Биологические свойства msbB мутантов Y.pestis

Генетические аспекты синтеза ЛПС наиболее полно изучены на моделях Escherichia coli и Salmonella typhimurium. Установлены кластеры генов, определяющие биосинтез липида А, кора и О-антигена. Одним из этапов синтеза липида А является процесс ацилирования, в котором участвует целый ряд ацилтрaнcфераз. Ацилтрaнcфераза MsbB отвечает за присоединение шестого жирнокислотного остатка к пентаацильным вариантам ЛПС (ЛОС) (Raetz, Whitfield, 2002). Мутация по гену msbB в клетках E. coli и сальмонелл приводила к снижению их вирулентности (токсичности) на три-четыре порядка (Raetz, Whitfield, 2002).
Целью исследования было получение штаммов Y. pestis, мутантных по msbB гену и изучение их биологических свойств.
На основе суицидного вектора pCVD442 (Donnenberg, M.S. and Kaper, J.B.,1991) создали рекомбинантную плазмиду pMSB3K, содержащую в своем составе фрагмент хромосомной ДНК Y. pestis КМ215 с msbB геном, в котором 0,66 kb участок структурного гена был замещен 1,264 kb BamHI-фрагментом из плазмиды pUC4K, обеспечивающим устойчивость к канамицину. Полученная плазмида передана методом электропорации в штамм E. coli S17, который обладает tra геном, необходимым для эффективной конъюгативной передачи плазмид, содержащих mob ген. Далее методом конъюгации плазмида pMSB3K передана в ряд реципиентных штаммов Y. pestis. Из трaнcконъюгантов при выращивании в условиях, приводящих к потере суицидного вектора, отобраны мутанты, образующиеся в результате гомологичной рекомбинации участка хромосомы, содержащей интактный msbB ген с его мутантной аллелью в суицидном векторе. Наличие мутации подтверждено методом ПЦР.
Полученные мутанты пpaктически не росли на агаре Хоттингера, в присутствии канамицина. Выращивание на той же среде без хлорида натрия в присутствии канамицина или на агаре Хоттингера без канамицина приводило к более эффективному росту. Скорость миграции ЛОС, выделенного из мутантных штаммов, при электрофоретическом разделении была выше, чем у ЛОС из штаммов "дикого" типа, что подтверждает меньшую степень ацилирования молекул ЛОС из рекомбинантных штаммов. Чувствительность мутантов к катионному антибиотику-полимиксину по сравнению с исходными штаммами, была более чем на два порядка выше. Мутантные клетки и препараты ЛОС, выделенные из них, были в 4-10 раз менее токсичны для мышей, сенсибилизированных актиномицином D.
Работа выполнена в рамках партнерского проекта Международного научно-технического центра (ISTC) #1197p, поддержанного программой Cooperative Threat Reduction Департамента Обороны США.
В работе изучено состояние процессов перекисного окисления липидов и содержание фосфолипазы А2 в периферической крови беременных III триместра с обострением гepпeс-вирусной инфекции в зависимости от титра антител IgG к вирусу простого гepпeса 1 типа. Установлено, что обострение гepпeс-вирусной инфекции в период гестации способствует активации процессов перекисного окисления липидов, регистрируемого по содержанию ТБК-активных продуктов (малонового диальдегида), повышению содержания фосфолипазы А2, наиболее выраженное при титре антител IgG к ВПГ-1 1:12800 и является причиной деструктивных процессов в составе липидов эритроцитов.
...
21 07 2026 7:20:29
Статья в формате PDF
113 KB...
20 07 2026 5:19:30
19 07 2026 4:46:54
Статья в формате PDF
113 KB...
18 07 2026 20:38:15
17 07 2026 16:29:49
Статья в формате PDF
154 KB...
16 07 2026 5:16:36
Статья в формате PDF
498 KB...
15 07 2026 1:36:17
Статья в формате PDF 133 KB...
13 07 2026 15:55:58
Статья в формате PDF
639 KB...
12 07 2026 3:16:56
Статья в формате PDF
130 KB...
11 07 2026 16:24:54
Статья в формате PDF
104 KB...
09 07 2026 6:11:45
Статья в формате PDF
245 KB...
08 07 2026 10:29:55
Статья в формате PDF
136 KB...
06 07 2026 1:15:35
Статья в формате PDF
113 KB...
05 07 2026 21:43:43
Статья в формате PDF
224 KB...
04 07 2026 3:15:32
Статья в формате PDF
101 KB...
03 07 2026 20:30:19
Статья в формате PDF
197 KB...
02 07 2026 21:53:14
Статья в формате PDF
188 KB...
01 07 2026 6:21:44
Статья в формате PDF
111 KB...
30 06 2026 22:48:28
Статья в формате PDF
114 KB...
28 06 2026 1:36:10
Статья в формате PDF
145 KB...
26 06 2026 20:33:28
Статья в формате PDF
113 KB...
25 06 2026 7:47:30
Статья в формате PDF
237 KB...
24 06 2026 1:34:49
Статья в формате PDF
124 KB...
23 06 2026 1:18:21
Статья в формате PDF
129 KB...
22 06 2026 15:49:46
Статья в формате PDF
307 KB...
20 06 2026 20:20:20
Статья в формате PDF
135 KB...
19 06 2026 15:13:58
Статья в формате PDF
115 KB...
17 06 2026 20:51:59
Статья в формате PDF
104 KB...
16 06 2026 22:43:37
Приведены данные по петрографии, петрологии, геохимии и генезису магматитов боровлянского комплекса Горного Алтая. Гранитоиды отнесены к пералюминиевому I – типу Sr – не деплетиованному, Y – деплетированному. Расплавы для пород боровлянского комплекса образовались в результате мантийно-корового взаимодействия со значительной модификацией мантийной составляющей путём контаминации расплавов из нижней коры. Такие расплавы могут возникать в результате термальной релаксации в нижней коре с плавлением кварцевых эклогитов и гранатовых амфиболитов LIL – обогащённого мантийного клина, а мантийно-производные компоненты – в результате адиабатической декомпрессии в верхней мантии с участием большого количества летучих компонентов.
...
15 06 2026 0:16:18
Статья в формате PDF
346 KB...
14 06 2026 15:27:25
Статья в формате PDF
131 KB...
13 06 2026 1:59:16
Еще:
Поддержать себя -1 :: Поддержать себя -2 :: Поддержать себя -3 :: Поддержать себя -4 :: Поддержать себя -5 :: Поддержать себя -6 :: Поддержать себя -7 :: Поддержать себя -8 :: Поддержать себя -9 :: Поддержать себя -10 :: Поддержать себя -11 :: Поддержать себя -12 :: Поддержать себя -13 :: Поддержать себя -14 :: Поддержать себя -15 :: Поддержать себя -16 :: Поддержать себя -17 :: Поддержать себя -18 :: Поддержать себя -19 :: Поддержать себя -20 :: Поддержать себя -21 :: Поддержать себя -22 :: Поддержать себя -23 :: Поддержать себя -24 :: Поддержать себя -25 :: Поддержать себя -26 :: Поддержать себя -27 :: Поддержать себя -28 :: Поддержать себя -29 :: Поддержать себя -30 :: Поддержать себя -31 :: Поддержать себя -32 :: Поддержать себя -33 :: Поддержать себя -34 :: Поддержать себя -35 :: Поддержать себя -36 :: Поддержать себя -37 :: Поддержать себя -38 ::