КЛЕТОЧНЫЙ СОСТАВ И ЕГО МОРФОГИСТОХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА В КУЛЬТУРАХ МОНОНУКЛЕАРНЫХ ЛЕЙКОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ЗДОРОВЫХ ДОНОРОВ ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ ЛИПОПОЛИСАХАРИДНЫХ КОМПЛЕКСОВ YERSINIA PESTIS

Авторы
Файлы

Лебединская О.В. Чикилёва И.О. Лебединская Е.А. Шехмаметьев Р.М. Мелехин С.В. Киселевский М.В. Статья в формате PDF 119 KB В последнее десятилетие активно изучается возможность создания противоинфекционных вакцин на основе дендритных клеток (ДК) для профилактики и терапии тяжелых инфекционных заболеваний.

Цель данного исследования - определение клеточного состава и его морфогистохимических особенностей в культурах мононуклеарных лейкоцитов периферической крови (МНПК) 20 здоровых доноров при действии липополисахаридных комплексов (ЛПС) возбудителя чумы (Yersinia pestis).

Мононуклеарные лейкоциты выделялись из периферической крови, стабилизированной гепарином (25 ед./мл). Кровь, разведенную в два раза средой 199, центрифугировали при 400 g в течение 30 минут в градиенте плотности фиколла-урогафина («ПанЭко», Россия, плотностью 1,077 г/см³). Мононуклеарные лейкоциты, образовавшие интерфазное кольцо, собирали пипеткой и трехкратно отмывали в среде 199 («ПанЭко», Россия). После каждой отмывки в 10-кратном объёме среды клетки осаждали центирифугированием при 200 g.

Предварительно культуральную взвесь МНПК инкубировали в течение 6 суток с цитокинами: гранулоцитарно-макрофагальным колониестимулирующим фактором и интерлейкином - 4. Из этой взвеси готовили мазки, которые являлись контрольными. После культивирования с цитокинами в культуральную взвесь МНПК добавляли ЛПС возбудителя чумы. Мазки фиксировали в метиловом спирте и окрашивали азуром II и эозином по методу Романовского-Гимза, метиловым зеленым и пиронином по Браше с контролем РНК-азой для оценки содержания РНК. Проводили ШИК-реакцию по Шабадашу с контрольной обработкой амилазой для выявления гликогена и нейтральных гликозаминогликанов. В окрашенных по Браше на РНК мазках подсчитали количество различных клеток на 1000 клеточных форм.

В контрольной группе преобладающими являлись клетки лимфоидного ряда (588,6 ‰) и зернистые лейкоциты (248,3 ‰). Количество бластных форм было относительно невелико (48,1 ‰). Выявлялись незрелые дендритные клетки - 94,3 ‰, которые по размерам превосходили все другие клетки. Цитоплазма незрелых ДК окрашивалась умеренно пиронинофильно.

При добавлении в культуры ЛПС Yersinia pestis почти вдвое увеличилось число бластных форм (76,8 ‰) и незрелых дендритных клеток (172,3 ‰). Содержание зрелых ДК возрастало от 2,2 ‰ в контроле до 96,4 ‰. Яркая пиронинофильная цитоплазма свидетельствовала о высоком содержании в ней РНК. Почти в 3 раза увеличилось количество плазмоцитов (31,8 ‰). В контроле число этих клеток было 12,2 ‰.

Таким образом, введение в культуры наряду с цитокинами ЛПС возбудителя чумы приводит к активации иммунокомпетентных клеток и индуцирует созревание высокоспециализированных антигенпрезентирующих дендритных клеток.

Работа представлена на научную конференцию с международным участием «Фундаментальные исследования», Доминиканская республика, 5-16 апреля 2006г. Поступила в редакцию 20.03.2006г.

ТВОРЧЕСКИЙ И ЖИЗНЕННЫЙ ПУТЬ ДОКТОРА МЕДИЦИНСКИХ НАУК, ПРОФЕССОРА Н.Ф. РУПАСОВА

Статья в формате PDF 245 KB...