Биологические свойства msbB мутантов Y.pestis

Авторы
Файлы

Шайхутдинова Р.З Мокриевич А.Н. Дентовская С.В. Анисимов А.П. Статья в формате PDF 110 KB Липоолигосахарид (ЛОС - липополисахарид (ЛПС) R-типа, лишенный О-полисахаридных цепей) - один из важнейших факторов патогенности Y. pestis. Активным центром ЛОС является липид А, с которым связывают токсические свойства молекул ЛПС (Luderitz et al., 1973). Гидрофобная часть липида А состоит из двух b-1,6-связанных остатков D-глюкозамина, ацилированных жирными кислотами по гидроксильным и аминогруппам. Жирнокислотные остатки первого порядка также могут быть ацилированы по гидроксильным группам. Структура ЛПС (ЛОС), в частности, строение липида А определяется условиями среды, окружающей микроорганизм во время его роста (Книрель, Кочетков, 1993). Показано, что повышение температуры культивирования приводит к уменьшению количества жирных кислот в липиде А Y. pestis (Kawahara et al., 2002; Knirel et al., 2003). Вместе с тем, показано, что ЛОС штаммов Y. pestis, выращенных при температуре 28 C более токсичен для мышей, чем ЛОС штаммов Y. pestis, выращенных при температуре 37 C (Зюзина и др., 2002).

Генетические аспекты синтеза ЛПС наиболее полно изучены на моделях Escherichia coli и Salmonella typhimurium. Установлены кластеры генов, определяющие биосинтез липида А, кора и О-антигена. Одним из этапов синтеза липида А является процесс ацилирования, в котором участвует целый ряд ацилтрaнcфераз. Ацилтрaнcфераза MsbB отвечает за присоединение шестого жирнокислотного остатка к пентаацильным вариантам ЛПС (ЛОС) (Raetz, Whitfield, 2002). Мутация по гену msbB в клетках E. coli и сальмонелл приводила к снижению их вирулентности (токсичности) на три-четыре порядка (Raetz, Whitfield, 2002).

Целью исследования было получение штаммов Y. pestis, мутантных по msbB гену и изучение их биологических свойств.

На основе суицидного вектора pCVD442 (Donnenberg, M.S. and Kaper, J.B.,1991) создали рекомбинантную плазмиду pMSB3K, содержащую в своем составе фрагмент хромосомной ДНК Y. pestis КМ215 с msbB геном, в котором 0,66 kb участок структурного гена был замещен 1,264 kb BamHI-фрагментом из плазмиды pUC4K, обеспечивающим устойчивость к канамицину. Полученная плазмида передана методом электропорации в штамм E. coli S17, который обладает tra геном, необходимым для эффективной конъюгативной передачи плазмид, содержащих mob ген. Далее методом конъюгации плазмида pMSB3K передана в ряд реципиентных штаммов Y. pestis. Из трaнcконъюгантов при выращивании в условиях, приводящих к потере суицидного вектора, отобраны мутанты, образующиеся в результате гомологичной рекомбинации участка хромосомы, содержащей интактный msbB ген с его мутантной аллелью в суицидном векторе. Наличие мутации подтверждено методом ПЦР.

Полученные мутанты пpaктически не росли на агаре Хоттингера, в присутствии канамицина. Выращивание на той же среде без хлорида натрия в присутствии канамицина или на агаре Хоттингера без канамицина приводило к более эффективному росту. Скорость миграции ЛОС, выделенного из мутантных штаммов, при электрофоретическом разделении была выше, чем у ЛОС из штаммов "дикого" типа, что подтверждает меньшую степень ацилирования молекул ЛОС из рекомбинантных штаммов. Чувствительность мутантов к катионному антибиотику-полимиксину по сравнению с исходными штаммами, была более чем на два порядка выше. Мутантные клетки и препараты ЛОС, выделенные из них, были в 4-10 раз менее токсичны для мышей, сенсибилизированных актиномицином D.

Работа выполнена в рамках партнерского проекта Международного научно-технического центра (ISTC) #1197p, поддержанного программой Cooperative Threat Reduction Департамента Обороны США.

КУЛЬТИВИРОВАНИЕ МИКРОБНЫХ КОНСУРЦИУМОВ В МОЛОЧНОЙ СЫВОРОТКЕ

Статья в формате PDF 111 KB...

21 09 2026 16:57:41

ПРИМЕНЕНИЕ ДИОКСИДА УГЛЕРОДА В КАЧЕСТВЕ РАБОЧЕГО ВЕЩЕСТВА ТЕПЛОВОГО НАСОСА НИЗКОТЕМПЕРАТУРНОЙ СУШИЛЬНОЙ УСТАНОВКИ

Статья в формате PDF 119 KB...

20 09 2026 14:47:10

ИЗУЧЕНИЕ ФАЗОВОЙ ДИАГРАММЫ ПЛАВКОСТИ БРОМИДОВ СЕРЕБРА И ЛИТИЯ

Статья в формате PDF 252 KB...

19 09 2026 12:10:21

ПРОГНОЗИРОВАНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛИТОКИНЕТИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ ПРИ УРЕТЕРОЛИТИАЗЕ С ПОМОЩЬЮ НЕЧЕТКОЙ ЛОГИКИ

Статья в формате PDF 264 KB...

18 09 2026 17:43:29

Особенности мембранного пищеварения некоторых карповых видов рыб

Статья в формате PDF 103 KB...

17 09 2026 22:36:38

ОСОБЕННОСТИ ЗАРАСТАНИЯ ОТВАЛОВ НА РАЗНЫХ СТАДИЯХ ВОССТАНОВИТЕЛЬНОЙ СУКЦЕССИИ В КУЗБАССЕ

По материалам геоботанических исследований растительного покрова на отвалах горных пород Кузнецкого угольного бассейна проведен таксономический анализ флористических списков трех стадий восстановительной сукцессии. Определены зональные особенности сукцессионных процессов. Установлены наиболее активные виды с высокими показателями встречаемости. ...

16 09 2026 17:51:51

МОДЕЛИРОВАНИЕ ПРОЦЕССА СТРУЙНОЙ АЭРАЦИИ ЖИДКОСТИ

Статья в формате PDF 115 KB...

15 09 2026 13:13:27

ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ ПИЩЕВОЙ ДОБАВКИ ХИТОЗОЛЬ НА БИОЛОГИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ ИНФУЗОРИЙ TETRAHYMENA PYRIFORMIS И ПРОЯВЛЕНИЕ ПРИЗНАКОВ ХРОНИЧЕСКОГО ДЕРМАТИТА У МЫШЕЙ CBRB

Статья в формате PDF 130 KB...

14 09 2026 22:37:40

ПОВЫШЕНИЕ СТОЙКОСТИ РЕЖУЩЕГО ИНСТРУМЕНТА КАРБОНИТРИРОВАНИЕМ

Статья в формате PDF 299 KB...

13 09 2026 5:17:18

ОСОБЕННОСТИ ПРОТЕОМА РОТОВОЙ ЖИДКОСТИ ПРИ ХРОНИЧЕСКИХ СИНУСИТАХ

Статья в формате PDF 127 KB...

12 09 2026 6:59:23

ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ПРОБЛЕМЫ СТАРЕНИЯ

Статья в формате PDF 94 KB...

11 09 2026 22:41:33

МЕТОД ПРЯМОГО СЧЕТА В ИССЛЕДОВАНИИ РЫНОЧНОЙ СИТУАЦИИ

Статья в формате PDF 116 KB...

10 09 2026 16:10:28

ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛЕЧЕНИЯ БОЛЬНЫХ ТУБЕРКУЛЁЗОМ ОРГАНОВ ДЫХАНИЯ

Статья в формате PDF 100 KB...

09 09 2026 16:20:49

Исследование процесса ферментации творожной сыворотки

Статья в формате PDF 121 KB...

08 09 2026 18:13:33

Метод интегральной оценки качества имущественных объектов в за-дачах управления недвижимостью

Статья в формате PDF 109 KB...

07 09 2026 20:29:55

СПОСОБ ФИТОЛАЗЕРОФОРЕЗА В СОЧЕТАНИИ С ЭЛЕКТРОМИОСТИМУЛЯЦИЕЙ В СПОРТЕ ВЫСШИХ ДОСТИЖЕНИЙ

Статья в формате PDF 102 KB...

06 09 2026 20:19:46

РОЛЬ КАДРОВ В РЕАЛИЗАЦИИ ИННОВАЦИОННОЙ ПОЛИТИКИ ПРЕДПРИЯТИЙ РОССИИ

Статья в формате PDF 527 KB...

05 09 2026 2:19:35

ВАРИАНТ РЕШЕНИЯ ПРОБЛЕМЫ ПЕРЕРАБОТКИ ПОЛИМЕРНЫХ ОТХОДОВ

Статья в формате PDF 106 KB...

04 09 2026 9:21:49

БИБЛИОМЕТРИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ИЗДАТЕЛЬСКИХ ПРОЕКТОВ ПО РАЗНЫМ ОБЛАСТЯМ ЗНАНИЯ, ПОДДЕРЖАННЫХ РОССИЙСКИМ ФОНДОМ ФУНДАМЕНТАЛЬНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ (ИТОГ 15 ЛЕТ)

Рассмотрена финансовая поддержка издательских проектов Российским Фондом Фундаментальных Исследований. Проанализированы количественные хаpaктеристики и динамика результатов конкурсов проектов по разным областям знания. ...

03 09 2026 2:26:12

Изучение у преподавателей готовности к инновационной деятельности

Статья в формате PDF 314 KB...

02 09 2026 5:12:26

ПОПУЛЯЦИОННАЯ СОЦИОМЕТРИКА ОБРАЗОВАТЕЛЬНЫХ ОРГАНИЗАЦИЙ

Образовательные организации и части (студенты, профессорско-преподавательский состав, учебно-вспомогательный персонал и др.) вполне можно представить как популяции. Цель статьи – показать возможности идентификации результатов деятельности вузов биотехническим законом. В каждый момент времени могут образовываться популяции (отличники, середняки и т.д.) или по кастам (преподаватели и др.) по успеваемости в жизни. Рассмотрены распределения результатов тестирования студентов по учебным дисциплинам по общеизвестной шкале 2, 3, 4 и 5. ...