Биологические свойства msbB мутантов Y.pestis
Генетические аспекты синтеза ЛПС наиболее полно изучены на моделях Escherichia coli и Salmonella typhimurium. Установлены кластеры генов, определяющие биосинтез липида А, кора и О-антигена. Одним из этапов синтеза липида А является процесс ацилирования, в котором участвует целый ряд ацилтрaнcфераз. Ацилтрaнcфераза MsbB отвечает за присоединение шестого жирнокислотного остатка к пентаацильным вариантам ЛПС (ЛОС) (Raetz, Whitfield, 2002). Мутация по гену msbB в клетках E. coli и сальмонелл приводила к снижению их вирулентности (токсичности) на три-четыре порядка (Raetz, Whitfield, 2002).
Целью исследования было получение штаммов Y. pestis, мутантных по msbB гену и изучение их биологических свойств.
На основе суицидного вектора pCVD442 (Donnenberg, M.S. and Kaper, J.B.,1991) создали рекомбинантную плазмиду pMSB3K, содержащую в своем составе фрагмент хромосомной ДНК Y. pestis КМ215 с msbB геном, в котором 0,66 kb участок структурного гена был замещен 1,264 kb BamHI-фрагментом из плазмиды pUC4K, обеспечивающим устойчивость к канамицину. Полученная плазмида передана методом электропорации в штамм E. coli S17, который обладает tra геном, необходимым для эффективной конъюгативной передачи плазмид, содержащих mob ген. Далее методом конъюгации плазмида pMSB3K передана в ряд реципиентных штаммов Y. pestis. Из трaнcконъюгантов при выращивании в условиях, приводящих к потере суицидного вектора, отобраны мутанты, образующиеся в результате гомологичной рекомбинации участка хромосомы, содержащей интактный msbB ген с его мутантной аллелью в суицидном векторе. Наличие мутации подтверждено методом ПЦР.
Полученные мутанты пpaктически не росли на агаре Хоттингера, в присутствии канамицина. Выращивание на той же среде без хлорида натрия в присутствии канамицина или на агаре Хоттингера без канамицина приводило к более эффективному росту. Скорость миграции ЛОС, выделенного из мутантных штаммов, при электрофоретическом разделении была выше, чем у ЛОС из штаммов "дикого" типа, что подтверждает меньшую степень ацилирования молекул ЛОС из рекомбинантных штаммов. Чувствительность мутантов к катионному антибиотику-полимиксину по сравнению с исходными штаммами, была более чем на два порядка выше. Мутантные клетки и препараты ЛОС, выделенные из них, были в 4-10 раз менее токсичны для мышей, сенсибилизированных актиномицином D.
Работа выполнена в рамках партнерского проекта Международного научно-технического центра (ISTC) #1197p, поддержанного программой Cooperative Threat Reduction Департамента Обороны США.
Статья в формате PDF
103 KB...
23 03 2026 7:42:18
Статья в формате PDF
105 KB...
22 03 2026 23:53:57
Статья в формате PDF
132 KB...
20 03 2026 14:22:14
Статья в формате PDF
393 KB...
19 03 2026 23:28:13
Статья в формате PDF
209 KB...
17 03 2026 13:34:55
Статья в формате PDF
102 KB...
16 03 2026 17:20:59
Статья в формате PDF
135 KB...
15 03 2026 6:34:24
Статья в формате PDF
109 KB...
14 03 2026 3:15:59
Статья в формате PDF
122 KB...
12 03 2026 0:24:55
Статья в формате PDF
107 KB...
11 03 2026 9:17:42
Статья в формате PDF
125 KB...
10 03 2026 10:14:42
Статья в формате PDF
249 KB...
08 03 2026 0:55:20
Статья в формате PDF
204 KB...
07 03 2026 17:43:22
Статья в формате PDF
115 KB...
06 03 2026 2:42:42
Статья в формате PDF
109 KB...
05 03 2026 2:31:46
Статья в формате PDF
338 KB...
02 03 2026 3:21:58
Статья в формате PDF
120 KB...
01 03 2026 20:14:37
Статья в формате PDF
166 KB...
28 02 2026 11:48:15
Статья в формате PDF
92 KB...
27 02 2026 13:30:47
Статья в формате PDF
134 KB...
24 02 2026 19:15:15
Статья в формате PDF
111 KB...
23 02 2026 23:15:25
Статья в формате PDF
262 KB...
22 02 2026 8:52:57
Статья в формате PDF
112 KB...
21 02 2026 7:11:45
Статья в формате PDF
384 KB...
20 02 2026 23:38:46
Статья в формате PDF
136 KB...
19 02 2026 13:59:21
Статья в формате PDF
132 KB...
18 02 2026 7:56:27
Статья в формате PDF
301 KB...
17 02 2026 8:48:56
Авторы рассматривают роль и значение в общей системе экологической безопасности окружающей среды и человека с целью повышения эффективности трaнcпортного процесса. Приводятся основные требования, касающиеся надежности и безопасности реконструируемых участков автомагистралей «Дон» и «Кавказ». Раскрываются основные направления установки мощных нейтрализаторов геопатогенных зон (ГПЗ).
...
16 02 2026 9:23:45
Предлагается метод измерения температуры, с целью уменьшения погрешности измерений и увеличения точности бесконтактного измерения. Существенной особенностью предлагаемого метода является возможность использования двухступенчатого подхода с предварительной или дополнительной регистрацией состояния системы и теплового излучения для уточнения измерения температуры.
...
15 02 2026 18:26:16
Статья в формате PDF
253 KB...
13 02 2026 5:36:13
Еще:
Поддержать себя -1 :: Поддержать себя -2 :: Поддержать себя -3 :: Поддержать себя -4 :: Поддержать себя -5 :: Поддержать себя -6 :: Поддержать себя -7 :: Поддержать себя -8 :: Поддержать себя -9 :: Поддержать себя -10 :: Поддержать себя -11 :: Поддержать себя -12 :: Поддержать себя -13 :: Поддержать себя -14 :: Поддержать себя -15 :: Поддержать себя -16 :: Поддержать себя -17 :: Поддержать себя -18 :: Поддержать себя -19 :: Поддержать себя -20 :: Поддержать себя -21 :: Поддержать себя -22 :: Поддержать себя -23 :: Поддержать себя -24 :: Поддержать себя -25 :: Поддержать себя -26 :: Поддержать себя -27 :: Поддержать себя -28 :: Поддержать себя -29 :: Поддержать себя -30 :: Поддержать себя -31 :: Поддержать себя -32 :: Поддержать себя -33 :: Поддержать себя -34 :: Поддержать себя -35 :: Поддержать себя -36 :: Поддержать себя -37 :: Поддержать себя -38 ::
