ИЗУЧЕНИЕ ЛОКАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА ПО УРОВНЮ НОРМАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ К ИНТЕСТИНАЛЬНОЙ МИКРОФЛОРЕ (БИФИДОБАКТЕРИЯМ) С ПОМОЩЬЮ ЭРИТРОЦИТАРНЫХ ТЕСТ-СИСТЕМ

Слизистые оболочки пищеварительного, дыхательного и мочепoлoвoго тpaктов являются естественными путями проникновения и колонизации для многих патогенных микроорганизмов. Защита этих оболочек обеспечивается иммунокомпетентными клетками, организованными в специальные лимфоидные ткани. Эта, так называемая, мукозная иммунная система является первым барьером на пути инфекций в отличие от системной иммунной системы, обеспечивающей защиту внутренних органов организма. [13]. Филогенетически иммунная система кишечника наиболее древняя, и, как предполагают, ее развитие, предшествовало большинству других лимфоидных структур, в том числе тимуса [16]. Около 70% всех лимфоцитов организма сосредоточены в слизистой оболочке кишечника, выpaбатывая IgA. Кишечный иммунитет сбалансирован между способностью к защитной иммунной реакции по отношению к патогенным микроорганизмам и способностью оставаться толерантным по отношению к огромной нагрузке антигенов, представляемых комменсальными интестинальными микроорганизмами [15].
Нормальная микрофлора кишечника играет важную роль в жизнедеятельности организма. Доказано её благотворное воздействие на физиологию кишечника и организм в целом, что обусловлено защитными, структурными и метаболическими эффектами. Взаимодействие между энтероцитами и микроорганизмами индигенной микрофлоры приводят к формированию на поверхности интестинальных слизистых оболочек защитного биослоя, препятствующего колонизации, адгезии, инвазии и пенетрации патогенных и условно-патогенных микроорганизмов [3]. Одновременно с этим кишечная микрофлора оказывает постоянное стимулирующее воздействие низкой степени на иммунную систему кишечника, что крайне важно для нормального функционирования иммунитета и формирования иммунной толерантности к антигенам индигенной микрофлоры [9, 2]. Желудочно-кишечный тpaкт (ЖКТ) макроорганизма - это открытая биологическая система, которая находится в постоянном контакте с микромиром. Основной принцип действия протективных механизмов, осуществляющих контроль за колонизацией ЖКТ, состоит в способности отличать непатогенные элементы (бактерии-симбионты, пища) от энтеропатогенов. Качественные (видовые) и количественные соотношения между разными группами микроорганизмов хаpaктеризуются определенной стабильностью, что важно для реализации разнообразных функций нормальной микрофлоры, таких как поддержание колонизационной резистентности, участие в процессах пищеварения, синтеза витаминов и бактериоцинов. В лимфоидной ткани, принимающей участие в формировании периферической толерантности к интестинальной микрофлоре, происходит синтез иммуногло6улинов, проявление клеточной цитотоксичности Т-киллерами, продукция цитокинов Т-лимфоцитами, макрофагами и NК-клетками (естественными киллерами) [12]. Утрата «орaльной» толерантности к симбионтной микрофлоре, может привести к выработке специфических иммуноглобулинов, выделение и идентификация которых возможны как из сывороток крови, так и копрологических проб.
Цель работы: показать возможность оценки уровня иммунореактивности организма к индигенной микрофлоре по наличию антител, выявляемых с помощью оригинальных тест- систем методом РНГА в копрофильтратах человека; провести сравнение результатов исследования копрофильтратов с исследованиями сывороток крови.
Материалы и методы исследования
Объектами исследования являлись копрологические пробы пациентов гастроэнтерологического центра при Научном центре проблем здоровья семьи и репродукции человека СО РАМН (ФГБУ «НЦ ПЗСРЧ СО РАМН») с функциональными нарушениями желудочно-кишечного тpaкта, проживающих в г. Иркутске. Образцы сывороток крови взяты у аналогичного контингента пациентов. Всего исследовано около 200 копрологических проб и столько же сывороток. Постановка реакции непрямой (пассивной) гемагглютинации для определения специфических антител производилась с помощью оригинальных тест-систем, изготовленных на основе фpaкций клеточных стенок трех видов бифидобактерий (Bifidobacterium bifidum, B. longum и B. adolescentis) [4, 6]. Для контроля тест-систем использовали специфическую иммунную кроличью сыворотку с титром антител к бифидобактериям не менее 1:64. При обработке материала учитывали условно низкие титры антител, определяемые в разведениях от 1:2 до 1:32, и условно высокие титры - от 1: 64 и выше.
Статистическую обработку данных проводили с использованием программ «Excel» и «Statgrafics». Различия считали достоверными при P ≤ 0,05.
Результаты исследования и их обсуждение
На основе описанных в литературе способов подготовки копрофильтратов для исследования методом ИФА [1, 13] нами был адаптирован свой метод получения копрофильтратов для исследования в РНГА на наличие антител к бифидофлоре (наиболее многочисленной в составе микробиоценоза кишечника). С этой целью отбирали свежие копропробы. Навески исследуемого материала производили на электронных весах, помещая в пластиковые пробирки не более 1 г, приливали к нему 0,9% физиологический раствор в соотношении 1:2, тщательно растирали стеклянной палочкой и центрифугировали при 7000 об/мин. в течение 15 минут. Надосадочную жидкость (копрофильтрат) при помощи пипетки перемещали в чистые пробирки. На поверхность копрофильтрата наслаивали взвесь отмытых формалинизированных эритроцитов и оставляли при комнатной температуре до полного их осаждения, после этого копрофильтрат центрифугировали при 2500-3000 об/мин в течение 10 минут. Надосадочную жидкость титровали в иммунологических планшетах в 8 и более лунках, добавляли в каждую лунку по 25 мкл специфического антигенного диагностикума. Через 20-24 часа визуально определяли титры антител по наличию агглютинации: выпадение эритроцитов в виде точки свидетельствовало об отсутствии агглютинации, при положительной реакции (наличии антител) эритроциты выпадали на дне лунки равным слоем, т.е. в виде зонтика. Все манипуляции осуществлялись при комнатной температуре.
После отработки методики и проведения РНГА на наличие антител к бифидобактериям в копрофильтратах с помощью оригинальных тест-систем было установлено:
- тест-системы качественно улавливали наличие антител в образцах;
- результаты сочетались с нашими предыдущими исследованиями по определению антител в крови и данными по распространенности разных видов бифидобактерий среди детского населения региона, выполненными с помощью молекулярно-генетических исследований (ПЦР) [7, 8].
Проведенные ранее исследования по изучению популяционной иммунореактивности к бифидофлоре у здоровых лиц г. Иркутска (образцы сывороток крови) показали, что основная часть выборки ( > 80%) не имела антител к бифидобактериям или имела их в очень низкой концентрации. Лишь у 10% лиц определялись антитела к бифидобактериям в высоких титрах. Такой профиль распределения показателей концентрации антител пpaктические соответствует нормальному эволюционно закрепленному вариационному ряду - распределению Пуассона. Следовательно, отсутствие антител и (или) наличие их в низкой концентрации для данной популяции можно считать нормой (рис. 1).
Рис. 1. Популяционная иммунореактивность к бифидофлоре (взрослые - 400 сыв., дети - 200 сыв.) г. Иркутск
Результаты исследования копрофильтратов и образцов сывороток пациентов гастроэнтерологического отделения, что наименьший процент выявления высоких титров мукозных и сывороточных антител в выборке (200 обр.) по г. Иркутску был к виду B.longum, а наибольший - к B. bifidum (рис. 2).
Рис. 2. Частота встречаемости высоких титров мукозных и сывороточных антител к разным видам бифидобактерий у населения г. Иркутска (n = 200)
Однако в среднем титры сывороточных антител незначительно выше, чем мукозных. Полагаем, что это можно объяснить бóльшим суммарным количеством агглютинирующих иммуноглобулинов, циркулирующих в крови (в основном классов G и M) по сравнению с ЖКТ, где преобладают иммуноглобулины класса А.
При исследовании копрофильтратов частота выявленния высоких титров мукозных антител среди детей до года составила: к B. bifidum - 15%, B. longum -1% и к B. adolescentis - 3%. У детей от 1 года до 6 лет частота выявления высоких титров мукозных антител к B. bifidum составила 21%, B.longum - 4% и к B.adolescentis - 4%. У детей от 7 до 17 лет по тем же показателям к B. bifidum - 2%, B. longum и B. adolescentis - 0%. У лиц старше 18 лет наличие высоких титров мукозных антител к B. bifidum определялось у 10%, к B. longum и B. adolescentis антитела не регистрировались.
Таким образом, у детей от 1 года до 6 лет при исследовании копрофильтратов в РНГА определена наибольшая реактивность к бифидофлоре, в остальных возрастных группах уровень иммунореактивности либо в норме, либо близок к ней.
Заключение
Анализ копрологических проб с целью выявления антител к: энтеробактериям, HbsAg и ВИЧ проводился ранее другими исследователями с помощью достаточно дорогих тест-систем методом ИФА [1, 13]. Нами разработан способ анализа копрофильтратов на содержание антител к бифидобактериям методом РНГА, с использованием оригинальных и недорогих в изготовлении эритроцитарных диагностических тест-систем. Предлагаемый нами способ позволяет определять как наличие, так и концентрацию противобактериальных антител в копрофильтратах человека. Особо следует отметить неинвазивность способа получения материала для исследования. Наибольшая реактивность интестинального иммунитета к бифидофлоре отмечена у детей от года до 6 лет, в остальных возрастных группах иммунореактивность проявлялась редко. Эти факты требуют дальнейших исследований и осмысления. Возможно, повышенная реактивность к антигенам бифидобактерий у детей раннего возраста может быть в какой-то степени обусловлена активной в последние годы пpaктикой внедрения в организм эндогенных штаммов пробиотических микроорганизмов, используемых в препаратах и продуктах функционального питания (Бифидумбактерин, Бифидок и пр.) для коррекции дисбиозов. Видовая идентификация антител к бифидобактериям позволит получать объективную информацию о степени микроэкологического дисбаланса и, следовательно, определять более адекватные методы коррекции дисбиозов, способствующие формированию нормальной микрофлоры.
Список литературы
- Патент № 2338197 РФ. Способ диагностики выраженности дисбактериоза кишечника / Алешукина А.В.; опубл. 2006.
- Ипатова М.Г., Шумилов П.В., Мухина Ю.Г. и др. Дисрегуляция иммунного ответа на индигенную микрофлору у детей и подростков с воспалительными заболеваниями кишечника// Педиатрия. - 2010. - Т.89, №2. - С. 45-49.
- Копанев Ю.А. Значение кишечной микрофлоры для здоровья человека. Роль пробиотиков и пребиотиков для коррекции и профилактики нарушений микробиоценоза // Трудный пациент. - 2008. - №11. - С. 39-43.
- Патент № 2202801 РФ. Способ получения эритроцитарного антигенного диагностикума / С.И. Лещук, С.М. Попкова, Л.В. Сердюк и др.; опубл. 2007.
- Патент № 2142807 РФ Способ приготовления эритроцитарного иммунодиагностикума и способ оценки иммунорезистентности организма / С.И. Лещук, С.М. Попкова, Л.В. Сердюк [и др]; опубл. 1999.
- Попкова С.М., Лещук С.И., Анненков В.В. и др. Сравнительная хаpaктеристика эритроцитарных иммунодиагностикумов по определению нормальных бактериальных антител // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. - 2007. - №3. - С. 43-48.
- Попкова С.М., Шмелёва Е.А., Злобин В.И. Популяционный уровень иммунореактивности макроорганизма к антигенам микрофлоры человека (на примере взаимоотношений с антигенами C.diphtheriae и Bifidobacterium) // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. - 2003. - №1. - С.164-169.
- Paкова Е.Б., Попкова С.М., Джиоев Ю.П. и др. Видовая архитектоника и плазмидный профиль бифидобактерий кишечной микробиоты у населения Иркутской области // Вестник Российской военно-медицинской Академии. - 2008. - №2 (22), Ч.II. - С. 660-661.
- Хавкин А.И. Микробиоценоз кишечника и иммунитет // Русский медицинский журнал. - 2003. - №11 (3). - С. 122-125.
- Хаитов Р.М. Физиология иммунной системы. - М.: ВИНИТИ РАН, 2001. - С. 223.
- Хаитов Р.М., Пинегин Б.В. Иммунная система ЖКТ: особенности строения и функционирования в норме и патологии // Иммунология. - 1997. - №5. - С. 4-7.
- Хромова С.С., Ефимов, Б.А., Тарабрина Н.П. и др. Иммунорегуляция в системе микрофлора - интестинальный тpaкт // Аллергология и иммунология. - 2004. - Т.5, №2. - С. 265-271.
- Щелкунов С.Н., Саляев Р.К., Рекославская Н.И. и др. Изучение иммуногенных свойств кандидатной съедобной вакцины против вирусов гепатита В и иммунодефицита человека на основе плодов трaнcгенных растений томата // Доклады Академии наук. - 2005. - Т. 401, №5. - С. 709-711.
- Мауеr L. Ога1 tolerance: new approaches, new problems // Сlin. Immunol. - 2000. - №94. - Р.1-8.
-
Mueller C., Macpherson A.J. Layers of mutualism with commensal bacteria protect us from intestinal inflamation //
Gut. - 2006;55:276-284.doi: 10.1136/gut.2004.054098. - Pasquier Du.L, Flajnik M. Origin and evolution of the immune system // In: Paul WE, eds. Fundamental immunology, 4th edn. Philadelphia: Lippincott-Raven, 1999:605-99.
Статья в формате PDF
106 KB...
05 07 2026 1:48:54
Статья в формате PDF
100 KB...
04 07 2026 20:49:10
Статья в формате PDF
110 KB...
03 07 2026 17:30:39
Статья в формате PDF
115 KB...
02 07 2026 16:15:23
Статья в формате PDF
133 KB...
01 07 2026 18:17:38
Статья в формате PDF
123 KB...
30 06 2026 1:55:10
Статья в формате PDF
122 KB...
28 06 2026 0:23:37
Статья в формате PDF
125 KB...
27 06 2026 11:40:47
Статья в формате PDF
319 KB...
26 06 2026 19:30:50
Статья в формате PDF
121 KB...
25 06 2026 19:30:21
Статья в формате PDF
116 KB...
24 06 2026 7:21:48
Статья в формате PDF
121 KB...
22 06 2026 8:48:57
Статья в формате PDF
119 KB...
21 06 2026 23:21:55
Статья в формате PDF
559 KB...
19 06 2026 5:39:29
Статья в формате PDF
124 KB...
18 06 2026 8:23:52
Статья в формате PDF
106 KB...
16 06 2026 17:18:19
Механизмы «хаотической» составляющей в динамике сердечного ритма недостаточно еще ясны и была предпринята попытка выявить их на основе совместного анализа линейных и нелинейных показателей. Показано, что коэффициент корреляции между этими показателями не превышает 0,5. Высказано предположение, что нерегулярные изменения сердечного ритма являются проявлением избирательного усиления одних и подавления других периодических процессов в динамике кардиоритма, как результат различных регуляторных влияний.
...
15 06 2026 1:20:16
Статья в формате PDF
112 KB...
14 06 2026 21:10:32
Статья в формате PDF
104 KB...
13 06 2026 18:23:52
В статье авторами рассмотрены региональные особенности демографической и семейной политики.
...
12 06 2026 13:26:44
Статья в формате PDF
116 KB...
10 06 2026 14:28:29
Статья в формате PDF
313 KB...
09 06 2026 0:18:11
Статья в формате PDF
112 KB...
08 06 2026 18:56:21
После 30 дней адаптации к холоду прессорное действие мезатона на артериальное русло тонкого кишечника уменьшается исключительно за счет снижения чувствительности а1-адренорецепторов на 21 %, а количество активных а1-адренорецепторов нормализовалось. В артериях конечности изменения чувствительности и количества а1-адренорецепторов артерий к мезатону было противоположно кишечнику. Чувствительность а1-адренорецепторов артерий конечности к мезатону нормализовалась и была равна контролю. А количества активных альфа-1-адренорецепторов артерий кожно-мышечной области к мезатону было меньше контроля на 10,3 %.
...
07 06 2026 18:46:29
Статья в формате PDF 109 KB...
06 06 2026 1:35:10
Статья в формате PDF
310 KB...
05 06 2026 21:44:50
Проведен анализ общепринятых учений и научных теорий, имевших широкую аудиторию в вузах и научно-исследовательских институтах прошлого века. Выявлена недостаточность абстpaктной потенции в мыслительной жизни homo sensus, главная альтернатива которой – эмоциональный мир, чувственность и вера. Свойство верить познающего субъекта не носит хаpaктер религиозности, однако имеет общие с ней основания. Роднит религию и научную веру стремление не понять, а принять смутные представления, сулящие сиюминутную пользу и выгоду, объединяет желание увидеть в таинственном и запредельном нечто к себе доброжелательное, освобождающее от мучительного предназначения думать и, следовательно, уводящее от необходимости работать – работать без самообмана, но эффективно и достойно homo sapiens.
...
04 06 2026 6:28:33
Статья в формате PDF
729 KB...
03 06 2026 7:31:58
Статья в формате PDF
113 KB...
02 06 2026 12:37:52
Статья в формате PDF
217 KB...
01 06 2026 23:29:14
Статья в формате PDF
142 KB...
31 05 2026 12:11:15
Статья в формате PDF
163 KB...
30 05 2026 2:40:50
Статья в формате PDF
114 KB...
29 05 2026 23:51:54
Статья в формате PDF
116 KB...
28 05 2026 1:46:56
Статья в формате PDF
106 KB...
27 05 2026 6:24:31
Еще:
Поддержать себя -1 :: Поддержать себя -2 :: Поддержать себя -3 :: Поддержать себя -4 :: Поддержать себя -5 :: Поддержать себя -6 :: Поддержать себя -7 :: Поддержать себя -8 :: Поддержать себя -9 :: Поддержать себя -10 :: Поддержать себя -11 :: Поддержать себя -12 :: Поддержать себя -13 :: Поддержать себя -14 :: Поддержать себя -15 :: Поддержать себя -16 :: Поддержать себя -17 :: Поддержать себя -18 :: Поддержать себя -19 :: Поддержать себя -20 :: Поддержать себя -21 :: Поддержать себя -22 :: Поддержать себя -23 :: Поддержать себя -24 :: Поддержать себя -25 :: Поддержать себя -26 :: Поддержать себя -27 :: Поддержать себя -28 :: Поддержать себя -29 :: Поддержать себя -30 :: Поддержать себя -31 :: Поддержать себя -32 :: Поддержать себя -33 :: Поддержать себя -34 :: Поддержать себя -35 :: Поддержать себя -36 :: Поддержать себя -37 :: Поддержать себя -38 ::