Тысяча полезных мелочей    

Биологические свойства msbB мутантов Y.pestis

Биологические свойства msbB мутантов Y.pestis

Шайхутдинова Р.З Мокриевич А.Н. Дентовская С.В. Анисимов А.П. Статья в формате PDF 110 KB Липоолигосахарид (ЛОС - липополисахарид (ЛПС) R-типа, лишенный О-полисахаридных цепей) - один из важнейших факторов патогенности Y. pestis. Активным центром ЛОС является липид А, с которым связывают токсические свойства молекул ЛПС (Luderitz et al., 1973). Гидрофобная часть липида А состоит из двух b-1,6-связанных остатков D-глюкозамина, ацилированных жирными кислотами по гидроксильным и аминогруппам. Жирнокислотные остатки первого порядка также могут быть ацилированы по гидроксильным группам. Структура ЛПС (ЛОС), в частности, строение липида А определяется условиями среды, окружающей микроорганизм во время его роста (Книрель, Кочетков, 1993). Показано, что повышение температуры культивирования приводит к уменьшению количества жирных кислот в липиде А Y. pestis (Kawahara et al., 2002; Knirel et al., 2003). Вместе с тем, показано, что ЛОС штаммов Y. pestis, выращенных при температуре 28 C более токсичен для мышей, чем ЛОС штаммов Y. pestis, выращенных при температуре 37 C (Зюзина и др., 2002).

Генетические аспекты синтеза ЛПС наиболее полно изучены на моделях Escherichia coli и Salmonella typhimurium. Установлены кластеры генов, определяющие биосинтез липида А, кора и О-антигена. Одним из этапов синтеза липида А является процесс ацилирования, в котором участвует целый ряд ацилтрaнcфераз. Ацилтрaнcфераза MsbB отвечает за присоединение шестого жирнокислотного остатка к пентаацильным вариантам ЛПС (ЛОС) (Raetz, Whitfield, 2002). Мутация по гену msbB в клетках E. coli и сальмонелл приводила к снижению их вирулентности (токсичности) на три-четыре порядка (Raetz, Whitfield, 2002).

Целью исследования было получение штаммов Y. pestis, мутантных по msbB гену и изучение их биологических свойств.

На основе суицидного вектора pCVD442 (Donnenberg, M.S. and Kaper, J.B.,1991) создали рекомбинантную плазмиду pMSB3K, содержащую в своем составе фрагмент хромосомной ДНК Y. pestis КМ215 с msbB геном, в котором 0,66 kb участок структурного гена был замещен 1,264 kb BamHI-фрагментом из плазмиды pUC4K, обеспечивающим устойчивость к канамицину. Полученная плазмида передана методом электропорации в штамм E. coli S17, который обладает tra геном, необходимым для эффективной конъюгативной передачи плазмид, содержащих mob ген. Далее методом конъюгации плазмида pMSB3K передана в ряд реципиентных штаммов Y. pestis. Из трaнcконъюгантов при выращивании в условиях, приводящих к потере суицидного вектора, отобраны мутанты, образующиеся в результате гомологичной рекомбинации участка хромосомы, содержащей интактный msbB ген с его мутантной аллелью в суицидном векторе. Наличие мутации подтверждено методом ПЦР.

Полученные мутанты пpaктически не росли на агаре Хоттингера, в присутствии канамицина. Выращивание на той же среде без хлорида натрия в присутствии канамицина или на агаре Хоттингера без канамицина приводило к более эффективному росту. Скорость миграции ЛОС, выделенного из мутантных штаммов, при электрофоретическом разделении была выше, чем у ЛОС из штаммов "дикого" типа, что подтверждает меньшую степень ацилирования молекул ЛОС из рекомбинантных штаммов. Чувствительность мутантов к катионному антибиотику-полимиксину по сравнению с исходными штаммами, была более чем на два порядка выше. Мутантные клетки и препараты ЛОС, выделенные из них, были в 4-10 раз менее токсичны для мышей, сенсибилизированных актиномицином D.

Работа выполнена в рамках партнерского проекта Международного научно-технического центра (ISTC) #1197p,  поддержанного программой Cooperative Threat Reduction Департамента Обороны США.



БЕРЕГОВАЯ ЗОНА ОЗЕРА БАЙКАЛ В СОВРЕМЕННЫХ УСЛОВИЯХ

БЕРЕГОВАЯ ЗОНА ОЗЕРА БАЙКАЛ В СОВРЕМЕННЫХ УСЛОВИЯХ Статья в формате PDF 119 KB...

04 08 2026 19:12:35

МОДЕЛИРОВАНИЕ ЦЕЛОСТНОГО ОБРАЗОВАТЕЛЬНОГО ПРОСТРАНСТВА

МОДЕЛИРОВАНИЕ ЦЕЛОСТНОГО ОБРАЗОВАТЕЛЬНОГО ПРОСТРАНСТВА В настоящее время важно пройти сложнейший этап перехода к новому типу социально-экономического развития быстро, компетентно, опираясь на собственные творческие возможности. Именно этим целям служит разработанная нами модель педагогических основ формирования целостного образовательного прострaнcтва, основу которого составляет внедрение непрерывного образования в интегрированном профессиональном учебном заведении. Моделирование целостного образовательного прострaнcтва осуществлялось нами через уточнение таких понятий, как «интеграция», «межпредметные связи», «взаимосвязь», интегративно-педагогические закономерности, интегративная деятельность, через изучение опыта зарубежных исследователей, решающих проблемы педагогической интеграции. ...

29 07 2026 9:12:29

ФАЗОВЫЕ РАВНОВЕСИЯ В СИСТЕМЕ BiBr3 – BaBr2

ФАЗОВЫЕ РАВНОВЕСИЯ В СИСТЕМЕ BiBr3 – BaBr2 Статья в формате PDF 335 KB...

24 07 2026 15:22:59

СТЕРЕОТИПЫ РЕЧЕВОГО ПОВЕДЕНИЯ

СТЕРЕОТИПЫ РЕЧЕВОГО ПОВЕДЕНИЯ Статья в формате PDF 327 KB...

20 07 2026 13:53:13

ИЗОТОПЫ СТРОНЦИЯ И НЕОДИМА В ШОШОНИТОВЫХ ГРАНИТОИДАХ

ИЗОТОПЫ СТРОНЦИЯ И НЕОДИМА В ШОШОНИТОВЫХ ГРАНИТОИДАХ Приведены данные по концентрациям и соотношениям изтопов стронция и неодима в шошонитовых гранитоидах Алтае-Саянской складчатой области, Большого Кавказа, Британских каледонид, Шотландии, Западного Кунь-Луня, Бразилии. Выделены 4 подтипа гранитоидов, различающихся степенями изотопной обогощённости и деплетированности. По соотношениям 87Sr/86Sr отмечены широкие вариации значений от 0,7022 (мантийные значения) до 0,712958 (компонент обогащённой мантии c контаминацией корового материала). Все подтипы шошонитовых гранитоидов тяготеют к компонентам обогащённой мантии типов EM I и EM II. Это связывается с допущением о вовлечении в субдукционный процесс нижней части континентальной литосферы, или с субдуцированием в мантию терригенных осадков. ...

14 07 2026 6:22:52

ОБРАБОТКА ТВЕРДОГО ЖЕЛЕЗА ШЛИФОВАНИЕМ

ОБРАБОТКА ТВЕРДОГО ЖЕЛЕЗА ШЛИФОВАНИЕМ Статья в формате PDF 208 KB...

10 07 2026 2:18:22

МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ И СТРУКТУРНЫЕ ОСНОВЫ АУДИОГЕННОЙ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ КРЫС С АБСАНСНОЙ ЭПИЛЕПСИЕЙ

В работе на созданных молекулярно-генетических моделях выявлена ассоциация генотипа А2/А2 локуса TAG 1A гена рецептора дофамина второго типа крыс с повышенной аудиогенной чувствительностью и увеличением удельной площади базолатеральной группировки миндалевидного комплекса по сравнению с крысами А1/А1. ...

07 07 2026 3:24:38

РАЗВИТИЕ СИСТЕМ И ЕГО КРИТЕРИИ

РАЗВИТИЕ СИСТЕМ И ЕГО КРИТЕРИИ Статья в формате PDF 114 KB...

03 07 2026 23:38:55

Еще:
Поддержать себя -1 :: Поддержать себя -2 :: Поддержать себя -3 :: Поддержать себя -4 :: Поддержать себя -5 :: Поддержать себя -6 :: Поддержать себя -7 :: Поддержать себя -8 :: Поддержать себя -9 :: Поддержать себя -10 :: Поддержать себя -11 :: Поддержать себя -12 :: Поддержать себя -13 :: Поддержать себя -14 :: Поддержать себя -15 :: Поддержать себя -16 :: Поддержать себя -17 :: Поддержать себя -18 :: Поддержать себя -19 :: Поддержать себя -20 :: Поддержать себя -21 :: Поддержать себя -22 :: Поддержать себя -23 :: Поддержать себя -24 :: Поддержать себя -25 :: Поддержать себя -26 :: Поддержать себя -27 :: Поддержать себя -28 :: Поддержать себя -29 :: Поддержать себя -30 :: Поддержать себя -31 :: Поддержать себя -32 :: Поддержать себя -33 :: Поддержать себя -34 :: Поддержать себя -35 :: Поддержать себя -36 :: Поддержать себя -37 :: Поддержать себя -38 ::