Клонирование М-сегмента вируса ГЛПС в вектор рGEM-T EASY

Авторы
Файлы

Мухаметханов Н. Х. Кулагин В. В. Алсынбаев М. М. Ткаченко Е. А. Статья в формате PDF 105 KB Вирус ГЛПС серотип Пуумала (PUUV) относится к роду Хантаан (Hantaan) семейства Буньявириде (Bunyaviridae),является основным серотипом, циркулирующий на территории республики Башкортостан и вызывает геморрагическую лихорадку с почечным синдромом. ГЛПС занимает ведущее место среди природно-очаговых инфекций в Башкирии и встречается почти во всех городах и районах республики, составляя более 40% заболеваемости на всей территории Российской Федерации.Актуальность проблемы обусловлена отсутствием тенденции к снижению заболеваемости и отсутствием вакцины. Разработанная южно-корейскими исследователями вакцина на основе пассирования вируса в мозге мышей-сосунков сопряжена с трудоемкостью технологического процесса и опасностью заражения персонала. В связи с чем, перспективным направлением является разработка генно-инженерной вакцины на основе М-сегмента вируса ГЛПС, который кодирует поверхностные гликопротеины G1 и G2. Была выделена вирусная РНК из культуры зараженных клеток Vero E6 гуанидинфенолхлороформным методом , осажденна 2V этанола и растворена в DEPC-обработанной воде с добавлением ингибитора РНКазы. Синтезирована кДНК с использованием прямого праймера 5´-gga gga ccg cca tgg gag aac tta gtc cag-3´. Проведена амплификация сегмента с дополнительным обратным праймером 5´-tta ggg ctt atg ttc ttt cct gta act agg tct-3´. Полученный ПЦРпродукт клонирован в вектор рGEM-T Easy. Штамм E.coli JM109 был трaнcформирован и высеян на селективную среду содержащую ампициллин +IPTG+Xgal. Колонии с рекомбинантной плазмидой отобраны для дальнейшей работы.

ВАСКУЛЯРИЗАЦИЯ ПИЩЕВАРИТЕЛЬНОЙ ТРУБКИ НА ЭТАПАХ ПРЕНАТАЛЬНОГО ОНТОГЕНЕЗА ЧЕЛОВЕКА

Статья в формате PDF 107 KB...