Биологические свойства msbB мутантов Y.pestis

Генетические аспекты синтеза ЛПС наиболее полно изучены на моделях Escherichia coli и Salmonella typhimurium. Установлены кластеры генов, определяющие биосинтез липида А, кора и О-антигена. Одним из этапов синтеза липида А является процесс ацилирования, в котором участвует целый ряд ацилтрaнcфераз. Ацилтрaнcфераза MsbB отвечает за присоединение шестого жирнокислотного остатка к пентаацильным вариантам ЛПС (ЛОС) (Raetz, Whitfield, 2002). Мутация по гену msbB в клетках E. coli и сальмонелл приводила к снижению их вирулентности (токсичности) на три-четыре порядка (Raetz, Whitfield, 2002).
Целью исследования было получение штаммов Y. pestis, мутантных по msbB гену и изучение их биологических свойств.
На основе суицидного вектора pCVD442 (Donnenberg, M.S. and Kaper, J.B.,1991) создали рекомбинантную плазмиду pMSB3K, содержащую в своем составе фрагмент хромосомной ДНК Y. pestis КМ215 с msbB геном, в котором 0,66 kb участок структурного гена был замещен 1,264 kb BamHI-фрагментом из плазмиды pUC4K, обеспечивающим устойчивость к канамицину. Полученная плазмида передана методом электропорации в штамм E. coli S17, который обладает tra геном, необходимым для эффективной конъюгативной передачи плазмид, содержащих mob ген. Далее методом конъюгации плазмида pMSB3K передана в ряд реципиентных штаммов Y. pestis. Из трaнcконъюгантов при выращивании в условиях, приводящих к потере суицидного вектора, отобраны мутанты, образующиеся в результате гомологичной рекомбинации участка хромосомы, содержащей интактный msbB ген с его мутантной аллелью в суицидном векторе. Наличие мутации подтверждено методом ПЦР.
Полученные мутанты пpaктически не росли на агаре Хоттингера, в присутствии канамицина. Выращивание на той же среде без хлорида натрия в присутствии канамицина или на агаре Хоттингера без канамицина приводило к более эффективному росту. Скорость миграции ЛОС, выделенного из мутантных штаммов, при электрофоретическом разделении была выше, чем у ЛОС из штаммов "дикого" типа, что подтверждает меньшую степень ацилирования молекул ЛОС из рекомбинантных штаммов. Чувствительность мутантов к катионному антибиотику-полимиксину по сравнению с исходными штаммами, была более чем на два порядка выше. Мутантные клетки и препараты ЛОС, выделенные из них, были в 4-10 раз менее токсичны для мышей, сенсибилизированных актиномицином D.
Работа выполнена в рамках партнерского проекта Международного научно-технического центра (ISTC) #1197p, поддержанного программой Cooperative Threat Reduction Департамента Обороны США.
Статья в формате PDF
136 KB...
01 11 2026 12:53:53
Статья в формате PDF
122 KB...
29 10 2026 11:44:55
Статья в формате PDF
249 KB...
28 10 2026 20:31:12
Статья в формате PDF
118 KB...
27 10 2026 22:58:26
Статья в формате PDF
103 KB...
26 10 2026 20:33:13
Статья в формате PDF
117 KB...
24 10 2026 2:12:25
Статья в формате PDF
110 KB...
22 10 2026 2:43:26
21 10 2026 15:47:54
Статья в формате PDF
116 KB...
20 10 2026 14:31:28
Статья в формате PDF
290 KB...
19 10 2026 17:11:26
Статья в формате PDF
111 KB...
18 10 2026 22:13:44
Статья в формате PDF
102 KB...
17 10 2026 0:26:43
Статья в формате PDF
119 KB...
15 10 2026 21:21:27
Плацентарную щелочную фосфатазу (ПЩФ) относят к белкам, ассоциированным с беременностью и опухолевым ростом. ПЩФ образуется в плаценте и фетальных тканях, в крови беременных женщин выявляется с 10–14 недель в количестве от 1,0 до 40,0 Ед/л, сохраняясь в кровотоке после родов в течение 10–14 дней.
ПЩФ является маркёром герминогенных опухолей, обнаруживается в биологических жидкостях, эпителиальных клетках, фибробластах стромы и эндотелии новообразующихся сосудов опухолевой ткани при paке лёгкого и других органов, что следует учитывать при назначении лечения.
...
13 10 2026 6:27:27
Статья в формате PDF
124 KB...
11 10 2026 9:14:57
Статья в формате PDF
206 KB...
09 10 2026 6:43:10
Статья в формате PDF
119 KB...
08 10 2026 9:59:28
Статья в формате PDF
125 KB...
07 10 2026 20:37:26
06 10 2026 18:18:24
Статья в формате PDF
112 KB...
05 10 2026 6:59:25
Статья в формате PDF
232 KB...
04 10 2026 23:21:21
Статья в формате PDF
120 KB...
03 10 2026 15:35:35
Статья в формате PDF
266 KB...
01 10 2026 12:26:56
Статья в формате PDF
107 KB...
30 09 2026 10:33:42
Статья в формате PDF
114 KB...
29 09 2026 13:52:23
Статья в формате PDF 138 KB...
28 09 2026 0:37:16
Статья в формате PDF
300 KB...
27 09 2026 6:27:54
Статья в формате PDF
104 KB...
26 09 2026 21:48:51
25 09 2026 21:19:54
Представлены результаты обследования 1547 детей (817 мальчиков и 730 девочек) в возрасте от 3 до 7 лет. Проведен сравнительный анализ компонентного состава тела у детей с различными типами телосложения.
...
24 09 2026 18:55:25
Статья в формате PDF
134 KB...
23 09 2026 6:25:17
Еще:
Поддержать себя -1 :: Поддержать себя -2 :: Поддержать себя -3 :: Поддержать себя -4 :: Поддержать себя -5 :: Поддержать себя -6 :: Поддержать себя -7 :: Поддержать себя -8 :: Поддержать себя -9 :: Поддержать себя -10 :: Поддержать себя -11 :: Поддержать себя -12 :: Поддержать себя -13 :: Поддержать себя -14 :: Поддержать себя -15 :: Поддержать себя -16 :: Поддержать себя -17 :: Поддержать себя -18 :: Поддержать себя -19 :: Поддержать себя -20 :: Поддержать себя -21 :: Поддержать себя -22 :: Поддержать себя -23 :: Поддержать себя -24 :: Поддержать себя -25 :: Поддержать себя -26 :: Поддержать себя -27 :: Поддержать себя -28 :: Поддержать себя -29 :: Поддержать себя -30 :: Поддержать себя -31 :: Поддержать себя -32 :: Поддержать себя -33 :: Поддержать себя -34 :: Поддержать себя -35 :: Поддержать себя -36 :: Поддержать себя -37 :: Поддержать себя -38 ::