челябинской области. В целом распределение аллелей и генотипов исследуемых полиморфизмов соответствует частотам распределения в европеоидных популяциях, хотя имеются этнические особенности в распределении аллелей и генотипов -308 SNP. По частотам аллелей и генотипов SNPs -238, -863 представители русской этнической группы не отличаются от других популяций европеоидного происхождения [2, 5].

2. На втором этапе мы изучали распределение частот аллелей и генотипов в выборке больных РА в сравнении со здоровыми лицами и внутри группы больных. По частотам аллелей -238, -308 выборки больных РА и здоровых лиц не отличаются между собой. В группе больных РА наблюдалось повышение частоты аллеля с заменой -863 на уровне тенденции:19,57% против 14,39% в группе сравнения, χ2ML=2,56, р=0,109, одна степень свободы,  FT для аллеля с заменой составляет 1,216, что соответствует р<0,05, а по критерию ОШ полученные различия не были статистически значимыми ОШ=1,45; 95% ДИ [0,92;2,5]. При выделении отдельно группы женщин, больных РА эта тенденция усилилась (χ2ML=2,879, р=0,089, одна степень свободы, FT для аллеля с заменой составляет 1,14, р<0,05, а для частого аллеля FT равно -1,016, р<0,05, хотя по критерию ОШ различия также были статистически недостоверны ОШ=1,64, 95% ДИ [0,92;2,89]). Возможно, установленный феномен не имеет прогностического значения в отношении развития РА.

Для частот генотипов -863, как и для частот генотипов -238, -308, не получено статистически значимых отличий между выборкой больных РА и группой сравнения.

В продолжение работы мы провели анализ распределения частот аллелей и генотипов внутри группы больных в зависимости от возраста начала РА, клинических вариантов (серопозитивный, серонегативный) и по наличию или отсутствию системных проявлений. Не обнаружено различий для исследуемых полиморфизмов в группах больных с ранним и поздним РА, с серопозитивным и серонегативным вариантом РА.

Для  группы больных с системными проявлениями значим оказался полиморфизм SNP -308, полученные данные приведены в таблице. Как видно из таблицы частоты аллеля с заменой и его гомозиготного и гетерозиготного генотипов повышены в группе больных с системными проявлениями, в то время как снижены частоты аллеля дикого типа и его гомозиготного генотипа. Критерий ОШ показал, что высокопродуктивный аллель (A) с заменой и его гетерозиготный вариант (G/A) предрасполагают к возникновению системных проявлений у больных РА, а аллель нормальной продукции (G) является протекторным для развития системных осложнений.

Таблица 1. Распределение аллелей и генотипов SNP -308 в группах больных РА с системными проявлениями и без них.

аллели

Группа больных с системными проявлениями, n=14

Группа больных без системных проявлений, n=73

χ2,

р -уровень значимости

ОШ, 95% ДИ

абс. зн.

%

абс. зн.

%

A

10

35,7

18

12,3

χ2ML=8,3, р=0,004

3,95;

[1,56;9,95]

G

18

64,3

128

87,7

0,25; [0,1;0,64]

генотипы общий χ2ML= 9,8489; p=0,00727, две степени свободы

A/A

1

7,14

0

0

χ2*=0,86, р=0,35

0,24; [0,027;1,98]

G/A

8

57,14

18

24,7

χ2*=4,47, р=0,035

4,07;

[1,22;13,5]

G/G

5

35,71

55

75,3

χ2*=6,87, р=0,008

0,18;

[0,05;0,6]

*  - χ2 с поправкой Йетса, для одной степени свободы.

3. На третьем этапе работы были изучены комбинации генотипов исследуемых полиморфизмов  и их сочетанное влияние на состояние «больной РА - здоровый индивид». Поскольку эти полиморфизмы располагаются в промоторной области гена то, предположительно, могут сочетано влиять на уровни экспрессии белка [5]. При изучении взаимодействий между SNPs -308, -238, -863 и состояния «больной РА - здоровый индивид» значимо оказалось взаимодействие между генотипами SNP -308 и генотипами -863, выражающееся в повышенной частоте сочетания G/A(-308)-C/A(-863)  в группе больных РА, по сравнению со здоровыми лицами (13,04% против 2,83%, общий χ2ML= 10,160, р=0,11808, 6 степеней свободы, отклонения Фримана-Тьюки в группе больных РА 1,78, в группе контроля - -1,68, р<0,05; для одной степени свободы χ2 с поправкой Йетса  =10,25, р=0,0014; ОШ=5,15, 95% ДИ [1,86;14,24]).  Это сочетание содержит аллели с заменами точке -308 (А) и в точке -863 (А), при этом влияние замен  на экспрессию TNFα, согласно литературным данным противоположно: аллель А -308 повышает продукцию TNFα, тогда как аллель А -863 снижает ее [5]. К настоящему времени мы не можем объяснить этот феномен, вероятно, что это сочетание может быть связано с другими полиморфизмами в гене TNFα, или входить как часть в расширенные гаплотипы HLA.

Выводы:

  1. Установлены хаpaктеристики распределения аллелей и генотипов полиморфизмов типа SNPs -238, -308, -863 у представителей русской этнической группы Южного Урала.
  2. Показано повышение частот аллелей с заменами в точке -863 (на уровне тенденции) в группе больных РА и у женщин больных РА, не имеющее диагностического значения.
  3. SNPs -238, -308, -863 не связаны с предрасположенностью, клиническими вариантами (серопозитивный, серонегативный) и возрастом начала РА.
  4. Значим для формы РА с системными проявлениями, оказался полиморфизм -308 G/A: повышена частота аллеля с заменой (А) и его гомозиготного (А/А) и гетерозиготного генотипов (G/A).
  5. В общей группе больных РА повышена частота сочетания генотипов G/A(-308)-C/A(-863).

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

  1. Шулутко Б.И., Курдыбайло Ф. В., Настин Н.Н и др. Внутренние болезни, т. 2. // СПб.: Изд-во Санкт-Петербургского санитарно - гигиенического мед. института, 1994. - 480с.
  2. Brinkman B.M., Huizinga T.W., Kurban S.S., et al. Tumour necrosis factor alpha gene polymorphisms in rheumatoid arthritis: association with susceptibility to, or severity of, disease?// Br J Rheumatol. - 1997. -Vol. 36. - P.516-521.
  3. Fonseca J. E., Cavaleiro. J. et al. Contribution for new genetic markers of rheumatoid arthritis activity and severity: sequencing of the tumor necrosis factor-alpha gene promoter //Arthritis Research & Therapy. - 2007. - Vol.9. - P.1-10.
  4. Kaijzel E.L., Bayley J-P., et al. Allele-specific quantification of tumor necrosis factor (TNF) transcription and the role of promoter polymorphisms in rheumatoid arthritis patients and healthy individuals // Genes and Immunity. - 2001. - Vol. 2. - P.135-144.
  5. Skoog, T. A., van´t Hooft F., et al. Common functional polymorphism (C→A substitution at position -863) in the promoter region of the tumour necrosis factor-α (TNF-α) gene associated with reduced circulating levels of TNF-α // Hum Mol Genet. - 1999. - Vol.8. - P. 1443-1449.

Работа поддержана грантом Правительства Челябинской области 2007г. (008.04.05-07.БX)



ИССЛЕДОВАНИЕ УСЛОВИЙ ПРИМЕНЕНИЯ РЯДА ОРГАНИЧЕСКИХ РАСТВОРИТЕЛЕЙ ДЛЯ ОЧИСТКИ ИНУЛИНАЗ ИЗ РАЗЛИЧНЫХ ИСТОЧНИКОВ

ИССЛЕДОВАНИЕ УСЛОВИЙ ПРИМЕНЕНИЯ РЯДА ОРГАНИЧЕСКИХ РАСТВОРИТЕЛЕЙ ДЛЯ ОЧИСТКИ ИНУЛИНАЗ ИЗ РАЗЛИЧНЫХ ИСТОЧНИКОВ Разработана методика получения высокоочищенных препаратов инулиназы из продуцентов Aspergillus awamori и Saccharomyces cerevisiae. Исследовано влияние различных органических растворителей на полноту осаждения данного фермента. ...

08 12 2024 17:36:48

УЧАСТИЕ В МЕЖДУНАРОДНОЙ ТОРГОВЛЕ КАК СПОСОБ РЕАЛИЗАЦИИ ВНУТРЕННЕГО ИНТЕРЕСА СТРАНЫ

УЧАСТИЕ В МЕЖДУНАРОДНОЙ ТОРГОВЛЕ КАК СПОСОБ РЕАЛИЗАЦИИ ВНУТРЕННЕГО ИНТЕРЕСА СТРАНЫ Наиболее универсальное объяснение причин внешней торговли дано Э. Хекшером и Б. Олином: страна предлагает на международные рынки те блага, создание которых требует относительно изобильного для данной страны фактора производства. Развивая их идею, можно предположить, что это только начальный этап – этап формирования за счет экспортных доходов запасов фактора «капитал», стратегического в условиях НТП. В настоящее время участие в международной торговле уже используется отдельными странами как наиболее эффективный способ реализации собственных долгосрочных интересов. Мы остановились на примере Китая. ...

03 12 2024 10:55:45

ФОРМА ДВЕНАДЦАТИПЕРСТНОЙ КИШКИ У ПЛОДОВ ЧЕЛОВЕКА

ФОРМА ДВЕНАДЦАТИПЕРСТНОЙ КИШКИ У ПЛОДОВ ЧЕЛОВЕКА Эмбриональная полукольцевидная форма является исходной в морфогенезе дефинитивной двенадцатиперстной кишки человека. Она преобразуется в кольцевидную у большинства плодов десятой недели, последняя в типичную подковообразную форму — к середине утробной жизни человека. ...

22 11 2024 12:15:48

ПРИОРИТЕТ ЕСТЕСТВЕННОНАУЧНОЙ СОСТАВЛЯЮЩЕЙ ОБРАЗОВАНИЯ

ПРИОРИТЕТ ЕСТЕСТВЕННОНАУЧНОЙ СОСТАВЛЯЮЩЕЙ ОБРАЗОВАНИЯ Показано значение естественнонаучной составляющей образования для развития способов умственной деятельности у одаренных детей и значение основополагающих знаний естественных наук для будущих поколений. ...

11 11 2024 2:13:18

МАГНИТОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ В КОМПЛЕКСНОМ БИОТРОПНОМ ВОЗДЕЙСТВИИ НА ОРГАНИЗМ ЧЕЛОВЕКА ЭКСТРЕМАЛЬНЫХ ЭКОЛОГИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ ВЫСОКИХ ШИРОТ: БИОИНФОРМАЦИОННЫЙ АНАЛИЗ

МАГНИТОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ В КОМПЛЕКСНОМ БИОТРОПНОМ ВОЗДЕЙСТВИИ НА ОРГАНИЗМ ЧЕЛОВЕКА ЭКСТРЕМАЛЬНЫХ ЭКОЛОГИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ ВЫСОКИХ ШИРОТ: БИОИНФОРМАЦИОННЫЙ АНАЛИЗ Целью настоящего исследования явилось определение с применением новых современных методов биоинформационного анализа места и роли гелиогеомагнитной активности в комплексном биотропном воздействии на организм человека особых экологических факторов высоких широт. Изучалась сезонная динамика рецидивирования хронических заболеваний внутренних органов (стенокардия, гипертоническая болезнь, хронический бронхит, ревматизм) у жителей г. Сургута за пятилетний период. Параллельно отмечалась среднемecячная динамика геомагнитной активности. Проведенный корреляционный анализ в рамках второй, стохастической (вероятностной) парадигмы показал, что суммарная среднемecячная и сезонная динамика геомагнитных колебаний, выявленная при многолетнем наблюдении на территории Югры, играет существенную роль в течении хронических неинфекционных болезней. Однако в рамках второй парадигмы не представляется возможным определить значимость геомагнитной активности в комплексном биотропном влиянии экстремальных экологических факторов. Разрешение данной проблемы возможно только с позиции третьей, синергетической парадигмы. Применение метода идентификации параметров квазиаттpaкторов в фазовом прострaнcтве состояний позволяет в рамках синергетической парадигмы выявить значимость геомагнитных возмущений в комплексном биотропном воздействии на организм человека нeблагоприятных экологических факторов высоких широт. ...

09 11 2024 9:32:19

ВЫБОР ТЕМПЕРАТУРЫ ОТЖИГА ДВУХФАЗНОЙ ЛАТУНИ ЛМЦА58-2-1

ВЫБОР ТЕМПЕРАТУРЫ ОТЖИГА ДВУХФАЗНОЙ ЛАТУНИ ЛМЦА58-2-1 Статья в формате PDF 126 KB...

08 11 2024 16:28:55

АКТИВНОСТЬ ФОСФОЛИПАЗЫ А2 И СОСТОЯНИЕ ПРОЦЕССОВ ПЕРЕКИСНОГО ОКИСЛЕНИЯ ЛИПИДОВ В ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ У БЕРЕМЕННЫХ С ГЕРПЕС-ВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИЕЙ

АКТИВНОСТЬ ФОСФОЛИПАЗЫ А2 И СОСТОЯНИЕ ПРОЦЕССОВ ПЕРЕКИСНОГО ОКИСЛЕНИЯ ЛИПИДОВ В ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ У БЕРЕМЕННЫХ С ГЕРПЕС-ВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИЕЙ В работе изучено состояние процессов перекисного окисления липидов и содержание фосфолипазы А2 в периферической крови беременных III триместра с обострением гepпeс-вирусной инфекции в зависимости от титра антител IgG к вирусу простого гepпeса 1 типа. Установлено, что обострение гepпeс-вирусной инфекции в период гестации способствует активации процессов перекисного окисления липидов, регистрируемого по содержанию ТБК-активных продуктов (малонового диальдегида), повышению содержания фосфолипазы А2, наиболее выраженное при титре антител IgG к ВПГ-1 1:12800 и является причиной деструктивных процессов в составе липидов эритроцитов. ...

07 11 2024 17:44:58

ВОДА БАЙКАЛА

ВОДА БАЙКАЛА Статья в формате PDF 115 KB...

01 11 2024 4:39:33

РИСКИ В&#8239;ЛЕСНОЙ ОТРАСЛИ

РИСКИ В&#8239;ЛЕСНОЙ ОТРАСЛИ Статья в формате PDF 269 KB...

30 10 2024 23:29:59

Еще:
Поддержать себя -1 :: Поддержать себя -2 :: Поддержать себя -3 :: Поддержать себя -4 :: Поддержать себя -5 :: Поддержать себя -6 :: Поддержать себя -7 :: Поддержать себя -8 :: Поддержать себя -9 :: Поддержать себя -10 :: Поддержать себя -11 :: Поддержать себя -12 :: Поддержать себя -13 :: Поддержать себя -14 :: Поддержать себя -15 :: Поддержать себя -16 :: Поддержать себя -17 :: Поддержать себя -18 :: Поддержать себя -19 :: Поддержать себя -20 :: Поддержать себя -21 :: Поддержать себя -22 :: Поддержать себя -23 :: Поддержать себя -24 :: Поддержать себя -25 :: Поддержать себя -26 :: Поддержать себя -27 :: Поддержать себя -28 :: Поддержать себя -29 :: Поддержать себя -30 :: Поддержать себя -31 :: Поддержать себя -32 :: Поддержать себя -33 :: Поддержать себя -34 :: Поддержать себя -35 :: Поддержать себя -36 :: Поддержать себя -37 :: Поддержать себя -38 ::