Морфологическая хаpaктеристика колоний стромальных клеток-предшественников в культурах гетеротопных трaнcплантатов костного мозга и селезёнки мышей разного возраста

Авторы
Файлы

Лебединская О.В. Горская Ю.Ф. Куралесова А.И. Статья в формате PDF 106 KB В предыдущих работах выявлено, что число стромальных клоногенных клеток костного мозга и селезёнки (КОК-Ф) и эффективность их клонирования значительно снижается в культурах гетеротопных трaнcплантатов в случаях, когда и донором, и реципиентом служат старые животные (Ю.Ф. Горская с соавт., 2002). Количество ядерных клеток в трaнcплантатах костного мозга быстростареющих мышей (SAMP) увеличивается более чем в 2 раза, если реципиентом являются мыши с нормальным темпом старения (SAMR). Полученные данные позволили сделать вывод, что значительное воздействие на стромальную ткань оказывает весь стареющий организм, что может служить одной из причин развития сенильного остеопороза.

Цель данной работы - выяснить, как влияют возрастные изменения организма и самих стромальных клеток-предшественников (КОК-Ф) гетеротопных трaнcплантатов костного мозга и селезёнки на морфологию колоний, формируемых ими в культурах.

Для посадки гетеротопных трaнcплантатов ½ костного мозга бедра и 1/5 селезёнки от молодых (3 мес.) и старых (24 мес.) мышей линии СВА помещали под почечную капсулу им же в следующих комбинациях доноров и реципиентов. Клеточные суспензии трaнcплантатов эксплантировали в матрасы в 5 мл полной культуральной среды с добавлением фидера. Выращенные культуры фиксировали этанолом и окрашивали азор II-эозином. Учитывались колонии, содержащие не менее 50 фибробластов. Выделяли два основных вида колоний и подсчитывали процентное содержание каждого вида и проводилась статистическая обработка данных.

Компактные колонии состоят из фибробластов, типичных по форме, обладающих высоким пролиферативным потенциалом, что обусловливает их плотное расположение в одном или нескольких центрах. Диффузные колонии хаpaктеризуются наличием в своём составе фибробластов, разобщённых между собой и свободно располагающихся в пределах колонии. Два морфологических вида колоний отражают степень пролиферативной активности входящих в них клеток. Максимальная активность имеет место в колониях с многочисленными активными центрами. Снижение пролиферативной активности наблюдается в диффузном типе колоний.

В результате исследований установлено, что во всех вариантах трaнcплантатов костного мозга, когда донором или реципиентом служит молодой организм, в культурах преобладает компактный тип колоний, сформированных клоногенными предшественниками стромальных фибробластов (68,3-75,7%). Напротив, при пересадке костного мозга от старых мышей старым же животным соотношение типов колоний меняется на обратное - диффузные колонии составляют 66,7%, а компактные - 33,3% (p < 0,05). Данные показатели свидетельствуют о том, что на пролиферативную активность клеток стромы костного мозга оказывают влияние как возрастные изменения самих клеток-предшественников, так и в большей степени воздействие стареющего организма в целом.

Заметное преобладание активных компактных колоний в культурах наблюдается при пересадке трaнcплантатов селезёнки от молодых животных в молодой организм (86,1 и 13,9%, p < 0,01). В других вариантах количество компактных колоний колeблется от 60 до 73,3% (p < 0,05). Следует отметить, что даже при пересадке селезёнки от старого животного старому, в отличие от костного мозга число компактных колоний в культурах остаётся более высоким по сравнению с диффузными (73,3 и 26,6% соответственно). В этом случае можно предположить наличие регулирующего влияния со стороны лимфоидных клеток. В то же время в трaнcплантатах группы М-С количество неактивных в пролиферативном плане диффузных колоний увеличивается почти в 3 раза по сравнению с группой М-М (40 против 13,9%). Таким образом, основываясь на морфологических особенностях колоний стромальных фибробластов в культурах гетеротопных трaнcплантатов селезёнки, можно высказать предположение о регулирующем влиянии на пролиферативную активность КОК-Ф органа, с одной стороны - стареющего организма, понижающего её, с другой стороны - лимфоидных клеток, оказывающих активизирующее действие.

ВЛИЯНИЕ РАЗМЕРА И КРАЕВОГО УГЛА НА ПРОДОЛЖИТЕЛЬНОСТЬ ВРЕМЕНИ ИСПАРЕНИЯ КАПЕЛЬ ВОДЫ

Статья в формате PDF 139 KB...